本发明涉及检测试剂
技术领域：
，是一种临床感染检测试剂及其制备方法。
背景技术：
：丙型肝炎(HepatitisCvirus，HCV)是一种隐匿性、传染性、持续性、进展性疾病，主要经血液传播的由丙型肝炎病毒感染引起的疾病，丙型肝炎慢性化率可高达50％至80％，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌(HCC)，对患者的健康和生命危害极大，已成为严重的社会和公共卫生问题。丙型肝炎的感染呈世界性分布，是欧美及日本等国家终末期肝病的最主要原因。据世界卫生组织统计，全球HCV的感染率约为3％，每年新发丙型肝炎病例约3.5万例。中国CDC报告丙型肝炎病例在最近5年内翻了5倍，总感染人数达4000万，且不能排除存在漏报的可能。我国血清流行病学调查资料显示，我国一般人群抗-HCV阳性率为3.2％。抗-HCV阳性率随年龄增长而逐渐上升，由1岁组的2.0％至50至59岁组的3.9％。男女间无明显差异。HCV的传播途径包括经血液传播、性传播和母婴传播。HCV感染的常用的实验室检测包括血清生化学检测、抗-HCV检测、HCVRNA检测及基因型芯片检测等，但现有的HCV诊断方法敏感性不高、价格贵、用时长。技术实现要素：本发明提供了一种临床感染检测试剂及其制备方法，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决现有的丙型肝炎诊断方法敏感性不高、价格贵、用时长的问题。本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种临床感染检测试剂，按下述方法得到：第一步，配制溶液：1)MES缓冲液的配制：配制浓度为10mmol/L至60mmol/L的MES缓冲液；2)蛋白酶的配制：配制浓度为5U/ml至10U/ml的蛋白酶；3)醋酸盐缓冲液的配制：配制浓度为20mmol/L至50mmol/L的醋酸盐缓冲液；4)溴甲酚紫的配制：配制浓度为2mmol/L至15mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制浓度为30mmol/L至80mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗涤液的配制：配制浓度为0.1g/L至1g/L的洗涤液；7)硫酸汞溶液的制备：称取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中获得1mol/L至5mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亚汞溶液的制备：称取硝酸亚汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中获得3mol/L至8mol/L的硝酸亚汞溶液；9)硝酸镍溶液的制备：称取硝酸镍溶于双蒸水中获得1mol/L至8mol/L的硝酸镍溶液；第二步，将第一步得到的所需量的MES缓冲液、蛋白酶、醋酸盐缓冲液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗涤液、硫酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、硝酸镍溶液按体积比为1:1至1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5:1至1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5混合，即得本发明临床感染检测试剂。下面是对上述发明技术方案之一的进一步优化或/和改进：上述第一步中配制浓度为30mmol/L至40mmol/L的MES缓冲液；或/和，配制浓度为7U/ml至9U/ml的蛋白酶；或/和，配制浓度为30mmol/L至40mmol/L的醋酸盐缓冲液。上述第一步中配制浓度为5mmol/L至10mmol/L的溴甲酚紫；或/和，配制浓度为50mmol/L至70mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；或/和，配制浓度为0.3g/L至0.7g/L的洗涤液。上述第一步中称取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中获得2mol/L至4mol/L的硫酸汞溶液；或/和，称取硝酸亚汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中获得4mol/L至7mol/L的硝酸亚汞溶液。上述第二步中MES缓冲液、蛋白酶、醋酸盐缓冲液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗涤液、硫酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、硝酸镍溶液按体积比为1:1.2至1.4:0.3至0.5:0.2至0.3:1.0至1.2:1.2至1.4:0.3至0.5:0.2至0.3:1.0至1.2混合。本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种临床感染检测试剂的制备方法，按下述步骤进行：第一步，配制溶液：1)MES缓冲液的配制：配制浓度为10mmol/L至60mmol/L的MES缓冲液；2)蛋白酶的配制：配制浓度为5U/ml至10U/ml的蛋白酶；3)醋酸盐缓冲液的配制：配制浓度为20mmol/L至50mmol/L的醋酸盐缓冲液；4)溴甲酚紫的配制：配制浓度为2mmol/L至15mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制浓度为30mmol/L至80mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗涤液的配制：配制浓度为0.1g/L至1g/L的洗涤液；7)硫酸汞溶液的制备：称取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中获得1mol/L至5mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亚汞溶液的制备：称取硝酸亚汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中获得3mol/L至8mol/L的硝酸亚汞溶液；9)硝酸镍溶液的制备：称取硝酸镍溶于双蒸水中获得1mol/L至8mol/L的硝酸镍溶液；第二步，将第一步得到的所需量的MES缓冲液、蛋白酶、醋酸盐缓冲液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗涤液、硫酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、硝酸镍溶液按体积比为1:1至1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5:1至1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5混合，即得本发明临床感染检测试剂。下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：上述第一步中配制浓度为30mmol/L至40mmol/L的MES缓冲液；或/和，配制浓度为7U/ml至9U/ml的蛋白酶；或/和，配制浓度为30mmol/L至40mmol/L的醋酸盐缓冲液。上述第一步中配制浓度为5mmol/L至10mmol/L的溴甲酚紫；或/和，配制浓度为50mmol/L至70mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；或/和，配制浓度为0.3g/L至0.7g/L的洗涤液。上述第一步中称取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中获得2mol/L至4mol/L的硫酸汞溶液；或/和，称取硝酸亚汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中获得4mol/L至7mol/L的硝酸亚汞溶液。上述第二步中MES缓冲液、蛋白酶、醋酸盐缓冲液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗涤液、硫酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、硝酸镍溶液按体积比为1:1.2至1.4:0.3至0.5:0.2至0.3:1.0至1.2:1.2至1.4:0.3至0.5:0.2至0.3:1.0至1.2混合。本发明制得的检测试剂中原材料易得，低廉，制备过程简单，获得的试剂性能稳定，用于丙型肝炎检测具有普适性强、灵敏度高和特异性好特点，检测过程简单、快捷，成本低、重复性好，时间短，易于判断，特别适合于大规模的人群普查及丙型肝炎临床辅助诊断和疗效动态检查。具体实施方式本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。实施例1，该临床感染检测试剂按下述制备方法得到：第一步，配制溶液：1)MES缓冲液的配制：配制浓度为10mmol/L至60mmol/L的MES缓冲液；2)蛋白酶的配制：配制浓度为5U/ml至10U/ml的蛋白酶；3)醋酸盐缓冲液的配制：配制浓度为20mmol/L至50mmol/L的醋酸盐缓冲液；4)溴甲酚紫的配制：配制浓度为2mmol/L至15mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制浓度为30mmol/L至80mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗涤液的配制：配制浓度为0.1g/L至1g/L的洗涤液；7)硫酸汞溶液的制备：称取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中获得1mol/L至5mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亚汞溶液的制备：称取硝酸亚汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中获得3mol/L至8mol/L的硝酸亚汞溶液；9)硝酸镍溶液的制备：称取硝酸镍溶于双蒸水中获得1mol/L至8mol/L的硝酸镍溶液；第二步，将第一步得到的所需量的MES缓冲液、蛋白酶、醋酸盐缓冲液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗涤液、硫酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、硝酸镍溶液按体积比为1:1至1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5:1至1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5混合，即得本发明临床感染检测试剂。实施例2，该临床感染检测试剂按下述制备方法得到：第一步，配制溶液：1)MES缓冲液的配制：配制浓度为10mmol/L或60mmol/L的MES缓冲液；2)蛋白酶的配制：配制浓度为5U/ml或10U/ml的蛋白酶；3)醋酸盐缓冲液的配制：配制浓度为20mmol/L或50mmol/L的醋酸盐缓冲液；4)溴甲酚紫的配制：配制浓度为2mmol/L或15mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制浓度为30mmol/L或80mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗涤液的配制：配制浓度为0.1g/L或1g/L的洗涤液；7)硫酸汞溶液的制备：称取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中获得1mol/L或5mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亚汞溶液的制备：称取硝酸亚汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中获得3mol/L或8mol/L的硝酸亚汞溶液；9)硝酸镍溶液的制备：称取硝酸镍溶于双蒸水中获得1mol/L或8mol/L的硝酸镍溶液；第二步，将第一步得到的所需量的MES缓冲液、蛋白酶、醋酸盐缓冲液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗涤液、硫酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、硝酸镍溶液按体积比为1:1或1.6:0.1或0.7:0.2或0.3:0.7或1.5:1或1.6:0.1至0.7:0.2至0.3:0.7至1.5混合，即得本发明临床感染检测试剂。实施例3，作为上述实施例优化，第一步中配制浓度为30mmol/L至40mmol/L的MES缓冲液。实施例4，作为上述实施例优化，第一步中配制浓度为7U/ml至9U/ml的蛋白酶。实施例5，作为上述实施例优化，第一步中配制浓度为30mmol/L至40mmol/L的醋酸盐缓冲液。实施例6，作为上述实施例优化，第一步中配制浓度为5mmol/L至10mmol/L的溴甲酚紫。实施例7，作为上述实施例优化，第一步中配制浓度为50mmol/L至70mmol/L的烷基聚葡萄糖苷。实施例8，作为上述实施例优化，第一步中配制浓度为0.3g/L至0.7g/L的洗涤液。实施例9，作为上述实施例优化，第一步中称取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中获得2mol/L至4mol/L的硫酸汞溶液。实施例10，作为上述实施例优化，第一步中称取硝酸亚汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中获得4mol/L至7mol/L的硝酸亚汞溶液。实施例11，作为上述实施例优化，第二步中MES缓冲液、蛋白酶、醋酸盐缓冲液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗涤液、硫酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、硝酸镍溶液按体积比为1:1.2至1.4:0.3至0.5:0.2至0.3:1.0至1.2:1.2至1.4:0.3至0.5:0.2至0.3:1.0至1.2混合。实施例12，该临床感染检测试剂按下述制备方法得到：第一步，配制溶液：1)MES缓冲液的配制：配制浓度为10mmol/L的MES缓冲液；2)蛋白酶的配制：配制浓度为5U/ml的蛋白酶；3)醋酸盐缓冲液的配制：配制浓度为20mmol/L的醋酸盐缓冲液；4)溴甲酚紫的配制：配制浓度为2mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制浓度为30mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗涤液的配制：配制浓度为0.1g/L的洗涤液；7)硫酸汞溶液的制备：称取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中获得1mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亚汞溶液的制备：称取硝酸亚汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中获得3mol/L的硝酸亚汞溶液；9)硝酸镍溶液的制备：称取硝酸镍溶于双蒸水中获得1mol/L的硝酸镍溶液；第二步，将第一步得到的所需量的MES缓冲液、蛋白酶、醋酸盐缓冲液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗涤液、硫酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、硝酸镍溶液按体积比为1:1:0.1:0.2:0.7:1:0.1:0.2:0.7混合，即得本发明临床感染检测试剂。实施例13，该临床感染检测试剂按下述制备方法得到：第一步，配制溶液：1)MES缓冲液的配制：配制浓度为60mmol/L的MES缓冲液；2)蛋白酶的配制：配制浓度为10U/ml的蛋白酶；3)醋酸盐缓冲液的配制：配制浓度为50mmol/L的醋酸盐缓冲液；4)溴甲酚紫的配制：配制浓度为15mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制浓度为80mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗涤液的配制：配制浓度为1g/L的洗涤液；7)硫酸汞溶液的制备：称取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中获得5mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亚汞溶液的制备：称取硝酸亚汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中获得8mol/L的硝酸亚汞溶液；9)硝酸镍溶液的制备：称取硝酸镍溶于双蒸水中获得8mol/L的硝酸镍溶液；第二步，将第一步得到的所需量的MES缓冲液、蛋白酶、醋酸盐缓冲液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗涤液、硫酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、硝酸镍溶液按体积比为1:1.6:0.7:0.3:1.5:1.6:0.7:0.3:1.5混合，即得本发明临床感染检测试剂。实施例14，该临床感染检测试剂按下述制备方法得到：第一步，配制溶液：1)MES缓冲液的配制：配制浓度为30mmol/L的MES缓冲液；2)蛋白酶的配制：配制浓度为9U/ml的蛋白酶；3)醋酸盐缓冲液的配制：配制浓度为40mmol/L的醋酸盐缓冲液；4)溴甲酚紫的配制：配制浓度为10mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制浓度为70mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗涤液的配制：配制浓度为0.7g/L的洗涤液；7)硫酸汞溶液的制备：称取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中获得4mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亚汞溶液的制备：称取硝酸亚汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中获得7mol/L的硝酸亚汞溶液；9)硝酸镍溶液的制备：称取硝酸镍溶于双蒸水中获得3mol/L的硝酸镍溶液；第二步，将第一步得到的所需量的MES缓冲液、蛋白酶、醋酸盐缓冲液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗涤液、硫酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、硝酸镍溶液按体积比为1:1.2:0.3:0.2:1.0:1.2:0.3:0.2:1.0混合，即得本发明临床感染检测试剂。实施例15，该临床感染检测试剂按下述制备方法得到：第一步，配制溶液：1)MES缓冲液的配制：配制浓度为40mmol/L的MES缓冲液；2)蛋白酶的配制：配制浓度为9U/ml的蛋白酶；3)醋酸盐缓冲液的配制：配制浓度为40mmol/L的醋酸盐缓冲液；4)溴甲酚紫的配制：配制浓度为10mmol/L的溴甲酚紫；5)烷基聚葡萄糖苷的配制：配制浓度为70mmol/L的烷基聚葡萄糖苷；6)洗涤液的配制：配制浓度为0.7g/L的洗涤液；7)硫酸汞溶液的制备：称取硫酸汞溶于3mol/L的硫酸水溶液中获得4mol/L的硫酸汞溶液；8)硝酸亚汞溶液的制备：称取硝酸亚汞溶于4mol/L的硝酸水溶液中获得7mol/L的硝酸亚汞溶液；9)硝酸镍溶液的制备：称取硝酸镍溶于双蒸水中获得6mol/L的硝酸镍溶液；第二步，将第一步得到的所需量的MES缓冲液、蛋白酶、醋酸盐缓冲液、溴甲酚紫、烷基聚葡萄糖苷、洗涤液、硫酸汞溶液、硝酸亚汞溶液、硝酸镍溶液按体积比为1:1.4:0.5:0.3:1.2:1.4:0.5:0.3:1.2混合，即得本发明临床感染检测试剂。上述实施例得到的本发明临床感染检测试剂在检测丙型肝炎的试验如下：1.试验对象筛选要求:所有试验对象在测试前一天均未饮酒，且未服用氨基酸、激素类等药物。1)经临床诊断确诊为丙型肝炎(已经临床检测手段确诊)的患者共1754名，年龄20-80，男女各占一半；2)正常健康人组2130名，年龄20-80岁，男女各半为经检查健康合格者。2.试验方法1)以下试验均采用实施例12、实施例13、实施例14和实施例15制备的检测试剂。2)所有试验对象均取新鲜洁净尿液3mL加入装有0.5m1根据本发明得到的实施例12、实施例13、实施例14和实施例15制备的检测试剂的安瓶中，稍加振荡静置3分钟至5分钟(若温度低于20℃，在37℃水浴中加热)，震荡后，沉淀物稳定存在，结果及颜色如下表1所示。3.实验结果:1)肝炎筛查见表2所示：如上所示，在医院所提供的1754名肝炎患者中，检测出阳性患者有1742名，检出率达98.63％，在正常组中检出率皆低于5％，说明本发明提供的尿液中丙型肝炎标志物检测试剂进行丙型肝炎的筛查灵敏度高，检出率高，现有技术通过抽血来对丙型肝炎进行检测，此方法费用昂贵且不适合大规模流行病学调查时使用，而本发明得到的临床感染检测试剂通过对肝炎患者的尿液直接进行检测，该过程操作方便，且对丙型肝炎检测具有普适性强、灵敏度高和特异性好等特点。综上所述，本发明得到的临床感染检测试剂原材料易得，低廉，制备过程简单，获得的试剂性能稳定，用于丙型肝炎检测具有普适性强、灵敏度高和特异性好等特点，检测过程简单、快捷，成本低、重复性好，时间短，易于判断，特别适合于大规模的人群普查及丙型肝炎临床辅助诊断和疗效动态检查。以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。表1检测标准符号颜色阴性-浅黄色或白色弱阳性±浅红色或粉红色阳性+红色或红棕色表2当前第1页1 2 3