一种排卵检测试纸及其加工工艺的制作方法

本发明涉及医用检测领域，尤其涉及一种排卵检测试纸及其加工工艺。

背景技术：

促黄体生成素（LH）由腺垂体嗜碱粒细胞分泌。在女性（LH）协同FSH（促卵泡激素）共同作用维持卵巢的月经周期，导致排卵与黄体形成。LH的产生受下丘脑促性腺释放激素的控制，同时受卵巢的正、负反馈调控。促使排卵在FSH协同作用下，形成黄体并分泌孕激素，可以预测排卵。当卵泡成熟时，分泌大量雌激素，使垂体释放大量促黄体生成素，形成促黄体生成素高峰，大量的促黄体生成素能使成熟的卵泡破裂、排卵。

在月经周期LH的释放高峰与卵巢排卵有着密切关系，LH高峰一经出现，预示1-2天内卵巢排卵，因此可以在月经周期中监测血清或尿液中LH峰值，以确定最佳受孕时间，或需要采取避孕措施的时间。

现有的LH检测方法主要有血液检测和尿液检查，血液检测，比较耗时耗力，尿液检查可以用排卵检测试纸进行检查，方法简单，可以用于家庭自检。

排卵检测试纸是采用胶体金标记技术，利用抗原抗体免疫反应，来实现对样本中的促黄体生成素（LH）浓度水平进行定性检测。产品采用胶体金标记的LH抗体作为指示试剂，将羊抗鼠多克隆抗体和LH抗体分别包被在硝酸纤维素膜上的质控区和检测区，加其他辅助成分制成。检测时，样本通过层析作用向上流动，阳性样本中的LH会与金标垫上金标记抗-LH特异性结合，并被检测线上的LH单克隆抗体捕获，形成的[抗LH]-[LH]-[金标记抗-LH]复合物，从而在检测线（T）显现出一条红色条带。如是阴性样本，则将无检测线（T）显现。

排卵检测试纸能否实现完全特异性检测LH浓度，与胶体金标记和在硝酸纤维素膜上包被的这一对抗体有很大的关系。如果抗体不好，检测含有50mIU/ml HCG及以上浓度样本会出现阳性即假阳性。把本是含有HCG的样本报告为含较高浓度的LH的样本，这会让消费者引起误会，特别是怀孕初期本应是保胎避免同房，结果提示要在相应时间同房，会引起流产的风险。

鉴于上述缺陷，本发明创作者经过长时间的研究和实践终于获得了本创作。

技术实现要素：

本发明目的在于提供一种排卵检测试纸及其加工工艺，用以克服上述技术缺陷。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：一种排卵检测试纸，包括样品垫、胶体金结合垫、NC硝酸纤维素膜、吸水板及PVC板，所述的样品垫、胶体金结合垫、NC硝酸纤维素膜、吸水板粘贴于所述的PVC板表面，且其宽度相同，所述的样品垫与其下部的胶体金结合垫，所述的胶体金结合垫与其下部的NC硝酸纤维素膜，所述的NC硝酸纤维素膜与其上部的吸水板，分别部分重叠交接，重叠宽度分别为1-4mm；

所述的胶体金结合垫喷有胶体金标记的jhkLH-α抗体；

所述的NC硝酸纤维膜上分别划有两条平行的抗体捕获线，靠近胶体金结合垫的一条jhkLH-β抗体，作为检测线，另一条含有经确定了浓度的羊抗鼠IgG抗体，作为标准浓度显色质控线。

一种排卵检测试纸的加工工艺，步骤如下：

（1）样品垫的制备：将玻璃纤维素膜切成25*30cm，用样品垫处理液浸泡30分钟上，取出烘干，切成相应宽度的2.5*30cm样品垫条备用；

（2）胶体金结合垫的制备：用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备胶体金液冷却备用，调整PH值至适当值，加入要求量的jhkLH-α抗体，搅拌30分钟，加入适量的BSA，搅拌10分钟，离心去上清，加入适量的复溶液复溶至适量体积，振荡均匀，喷涂在聚酯膜上，37℃干燥4小时以上，沿着喷金复溶液的方向，在保证每条金的完整的情况下，裁成1*30cm胶体金结合垫备用。此步骤为排卵检测试纸加工工艺中的标金，之后对胶体金结合垫进行干燥处理；

（3）包被膜的制备：用抗体稀释液分别稀释jhkLH-β抗体，和羊抗鼠多抗至一定的浓度，分别划线在NC硝酸纤维素膜上，分别形成检测线和质控线，即T线和C线，如图1所示的位置，37℃干燥4小时以上，然后裁成30cm长备用。此步骤为排卵检测试纸加工工艺中的膜包被，之后对NC硝酸纤维素膜进行干燥处理；

（4）吸水材料的制备：将吸水板裁成3.3*30cm条形备用；

（5）金膜组合：将包被膜、吸水材料、胶体金结合垫、样品垫按照上图的顺序和层叠粘在PVC板上，形成成型板，对成型板进行半成品检测；

（6）分切：将上述成型板切成3mm的条；

（7）装袋和封口：将上述条，一条一条分别装入铝泊袋中，封口，备用；

（8）外包：将袋装产品装入外包装盒；

（9）成品入库：将包装后的产品放置仓库。

本发明提供的一种排卵检测试纸及其加工工艺，与现有技术相比，筛选出一对LH抗体组合（jhkLH-α，jhkLH-β），采用胶体金试纸生产工艺，生产出的排卵检测试纸检测含有500mIU/ml HCG及以下浓度的样本不会出现阳性，即利用此排卵检测试纸检测LH的浓度时，HCG的浓度不会影响检测结果。

附图说明

图1为本发明提供的一种排卵检测试纸的结构示意图；

图2为本发明提供的一种排卵检测试纸的加工工艺的流程图。

图中：1 样品垫；2 胶体金结合垫；3 NC硝酸纤维素膜；4 吸水板；5 PVC板；6 检测线；7 质控线。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

参见图1，为本发明提供的一种排卵检测试纸，其包括样品垫1、胶体金结合垫2、NC硝酸纤维素膜3、吸水板4及PVC板5，所述的样品垫1、胶体金结合垫2、NC硝酸纤维素膜3、吸水板4粘贴于所述的PVC板5表面，且其宽度相同；

所述的样品垫1与其下部的胶体金结合垫2，所述的胶体金结合垫2与其下部的NC硝酸纤维素膜3，所述的NC硝酸纤维素膜3与其上部的吸水板4，分别部分重叠交接，重叠宽度分别为1-4mm。

所述的胶体金结合垫2喷有胶体金标记的jhkLH-α抗体；

所述的NC硝酸纤维膜3上分别划有两条平行的抗体捕获线，靠近胶体金结合垫2的一条jhkLH-β抗体，作为检测线6，即T线，另一条含有经确定了浓度的羊抗鼠IgG抗体，作为标准浓度显色质控线7，即C线。

本发明提供的一种排卵检测试纸的加工工艺如下：

（1）样品垫的制备：将玻璃纤维素膜切成25*30cm，用样品垫处理液浸泡30分钟上，取出烘干，切成相应宽度的2.5*30cm样品垫条备用；

（2）胶体金结合垫的制备：用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备胶体金液冷却备用，调整PH值至适当值，加入要求量的jhkLH-α抗体，搅拌30分钟，加入适量的BSA，搅拌10分钟，离心去上清，加入适量的复溶液复溶至适量体积，振荡均匀，喷涂在聚酯膜上，37℃干燥4小时以上，沿着喷金复溶液的方向，在保证每条金的完整的情况下，裁成1*30cm胶体金结合垫备用。此步骤为排卵检测试纸加工工艺中的标金，之后对胶体金结合垫进行干燥处理；

（3）包被膜的制备：用抗体稀释液分别稀释jhkLH-β抗体，和羊抗鼠多抗至一定的浓度，分别划线在NC硝酸纤维素膜上，分别形成检测线和质控线，即T线和C线，如图1所示的位置，37℃干燥4小时以上，然后裁成30cm长备用。此步骤为排卵检测试纸加工工艺中的膜包被，之后对NC硝酸纤维素膜进行干燥处理；

（4）吸水材料的制备：将吸水板裁成3.3*30cm条形备用；

（5）金膜组合：将包被膜、吸水材料、胶体金结合垫、样品垫按照上图的顺序和层叠粘在PVC板上，形成成型板，对成型板进行半成品检测；

（6）分切：将上述成型板切成3mm的条；

（7）装袋和封口：将上述条，一条一条分别装入铝泊袋中，封口，备用；

（8）外包：将袋装产品装入外包装盒；

（9）成品入库：将包装后的产品放置仓库。

为证明本发明提供的的排卵检测试纸，克服了500mIU/ml HCG及以下浓度的样本出现假阳性的问题，进行了下述实验以检测其效果。

1、利用4组不同的排卵检测试纸，分别对不同浓度的HCG进行检测，其中试纸条1为本发明所述的排卵检测试纸，试纸条2、3、4为市面所售的排卵检测试纸，检测结果如下表：

检测结果显示：试纸条1、2、3、4分别检测HCG20mIU/ml、HCG50mIU/ml、HCG100mIU/ml、HCG1000mIU/ml，只有试纸条1的检测结果不受HCG浓度的影响，而试纸条2、3、4的检测结果与HCG的浓度有严重交叉，出现了假阳性，尤其HCG浓度大于50mIU/ml时，由此说明本发明提供的排卵检测试纸检测LH的浓度时，HCG的浓度不会影响检测结果。

2、临床检测结果：

利用4组不同的排卵检测试纸，分别对20位育龄妇女的晨尿进行检测，以确定不同的排卵检测试纸检测LH的浓度时，HCG的浓度是否会影响检测结果。

检测结果如下表（“+” 代表阳性 “-” 代表阴性）：

检测结果显示：试纸条1、2、3、4，检测4份排卵尿结果一致，14份阴性尿结果一致，只有2份怀孕尿检测结果不一样，即序号4和20，试纸条1检测怀孕尿为阴性，而试纸条2、3、4检测怀孕尿结果为阳性，即临床实验证实：只有本发明提供的排卵检测试纸检测LH的浓度时，HCG的浓度不会影响检测结果。

以上具体实施方式仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。