一种TiO2@ox-GQDs纳米光电FLS细胞传感器的应用技术领域本发明涉及一种TiO2@ox-GQDs纳米光电FLS细胞传感器的制备及其应用，该传感器用于的生物组织FLS细胞的检测，属于生物传感检测技术领域。
背景技术：
企业参与科技创新，与科技界联手，实现科技成果的转化，共同为国民经济的发展做贡献，已经成为全社会的共识。验证和完善实验室科研成果，并为我国生命科学的深化研究，积聚巨量数据库和大群体样本库，搭建新的技术平台和支撑系统。鉴于此，本专利将利用TiO2@ox-GQDs纳米复合材料的信号放大作用，利用体系中光致电信号的强度变化来对真实生物FLS细胞经培养后抽提的FLS细胞进行检测，并将所研制的光电生物传感器进一步推广到实际应用中，该方法具有成本低、灵敏度高、特异性好、检测快速等优点，而且制备过程较为简单，大大克服了目前FLS细胞检测方法局限于纯生物领域的弊端，有效拓展了FLS细胞检测方法的范围。
技术实现要素：
本发明的目的之一是对FLS细胞的生物特异亲和性及纳米光电复合材料TiO2@ox-GQDs，制备了一种具备特异性，超灵敏的光电生物传感器；本发明的目的之二是将该传感器用于实体组织抽提的FLS细胞的检测。本发明的技术方案如下：1.一种TiO2@ox-GQDs光电FLS细胞传感器的制备步骤（1）将1.0cm×2.5cm的长方形ITO导电玻璃，依次用丙酮、超纯水、乙醇超声清洗30min，纯氮吹干，将其作为工作电极，铂片为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，构成三电极电解池；（2）在ITO电极表面上，滴涂5~20µLTiO2@ox-GQDs纳米复合材料；TiO2@ox-GQDs纳米复合材料的制备（a）TiO2纳米棒的制备取4~6gTiCl3溶液、3~5gNaCl加入到搅拌着的5~15mL超纯水中，并倒入高压釜中，90~110℃下加热10~14h，自然冷却到25℃，用超纯水、无水乙醇各洗涤3~8次，真空干燥制得TiO2纳米棒；（b）ox-GQDs（氧化石墨烯量子点）的制备取0.5~1.5g石墨，加入到80~120ml、25℃下搅拌的浓硫酸中，加入40~46gNaNO3并冷却到0℃，在剧烈搅拌、低于20℃时缓慢加入2~4gKMnO4，并在110~130℃下加热10~14h，自然冷却到25℃并加入450~550ml超纯水，并使用Na2CO3调节pH至中性，将所得溶液放入透析袋透析2~4d，制得ox-GQDs；（c）TiO2@ox-GQDs纳米复合材料的制备取TiO2、ox-GQDs粉末各1~2g，混合、研磨，加1~2ml超纯水溶解，超声8~12min，-20℃冷冻10~14h，将冰冻好的固体放在冷冻干燥机中干燥20~36h，制得TiO2@ox-GQDs纳米复合材料；（3）继续滴涂10~20µL、5~50µg/mL的目标FLS细胞的CD95抗体到工作电极表面，4℃冰箱中晾干，制得一种TiO2@ox-GQDs光电FLS细胞传感器。2.目标FLS细胞的检测步骤（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂片电极为辅助电极，所制备的TiO2@ox-GQDs光电FLS细胞传感器为工作电极，在10~50mL、pH7~9的PBS，0.1~0.3mmol/L的抗坏血酸缓冲溶液中进行测试；（2）用时间-电流法对目标FLS细胞标准溶液进行检测，输入电压为0.1V，取样间隔20s，取样时间20s，运行时间400s，光源选择600nm，记录电流变化，绘制工作曲线；（3）将待测样品代替目标FLS细胞标准溶液，按照工作曲线的绘制方法进行测定。本发明的成果：（1）该方法不需经过预处理，电极选择性、灵敏度和重现性较好，电极响应快，测得线性范围10~20000cell/mL，检测限为2cell/mL。（2）本发明使用TiO2@ox-GQDs做为光电信标物质，ox-GQDs量子点对TiO2的包覆大大缩短了二者之间的距离，促进了TiO2的光电性能，增强本发明所述传感器的光电性能。（3）本发明所检测FLS细胞均从实际生物组织中提取，具有一定的实用价值。具体实施方式：为进一步说明，结合一下实施例具体说明：实施例1一种TiO2@ox-GQDs纳米光电FLS细胞传感器的制备（1）将1.0cm×2.5cm的长方形ITO导电玻璃，依次用丙酮、超纯水、乙醇超声清洗30min，纯氮吹干，将其作为工作电极，铂片为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，构成三电极电解池；（2）在ITO电极表面上，滴涂5µLTiO2@ox-GQDs纳米复合材料；（3）继续滴涂10µL、5µg/mL的目标FLS细胞的CD95抗体到工作电极表面，4℃冰箱中晾干，制得一种TiO2@ox-GQDs光电FLS细胞传感器。实施例2一种TiO2@ox-GQDs纳米光电FLS细胞传感器的制备（1）将1.0cm×2.5cm的长方形ITO导电玻璃，依次用丙酮、超纯水、乙醇超声清洗30min，纯氮吹干，将其作为工作电极，铂片为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，构成三电极电解池；（2）在ITO电极表面上，滴涂10µLTiO2@ox-GQDs纳米复合材料；（3）继续滴涂15µL、20µg/mL的目标FLS细胞的CD95抗体到工作电极表面，4℃冰箱中晾干，制得一种TiO2@ox-GQDs光电FLS细胞传感器。实施例3一种TiO2@ox-GQDs纳米光电FLS细胞传感器的制备（1）将1.0cm×2.5cm的长方形ITO导电玻璃，依次用丙酮、超纯水、乙醇超声清洗30min，纯氮吹干，将其作为工作电极，铂片为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，构成三电极电解池；（2）在ITO电极表面上，滴涂20µLTiO2@ox-GQDs纳米复合材料；（3）继续滴涂20µL、50µg/mL的目标FLS细胞的CD95抗体到工作电极表面，4℃冰箱中晾干，制得一种TiO2@ox-GQDs光电FLS细胞传感器。实施例4TiO2@ox-GQDs纳米复合材料的制备（a）TiO2纳米棒的制备取4gTiCl3溶液、3gNaCl加入到搅拌着的5mL超纯水中，并倒入高压釜中，90℃下加热10h，自然冷却到25℃，用超纯水、无水乙醇各洗涤3次，真空干燥制得TiO2纳米棒；（b）ox-GQDs（氧化石墨烯量子点）的制备取0.5g石墨，加入到80ml、25℃下搅拌的浓硫酸中，加入40gNaNO3并冷却到0℃，在剧烈搅拌、低于20℃时缓慢加入2gKMnO4，并在110℃下加热10h，自然冷却到25℃并加入450ml超纯水，并使用Na2CO3调节pH至中性，将所得溶液放入透析袋透析2d，制得ox-GQDs；（c）TiO2@ox-GQDs纳米复合材料的制备取TiO2、ox-GQDs粉末各1g，混合、研磨，加1ml超纯水溶解，超声8min，-20℃冷冻10h，将冰冻好的固体放在冷冻干燥机中干燥20h，制得TiO2@ox-GQDs纳米复合材料。实施例5TiO2@ox-GQDs纳米复合材料的制备（a）TiO2纳米棒的制备取5gTiCl3溶液、4gNaCl加入到搅拌着的10mL超纯水中，并倒入高压釜中，100℃下加热12h，自然冷却到25℃，用超纯水、无水乙醇各洗涤5次，真空干燥制得TiO2纳米棒；（b）ox-GQDs（氧化石墨烯量子点）的制备取1g石墨，加入到100ml25℃下搅拌的浓硫酸中，加入43gNaNO3并冷却到0℃，在剧烈搅拌、低于20℃时缓慢加入3gKMnO4，并在120℃下加热12h，自然冷却到25℃并加入500ml超纯水，并使用Na2CO3调节pH至中性，将所得溶液放入透析袋透析3d，制得ox-GQDs；（c）TiO2@ox-GQDs纳米复合材料的制备取TiO2、ox-GQDs粉末各1.5g，混合、研磨，加1.5ml超纯水溶解，超声10min，-20℃冷冻12h，将冰冻好的固体放在冷冻干燥机中干燥24h，制得TiO2@ox-GQDs纳米复合材料。实施例6TiO2@ox-GQDs纳米复合材料的制备（a）TiO2纳米棒的制备取6gTiCl3溶液、5gNaCl加入到搅拌着的15mL超纯水中，并倒入高压釜中，110℃下加热14h，自然冷却到25℃，用超纯水、无水乙醇各洗涤8次，真空干燥制得TiO2纳米棒；（b）ox-GQDs（氧化石墨烯量子点）的制备取1.5g石墨，加入到120ml25℃下搅拌的浓硫酸中，加入46gNaNO3并冷却到0℃，在剧烈搅拌、低于20℃时缓慢加入4gKMnO4，并在130℃下加热14h，自然冷却到25℃并加入550ml超纯水，并使用Na2CO3调节pH至中性，将所得溶液放入透析袋透析4d，制得ox-GQDs；（c）TiO2@ox-GQDs纳米复合材料的制备取TiO2、ox-GQDs粉末各2g，混合、研磨，加2ml超纯水溶解，超声12min，-20℃冷冻14h，将冰冻好的固体放在冷冻干燥机中干燥36h，制得TiO2@ox-GQDs纳米复合材料。实施例7FLS细胞的检测（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂片电极为辅助电极，所制备的TiO2@ox-GQDs光电FLS细胞传感器为工作电极，在10mL、pH为7.4的PBS，0.1mmol/L的抗坏血酸缓冲溶液中进行测试；（2）用时间-电流法对目标FLS细胞标准溶液进行检测，输入电压为0.1V，取样间隔20s，取样时间20s，运行时间400s，光源选择600nm，记录电流变化，绘制工作曲线；（3）将待测样品代替目标FLS细胞标准溶液，按照工作曲线的绘制方法进行测定；（4）线性范围10~20000cell/mL，检测限为2cell/mL。