本发明涉及一种评估对象药物的血液毒性评估方法、以及评估对象药物的血液毒性评估用模型。
背景技术：
因脊髓病变而出现的白细胞减少等血液毒性是抗癌药的主要副作用(参照非专利文献1)，在多种抗癌药中成为给药量制约因素(dlf)。在药物开发的研究阶段，通过使用实验动物的外周血的血液学检查进行血液毒性评估。然而，在上述使用实验动物的抗癌药的血液毒性评估实验中，上述脊髓病变的程度在上述实验动物和人中有时会不同，缺少临床预见性。特别是，在使用啮齿类的实验中，反应性及上述脊髓病变的恢复期间与上述人的临床所见不同。作为该差异的要因，可以列举：主要是在上述人和上述实验动物中骨髓细胞对上述抗癌药的敏感性及细胞增殖时间不同等。另外，为了研究上述抗癌药对造血系细胞的分化增殖能力的影响，有时还进行集落形成试验及atp测定，但在这些体外实验中，上述抗癌药通过在体内代谢而表现出效果时，除了难以进行评估以外，也难以对恢复性的变化进行研究。
在迄今为止的动物实验中，关于引起上述脊髓病变的骨髓毒性的临床预见性低，难以由上述动物实验中的给药量推测上述人临床上的给药量。因此，迄今为止尚未报道骨髓毒性的临床预见性高的评估方法。
另外，有人报道了一种小鼠，是对作为重度免疫功能不全小鼠的nog小鼠(参照专利文献1和非专利文献2)全身照射x射线以破坏其骨髓，之后移植来自人脐带血的cd34+细胞而获得的小鼠(参照非专利文献3)。
另外，有人报道了：在对上述nog小鼠全身照射x射线以破坏其骨髓、之后移植了来自人脐带血的cd34+细胞的小鼠和移植了来自c57bl/6j小鼠骨髓的谱系细胞的小鼠中，评估了苯的血液毒性(参照非专利文献4和非专利文献5)。
然而，在人源化的上述nog小鼠中，虽然在来自所有组织的血细胞中确认到了人白细胞系前驱细胞和人白细胞系成熟细胞，但骨髓球系细胞的分化不充分，特别是几乎没有确认到粒细胞的分化。因此，即使在使用nog小鼠的情况下，也难以进行骨髓毒性的临床预见性高的评估对象药物的血液毒性评估，尚不存在适合于评估对象药物的血液毒性评估的模型动物。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本专利第3753321号公报
非专利文献
非专利文献1：日药理志132,第343～346页(2008)
非专利文献2：blood100,第3175～3182页(2002)
非专利文献3：电力中央研究所报告研究报告：v09011,平成22年4月
非专利文献4：电力中央研究所报告研究报告：v11063,平成25年1月
非专利文献5：plosone.2012；7(12)：e50448
技术实现要素：
技术问题
本发明的课题在于：解决上述现有的各种问题，达到以下目的。即，本发明的目的在于：提供一种骨髓毒性的临床预见性优异的评估对象药物的血液毒性评估方法、以及评估对象药物的血液毒性评估用模型。
解决问题的方案
为了解决上述目的，本发明人进行了深入研究，结果发现：使用人源化的修饰型nog小鼠可以对评估对象药物的人血液毒性进行评估，从而完成了本发明。
本发明基于本发明人的上述认知，用于解决上述课题的方法如下。即，
＜1＞一种评估对象药物的血液毒性评估方法，该方法的特征在于，包括如下工序：
对人源化的修饰型nog小鼠给予评估对象药物，所述人源化的修饰型nog小鼠是向nog小鼠中导入人gm－csf/il－3基因，且在血液中的白细胞中来自人的白细胞的含量为20个数％以上的小鼠；以及
对于给予了上述评估对象药物后的上述修饰型nog小鼠的样品测定来自人的血细胞的细胞数，当相比于给予了溶剂以代替上述评估对象药物的对照，上述来自人的血细胞的细胞数发生变化时，评估上述评估对象药物具有血液毒性。
＜2＞上述＜1＞所述的评估对象药物的血液毒性评估方法，其中，上述人源化的修饰型nog小鼠是通过对修饰型nog小鼠进行放射线照射以排除来自小鼠的骨髓细胞、并移植来自人的hcd34+细胞使其存活而制作的。
＜3＞上述＜1＞～＜2＞中任一项所述的评估对象药物的血液毒性评估方法，其中，对上述人源化的修饰型nog小鼠的样品给予上述评估对象药物。
＜4＞上述＜1＞～＜3＞中任一项所述的评估对象药物的血液毒性评估方法，其中，上述来自人的血细胞为白细胞、粒细胞、红细胞及血小板中的至少任一种，
上述评估对象药物具有血液毒性的评估是根据白细胞减少、粒细胞减少、红细胞减少、血小板减少、白细胞增加及全血细胞减少中的至少任一项来进行的。
＜5＞上述＜1＞～＜4＞中任一项所述的评估对象药物的血液毒性评估方法，其中，上述来自人的血细胞是来自人的粒细胞，并且，上述评估对象药物具有血液毒性的评估是根据粒细胞减少来进行的。
＜6＞上述＜1＞～＜5＞中任一项所述的评估对象药物的血液毒性评估方法，其中，上述评估对象药物为抗癌药。
＜7＞上述＜6＞所述的评估对象药物的血液毒性评估方法，其中，上述抗癌药为杀细胞型抗癌药。
＜8＞上述＜7＞所述的评估对象药物的血液毒性评估方法，其中，上述杀细胞型抗癌药为喜树碱类似物、内包喜树碱类似物的复合体、紫杉醇类似物、内包紫杉醇的复合体、以及铂络合物衍生物中的至少任一种。
＜9＞上述＜7＞所述的评估对象药物的血液毒性评估方法，其中，上述杀细胞型抗癌药为伊立替康、拓扑替康、7－乙基－10－羟基喜树碱、紫杉醇及奥沙利铂中的至少任一种。
＜10＞上述＜1＞～＜9＞中任一项所述的评估对象药物的血液毒性评估方法，该方法还包括如下工序：在与上述对照相比，上述来自人的血细胞的细胞数发生变化后，测定恢复至上述评估对象药物给药前的细胞数的期间，根据上述期间评估恢复性。
＜11＞上述＜1＞～＜10＞中任一项所述的评估对象药物的血液毒性评估方法，该方法还包括如下工序：
测定上述来自人的血细胞的细胞数和上述来自小鼠的血细胞的细胞数，在相比于给予了上述溶剂以代替上述评估对象药物的上述对照，上述来自小鼠的血细胞的细胞数发生变化时，评估上述评估对象药物具有血液毒性；以及
根据上述来自人的血细胞的评估结果和上述来自小鼠的血细胞的评估结果，对上述评估对象药物的血液毒性的种差进行评估。
＜12＞一种评估对象药物的血液毒性评估用模型，其特征在于，包含人源化的修饰型nog小鼠，所述人源化的修饰型nog小鼠是向nog小鼠中导入人gm－csf/il－3基因，且在血液中的白细胞中来自人的白细胞的含量为20个数％以上的小鼠。
发明效果
根据本发明，可以解决上述现有的各种问题，达到上述目的，能够提供一种骨髓毒性的临床预见性优异的评估对象药物的血液毒性评估方法、以及评估对象药物的血液毒性评估用模型。
附图说明
图1是显示在拓扑替康的血液毒性评估中来自人的白细胞(hcd45+)数的变化的曲线图。
图2是显示在拓扑替康的血液毒性评估中来自小鼠的白细胞(mcd45+)数的变化的曲线图。
图3是显示在拓扑替康的血液毒性评估中来自人的粒细胞(cd66b+)数的变化的曲线图。
图4是显示在拓扑替康的血液毒性评估中来自小鼠的粒细胞(gr－1+)数的变化的曲线图。
图5是显示在紫杉醇的血液毒性评估中来自人的白细胞(hcd45+)的变化的图。
图6是显示在紫杉醇的血液毒性评估中来自小鼠的白细胞(mcd45+)数的变化的图。
图7是显示在紫杉醇的血液毒性评估中来自人的粒细胞(cd66b+)的变化的图。
图8是显示在紫杉醇的血液毒性评估中来自小鼠的粒细胞(gr－1+)数的变化的图。
图9是显示在紫杉醇的血液毒性评估中对照组的来自人的白细胞(hcd45+)数及来自小鼠的白细胞(mcd45+)数的比例的变化的图。
图10是显示在紫杉醇的血液毒性评估中紫杉醇给药组的来自人的白细胞(hcd45+)数及来自小鼠的白细胞(mcd45+)数的比例的变化的图。
图11是显示在奥沙利铂的血液毒性评估中来自人的白细胞(hcd45+)的变化的曲线图。
图12是显示在奥沙利铂的血液毒性评估中来自小鼠的白细胞(mcd45+)数的变化的曲线图。
图13是显示在奥沙利铂的血液毒性评估中来自人的粒细胞(cd66b+)数的变化的曲线图。
图14是显示在奥沙利铂的血液毒性评估中来自小鼠的粒细胞(gr－1+)数的变化的曲线图。
具体实施方式
(评估对象药物的血液毒性评估方法)
本发明的评估对象药物的血液毒性评估方法包括给药步骤和评估步骤，根据需要还包括恢复性评估步骤、种差评估步骤等其他步骤。
本发明的评估对象药物的血液毒性评估方法可以是体内的血液毒性评估方法，也可以是体外的血液毒性评估方法。
＜给药步骤＞
上述给药步骤是指对人源化的修饰型nog小鼠给予评估对象药物的步骤。
－人源化的修饰型nog小鼠(评估对象药物的血液毒性评估用模型)－
上述人源化的修饰型nog小鼠是在血液中的白细胞中来自人的白细胞的含量为20个数％以上的修饰型nog小鼠。
这里，“人源化”是指向上述血液中导入来自人的血液细胞。
本发明的评估对象药物的血液毒性评估用模型是包含上述人源化的修饰型nog小鼠的评估对象药物的血液毒性评估用模型。
本发明的评估对象药物的血液毒性评估用模型动物可适用于本发明的评估对象药物的血液毒性评估方法。
－－修饰型nog小鼠(tg－nog小鼠)－－
上述修饰型nog小鼠(以下有时称作“tg－nog小鼠”。)是指向nog小鼠中导入了人gm－csf/il－3基因的转基因nog小鼠(tg－nog小鼠)，更详细而言，修饰型nog小鼠是指使导入有人gm－csf/il－3基因的c57bl/6系统的转基因小鼠(c57bl/6－il－3/gm－csf－tg小鼠)与上述nog小鼠回交而获得的，其全身产生人gm－csf和人il－3。
上述修饰型nog小鼠在公益财团法人实验动物中央研究所建立，是journalofimmunology,2013,191：2890－2899中记载的复合型免疫功能不全小鼠。上述修饰型nog小鼠的正式名称为“nod.cg－pkdcscidil2rgtm1sugtg(sv40－csf2,il3)10－7jic/jic”，简称为“nog－gm－csf/il－3－tg”，可由公益财团法人实验动物中央研究所获取。
－－－nog小鼠－－－
上述nog小鼠在公益财团法人实验动物中央研究所建立，是指blood,2002,100,3175－3182和专利第3753321号公报中记载的复合型免疫功能不全小鼠。上述nog小鼠的正式名称为“nod.cg－prkdcscidil2rgtm1sug/jic”，简称为“nod/shi－scid,il－2rγnull”，可由公益财团法人实验动物中央研究所获取。
上述nog小鼠是指将免疫功能不全scid小鼠改良而获得的nod/scid小鼠与敲除了作为多种细胞因子受体共通结构域的il－2受体γ链(il2rγko)的小鼠交配而获得的基因修饰小鼠，是t细胞、b细胞及nk细胞缺失的复合型免疫功能不全小鼠。
与现有的免疫功能不全小鼠相比，上述nog小鼠具有优异的异种细胞存活性，例如，在移入人造血干细胞时显示出高度的人白细胞的分化，可确认到在nod/scid小鼠中未见的人t淋巴细胞的分化。然而，在上述nog小鼠中，骨髓球系细胞的分化不充分，特别是粒细胞的分化效率极低。
相对于此，在上述修饰型nog小鼠中，当移入人造血干细胞(人源化)时，与上述nog小鼠相比，人骨髓球系细胞的分化效率提高，确认到了迄今为止未见的人粒细胞的分化等，显示出非常有用的人血细胞的分化。根据这些认知，本发明人发现：上述人源化的修饰型nog小鼠适合于血液毒性的评估(特别是粒细胞减少的评估)。
上述人源化的修饰型nog小鼠可如下制作：对上述修饰型nog小鼠进行放射线照射以排除来自小鼠的骨髓细胞，移植来自人的hcd34+细胞使其存活，从而即可制得。
作为上述放射线，例如可以列举x射线、γ射线等。
对上述照射的方法没有特别限定，可以根据目的适当选择公知的方法。
作为所照射的上述放射线，以上述x射线的吸收线量计算优选2.0gy～3.0gy。对上述放射线照射的照射次数没有特别限定，可以根据目的而适当选择。
在上述放射线照射后，可以确认来自上述修饰型nog小鼠的骨髓细胞被排除。
来自上述修饰型nog小鼠的骨髓细胞被排除例如可以通过下述方法进行确认。
在上述放射线照射后(例如刚刚照射后～3天后)，将上述修饰型nog小鼠在异氟烷麻醉下从腹大动脉放血实施安乐死处置，之后采集大腿骨。使用iscove改良dulbecco培养基(imdm培养基)从大腿骨中冲洗出细胞，制备细胞悬浮液。得到通过了尼龙滤器的滤液作为骨髓细胞液。使用血细胞自动分析装置等计测骨髓细胞液中的总白细胞数等，进行以表面抗原标志物为指标的荧光流式细胞术(fcm)测定，由所得比率算出上述骨髓细胞液中的来自小鼠的骨髓细胞(例如来自小鼠的mcd11b+细胞等)的细胞数。
将作为造血干细胞的上述来自人的hcd34+细胞移植到上述修饰型nog小鼠中使其存活时，由上述hcd34+细胞分化的来自人的血细胞(例如来自人的白细胞hcd45+细胞、来自人的粒细胞hcd66b+细胞等)会出现在血液中。
对上述来自人的hcd34+细胞的移植方法没有特别限定，可以根据目的而适当选择。
对移植的上述来自人的hcd34+细胞没有特别限定，可以根据目的而适当选择，但优选为来自人脐带血的hcd34+细胞。作为上述来自人脐带血的hcd34+细胞，可以是市售品，也可以是由健康人的脐带血分离的hcd34+细胞。
对上述来自人的hcd34+细胞的移植数没有特别限定，可以根据目的而适当选择，优选1×104(细胞/只)～1×106(细胞/只)。
作为确认上述来自人的血细胞存活的方法，例如可以通过以下的方法进行。
在上述来自人的hcd34+细胞移植后(5周后～7周后)，从眼窝静脉丛采集上述修饰型nog小鼠的血液。使用血细胞自动分析装置等计测血液中的总白细胞数等，通过进行以表面抗原标志物为指标的荧光流式细胞术(fcm)测定，由所得比率算出上述血液中的来自人的血细胞(例如来自人的白细胞hcd45+细胞)和来自小鼠的血细胞(例如来自小鼠的白细胞mcd45+细胞)的细胞数。
算出来自小鼠的白细胞mcd45+细胞和来自人的白细胞hcd45+细胞的比率，当血液中的白细胞中来自人的白细胞的含量为20个数％以上时，判断为来自人的血细胞存活，上述修饰型nog小鼠被人源化。
此外，上述来自人的血细胞存活的确认可以在上述评估对象药物的给药前与来自人的血细胞的细胞数的测定同时进行。
另一方面，当血液中的白细胞中来自人的白细胞的含量不足20个数％时，来自人的粒细胞的出现数太少(粒细胞为白细胞中的5个数％左右)，作为具有高人源化效率的本发明的人源化修饰型nog小鼠的特性尚不充分，在这方面不适合血液毒性的评估。
－评估对象药物－
对上述评估对象药物没有特别限定，可以根据目的而适当选择，例如可以列举抗癌药、抗菌药、抗痉挛药、抗甲状腺药等。其中，优选抗癌药。另外，上述评估对象药物可以是治疗药、受试药和作为药品候选的试验化合物中的任一种，也可以是天然化合物及合成化合物中的任一种。
－－抗癌药－－
上述抗癌药是指以抑制癌的增殖为目的的药物，例如可以列举分子靶向药、杀细胞型抗癌药等。
这里，“癌”是指包括作为来自上皮组织的恶性肿瘤的癌瘤、作为来自非上皮组织的恶性肿瘤的肉瘤、血液恶性肿瘤(白血病等)在内的广义的恶性肿瘤。
－－－分子靶向药－－－
上述分子靶向药是指以在癌细胞中特异性地表达的分子(蛋白质、基因等)为靶而发挥作用的药物，从作用机理的角度考虑，例如可以列举：抑制癌细胞的增殖因子的信号传递的抗癌药、抑制与在癌细胞中表达的癌细胞的增殖相关的蛋白质等的功能的抗癌药、经由免疫系统抑制癌细胞的增殖的抗癌药等。
作为上述分子靶向药，例如可以列举低分子抑制剂、抗体药物等。
作为上述低分子抑制剂，例如可以列举酪氨酸激酶抑制剂、raf激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、mtor抑制剂、钙调磷酸酶抑制剂、janus激酶抑制剂等。
作为上述抗体药物，例如可以列举抗cd20抗体、抗egfr抗体、抗tnf－α抗体、抗cd30抗体、抗人il－6受体抗体、抗her2抗体、抗vegf抗体、抗cd33抗体、抗ccr4抗体、抗cd52抗体等。
－－－杀细胞型抗癌药－－－
上述杀细胞型抗癌药是指通过抑制dna合成或细胞分裂使癌细胞死亡的抗癌药。
作为上述杀细胞型抗癌药，例如可以列举烷基化剂、代谢拮抗剂、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、抗肿瘤性抗菌剂、铂络合物衍生物等。其中，优选拓扑异构酶抑制剂和铂络合物衍生物。
作为上述烷基化剂，例如可以列举异环磷酰胺、环磷酰胺、达卡巴嗪、替莫唑胺、尼莫司汀、白消安、甲基苄肼、美法仑、雷莫司汀等。
作为上述代谢拮抗剂，例如可以列举依诺他滨、卡培他滨、卡莫氟、克拉屈滨、吉西他滨、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠(cytarabineocfosfate)、替加氟、替加氟·尿嘧啶、替加氟·吉美嘧啶·奥替拉西钾、去氧氟尿苷、奈拉滨、羟基脲、氟尿嘧啶、氟达拉滨、培美曲塞、喷司他丁、巯嘌呤、甲氨蝶呤等。
作为上述拓扑异构酶抑制剂，例如可以列举喜树碱及其类似物、依托泊苷、替尼泊苷、多柔比星、左氧氟沙星、环丙沙星等。其中，优选喜树碱及其类似物。
作为上述喜树碱类似物，例如可以列举伊立替康(cpt－11)、拓扑替康(topotecan)、db67、bnp1350、依喜替康、勒托替康、st1481、ckd602、7－乙基－10－羟基喜树碱(sn－38)、以及它们的药理学上可接受的盐等。
其中，优选伊立替康(cpt－11)、拓扑替康(topotecan)、7－乙基－10－羟基喜树碱(sn－38)。
另外，上述喜树碱类似物还可以是内包上述喜树碱及喜树碱类似物中的任一种的复合体的形式。
作为上述复合体，例如可以列举：将喜树碱类似物封入脂质体内的复合体、喜树碱类似物与磷脂的复合体、将喜树碱类似物封入聚合物胶束内的复合体、用包含亲水性片段和疏水性片段的嵌段共聚物封入喜树碱类似物而获得的复合体等。
作为用包含亲水性片段和疏水性片段的嵌段共聚物封入上述喜树碱类似物而获得的复合体，例如可以列举下述通式(i)所表示的喜树碱类似物的高分子衍生物。
[化学式1]
上述通式(i)中，r1表示氢原子或可具有取代基的(c1～c6)烷基，t表示5～11、500的整数，a表示键合基，d、e及f表示整数，d+e+f表示3～200的整数，r2表示氢原子、可具有取代基的(c1～c6)烷基或可具有取代基的甲硅烷基，r3表示氢原子或可具有取代基的(c1～c6)烷基，r4表示可具有取代基的(c1～c20)烷氧基、可具有取代基的(c1～c20)烷基氨基、可具有取代基的二(c1～c20)烷基氨基或可具有取代基的(c1～c20)烷基氨基羰基(c1～c20)烷基氨基，p表示氢原子、(c1～c6)酰基或(c1～c6)烷氧羰基。
作为上述有丝分裂抑制剂，例如可以列举紫杉醇及其类似物、长春碱、长春新碱、长春地辛等。其中，优选上述紫杉醇及其类似物。
上述紫杉醇及其类似物是具有紫杉烷系结构的化合物，例如可以列举紫杉醇(casno.33069－62－4)、7α‐葡糖氧基乙酰基紫杉醇、多西他赛、以及它们的药理学上可接受的盐等。
另外，上述紫杉醇类似物可以是内包上述紫杉醇和紫杉醇类似物中的任一种的复合体的形式。
作为上述复合体，例如可以列举：使紫杉醇类似物与白蛋白结合的复合体、将紫杉醇类似物封入脂质体内而获得的复合体、紫杉醇类似物与磷脂的复合体、将紫杉醇类似物封入聚合物胶束内而获得的复合体、用包含亲水性片段和疏水性片段的嵌段共聚物封入紫杉醇类似物而获得的复合体等。
作为用包含亲水性片段和疏水性片段的嵌段共聚物封入上述紫杉醇类似物而获得的复合体，例如可以列举用下述通式(ii)所表示的嵌段共聚物封入紫杉醇类似物而获得的复合体等。
[化学式2]
上述通式(ii)中，r1表示氢原子或(c1～c5)烷基，r2表示(c1～c5)亚烷基，r3表示亚甲基或亚乙基，r4表示氢原子或(c1～c4)酰基，r5表示羟基、可具有取代基的芳基(c1～c8)烷氧基、或－n(r6)－co－nhr7，r6和r7彼此可以相同也可以不同，表示(c3～c6)环状烷基或可被叔氨基取代的(c1～c5)烷基，n、m、x和y表示整数，n为5～1,000、m为2～300、x为0～300、y为0～300。其中，x与y之和为1以上且不大于m，r5为羟基的比例是m的0％～88％，r5为可具有取代基的芳基(c1～c8)烷氧基的比例是m的1％～89％，r5为－n(r6)－co－nhr7的比例是m的11％～30％。
作为上述抗肿瘤性抗菌剂，例如可以列举丝裂霉素c、博来霉素、阿霉素、多柔比星等。
作为上述铂络合物衍生物，例如可以列举顺铂、卡铂、奥沙利铂等。其中，优选上述奥沙利铂。
当本发明涉及体内的血液毒性评估方法时，只要对上述修饰型nog小鼠给予上述评估对象药物即可，当本发明涉及体外的血液毒性评估方法时，只要对上述修饰型nog小鼠的样品给予上述评估对象药物即可。
作为上述样品，只要是来自上述修饰型nog小鼠的样品即可，没有特别限定，可以根据目的而适当选择，例如可以列举骨髓细胞、血液细胞、脾细胞、肝细胞等。其中，优选骨髓细胞、血液细胞。
上述骨髓细胞例如可以利用下述方法进行制备。
将上述人源化的修饰型nog小鼠在异氟烷麻醉下从腹大动脉放血进行安乐死处置，之后采集大腿骨。使用iscove改良dulbecco培养基(imdm培养基)，无菌操作从大腿骨中冲洗出细胞，制备细胞悬浮液。得到通过了尼龙滤器(例如，直径为35μm、细胞滤网、bdbiosciences公司制造)的滤液，作为含有骨髓细胞的样品。
对上述评估对象药物的给药方法没有特别限定，可以根据目的适当选择适合于各药物的给药途径、给药量、给药日程等给药条件。
例如，在评估拓扑替康时，优选3mg/kg～30mg/kg(例如30mg/kg)的单次静脉内给药，在评估紫杉醇时，优选25mg/kg～100mg/kg(例如70mg/kg)的单次静脉内给药，在评估奥沙利铂时，优选2.5mg/kg～20mg/kg(例如20mg/kg)的单次静脉内给药。
或者，作为上述评估对象药物的给药方法，可以适当选择想要评估的给药途径、给药量、投与日程等给药条件。由此，对于各种药物，可以评估并选定适合的(例如血液毒性小、恢复性优异等)给药条件。
当本发明涉及体外的血液毒性评估方法时，对上述评估对象药物的给药方法没有特别限定，可以根据目的适当选择公知的体外实验的各种条件，例如，只要对上述修饰型nog小鼠的样品给予包含上述评估对象药物的培养基即可。
＜评估步骤＞
上述评估步骤是指，对于给予了上述评估对象药物后的上述修饰型nog小鼠的样品，测定来自人的血细胞的细胞数，在与对照相比上述来自人的血细胞的细胞数发生变化时，评估上述评估对象药物具有血液毒性。
－样品－
对上述样品没有特别限定，可以根据目的而适当选择，例如可以列举血液、骨髓细胞、脾细胞、肝细胞等。其中优选血液。
对上述血液没有特别限定，可以根据目的而适当选择，例如可以列举静脉血、外周血等。其中，在对作为受试体的上述修饰型nog小鼠的负担小、容易采集方面，优选外周血。
－来自人的血细胞－
上述来自人的血细胞优选为白细胞、粒细胞、红细胞及血小板中的至少任一种。
作为上述来自人的白细胞，例如可以列举粒细胞、中性粒细胞、t细胞、b细胞、单核细胞、树状细胞等。其中，在上述修饰型nog小鼠中初次确认到在以往的实验小鼠中未见的来自人的粒细胞的分化、因而可以进行评估方面，优选来自人的粒细胞。
此外，当本发明涉及体外的血液毒性评估方法时，只要对来自给予了上述评估对象药物后的上述修饰型nog小鼠的样品测定来自人的血细胞的细胞数即可。
优选测定上述来自人的血细胞的细胞数和上述来自小鼠的血细胞的细胞数。
上述测定可以在给药后经过特定时间后的1个测定点进行测定，但优选按照规定的日程经时(在多个测定点)进行测定。换言之，在上述测定步骤中优选经时采集给药后的上述修饰型nog小鼠的样品，并经时测定上述样品中的来自人的血细胞的细胞数。
对上述经时测定的日程没有特别限定，可以根据目的而适当选择，例如可以列举给药后第4天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天和第42天的日程等。
作为测定上述样品中的来自人的血细胞的细胞数的方法，例如，在给药后经过特定时间后，从上述修饰型nog小鼠的眼窝静脉丛采集血液，使用血细胞自动分析装置等计测血液中的总白细胞数等，通过进行以人特异性的表面抗原标志物为指标的荧光流式细胞术(fcm)测定，由所得比率算出上述血液内的来自人的血细胞的细胞数即可。
关于上述来自小鼠的血细胞的细胞数，也可以使用小鼠特异性表面抗原标志物，按照相同方式进行测定。
对上述表面抗原标志物没有特别限定，可以根据目的适当选择公知的用于检测血细胞的表面抗原标志物，例如如下所示。
与上述白细胞整体有关的表面抗原标志物：cd45等
与上述粒细胞有关的表面抗原标志物：cd66b、cd16、gr－1等
与上述b细胞有关的表面抗原标志物：cd19等
与上述t细胞有关的表面抗原标志物：cd3等
以下述的表面抗原标志物为指标对白细胞进行分类，算出比率，从而可以区别检测来自人的白细胞和来自小鼠的白细胞。
·来自人的血细胞：hcd45+细胞(人白细胞)、hcd66b+细胞(人粒细胞)、hcd66b+hcd16+细胞(人中性粒细胞)、hcd19+细胞(人b细胞)
·来自小鼠的血细胞：mcd45+细胞(小鼠白细胞)、mgr－1+细胞(小鼠粒细胞)
另外，使用血细胞自动分析装置(例如xt－2000iv、sysmex株式会社)等计数血液中的总白细胞数，根据由荧光流式细胞术(fcm)得到的比率算出各血细胞的细胞数。
对上述荧光流式细胞术(fcm)测定没有特别限定，可以根据目的适当选择公知的装置，例如可以列举lsrii(bdbioscience)等facs(荧光激活细胞分选法，fluorescenceactivatedcellsorting)装置等。
以下述的表面抗原标志物为指标对红细胞进行分类，算出比率，从而可以区别检测来自人的红细胞和来自小鼠的红细胞。
·来自人的血细胞：hcd235a+细胞(人红细胞)
·来自小鼠的血细胞：mter119+细胞(小鼠红细胞)
以下述的表面抗原标志物为指标对血小板进行分类，算出比率，从而可以区别检测来自人的血小板和来自小鼠的血小板。
·来自人的血小板：hcd41a+细胞(人血小板)
·来自小鼠的血小板：mcd41+细胞(小鼠血小板)
－对照－
上述对照是指除了仅给予药物中使用的溶剂来代替上述评估对象药物以外，按照与上述修饰型nog小鼠相同的方式进行了处理的对照小鼠。
另外，当本发明涉及体外的血液毒性评估方法时，上述对照是指除了仅给予药物中使用的溶剂以代替上述药物以外，按照与上述修饰型nog小鼠样品相同的方式进行了处理的对照样品。
作为上述溶剂，只要是可溶解上述评估对象药物、且药学上可接受的溶剂即可，没有特别限定，可以根据使用的上述评估对象药物而适当选择，例如可以列举生理盐水、5w/v％的葡萄糖溶液、含有5v/v％的乙醇/5v/v％的cremophor的生理盐水等。
－血液毒性评估－
上述评估对象药物具有血液毒性的评估优选根据白细胞减少、粒细胞减少、红细胞减少、血小板减少、白细胞增加及全血细胞减少中的至少任一项来进行。
上述变化是指相对于对照而言在统计学上显著(例如student’st检验、p＜0.05)增加或减少。
对上述变化的程度没有特别限定，可以根据目标药物、血液毒性、给药条件等适当选择，例如可以列举10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上等。
另外，除了评估是否存在血液毒性(定性评估)以外，通过比较多个测定点(例如，给药后经过的天数、药物、给药量等不同的测定点)的变化程度，还可以进行血液毒性的强弱比较等定量评估。
－－白细胞减少－－
与上述对照相比，上述白细胞的细胞数在统计学上显著(例如student’st检验、p＜0.05)减少时，评估上述评估对象药物具有血液毒性。
－－粒细胞减少－－
与上述对照相比，上述粒细胞的细胞数在统计学上显著(例如student’st检验、p＜0.05)减少时，评估上述评估对象药物具有血液毒性。
在上述修饰型nog小鼠中初次确认到在以往的实验小鼠中未见的来自人的粒细胞的分化、因而可以进行评估方面，优选来自人的血细胞为来自人的粒细胞、且血液毒性为粒细胞减少。
－－红细胞减少－－
与上述对照相比，上述红细胞的细胞数在统计学上显著(例如student’st检验、p＜0.05)减少时，评估上述评估对象药物具有血液毒性。
－－血小板减少－－
与上述对照相比，上述血小板的细胞数在统计学上显著(例如student’st检验、p＜0.05)减少时，评估上述评估对象药物具有血液毒性。
－－白细胞增加－－
与上述对照相比，上述白细胞的细胞数在统计学上显著(例如student’st检验、p＜0.05)增加时，评估上述评估对象药物具有血液毒性。
上述白细胞增加与白细胞异常增殖等骨髓异常增殖密切相关。
－－全血细胞减少－－
与上述对照相比，上述白细胞、上述红细胞及上述血小板的细胞数分别在统计学上显著(例如student’st检验、p＜0.05)减少时，评估上述评估对象药物具有血液毒性。
另外，除了进行来自人的血细胞评估的上述评估步骤以外，还优选进行来自小鼠的血细胞的评估。即，在与对照相比上述来自小鼠的血细胞的细胞数发生变化时，优选还包括评估上述评估对象药物具有血液毒性的步骤。
＜其他步骤＞
作为上述的其他步骤，例如可以列举恢复性评估步骤、种差评估步骤等。
＜＜恢复性评估步骤＞＞
本发明的评估对象药物的血液毒性评估方法优选还包括恢复性评估步骤。
上述恢复性评估步骤是指，在与上述对照相比上述来自人的血细胞的细胞数发生变化后，测定恢复至上述评估对象药物给药前的细胞数的期间，根据上述期间评估恢复性。
由此，还可预测来自血液毒性的恢复程度，可以推测人临床中的药物的用量反应性及药物的适当给药间隔，因此除了减轻给予抗癌药的人的身体负担以外，还容易进行给药计划的立案。
这里，“恢复至给药前的细胞数”是指相对于给药前的来自人的血细胞的细胞数的变化程度在统计学上不显著(例如student’st检验、p＜0.05)。
＜＜种差评估步骤＞＞
本发明的评估对象药物的血液毒性评估方法优选还包括种差评估步骤。
上述种差评估步骤是指根据上述来自人的血细胞的评估结果和上述来自小鼠的血细胞的评估结果评估血液毒性的种差。
由此，能够评估血液毒性的种差，因此可以推测在使用了不同于上述修饰型nog小鼠的小鼠的现有血液毒性评估结果中无法获得的人的评估结果。
存在上述“种差”是指，在同一测定点上述来自人的血细胞相对于对照的变化程度与上述来自小鼠的血细胞相对于对照的变化程度在统计学上显著(例如student’st检验、p＜0.05)不同。
对上述变化的程度没有特别限定，可以根据目标药物、血液毒性、给药条件等适当选择，例如可以列举10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上等。
另外，除了评估是否存在血液毒性(定性评估)以外，通过比较多个测定点(例如给药后经过的天数、药物、给药量等不同测定点)的变化程度，还可以进行定量评估。
根据本发明的评估对象药物的血液毒性评估方法，能够提供一种人的骨髓毒性的临床预见性优异的血液毒性评估方法。特别是能够提供一种人的粒细胞减少症的临床预见性优异的评估对象药物的血液毒性评估方法。根据本发明的评估对象药物的血液毒性评估方法，能够使用啮齿类进行血液毒性评估，因此可大幅减少使用类人猿的评估实验。另外，还能够进行利用体外评估系统无法进行的、在体内代谢而初次表现出效果的抗癌药等药物的血液毒性评估。另外，通过利用人的临床预见性优异的本发明，还可进行人的药物给药量的设定，可以选定抑制产生血液毒性的给药条件。由于本发明能够进行药物的给药条件(给药途径、给药量、给药日程等)的验证以及经时性的变化图形的分析，因此可以推测在人临床上的药物的用量反应性及药物的适当给药间隔。另外，还可预测来自血液毒性的恢复程度。因此，除了减轻给予药物的人的身体负担以外，还容易进行给药计划的立案。
实施例
下面，根据实施例来更具体地说明本发明，但本发明并不受以下实施例的限定。
实施例中使用的小鼠等的细节如下。
(小鼠)
“tg－nog小鼠”：公益财团法人实验动物中央研究所制作
·性別：雌雄
·购入时的周龄：10周龄～18周龄
·x射线照射时的周龄：6周龄～10周龄
·来自人脐带血的cd34+细胞移植时的周龄：6周龄～10周龄
·“杀细胞型抗癌药”给药开始时的周龄：10周龄～18周龄
(仪器)
·x射线照射装置：mbr－1505r(株式会社日立medical制造)
·facs：lsrii(bdbiosciences公司制造)
·血细胞分析装置：xt－2000iv(sysmex株式会社制造)
(试剂)
·拓扑替康：topotecan(sigma-aldrichjapan制造)、用生理盐水溶解至3mg/ml的浓度。
·紫杉醇(ptx)：indena(注册商标)s.p.a公司制造、用无水乙醇和cremophorel的等量混合液溶解至35mg/ml。临给药前用生理盐水稀释10倍。
·奥沙利铂：奥沙利铂(nk)、日本化药株式会社制造、用5w/v％的葡萄糖水溶液稀释至2mg/ml、3mg/ml和4mg/ml。
·7－乙基－10－羟基喜树碱(ehc)：东京化成株式会社制造
·抗hcd45抗体、抗hcd66b抗体、抗hcd16抗体、抗hcd19抗体、抗hcd3抗体、抗mcd45抗体、抗mgr－1抗体：biolegend制造
·5w/v％的葡萄糖水溶液：日本药局方葡萄糖注射液(5％的大塚糖液)、株式会社大塚制药工厂制造
(细胞)
·来自人脐带血的cd34+细胞：来自冷冻人脐带血的cd34+细胞(单一供体)、1×106细胞/小瓶、allcells,从llc购入
实施例1拓扑替康的血液毒性评估
对17周龄的tg－nog小鼠(雄16只、雌2只)照射2.5gy的x射线，之后按照40,000细胞/只移植来自人脐带血的cd34+细胞。移植后第7周，在异氟烷麻醉下从眼窝静脉丛采集外周血，确认外周血中的存活。结果见表1。
[表1]
(小鼠粒细胞≈中性粒细胞)
选择12只适合评估的小鼠，以6只为1组，分成2组，对其中一组从尾静脉单次静脉内给予5w/v％的葡萄糖溶液，对另一组从尾静脉单次静脉内给予30mg/kg(3mg/ml、10ml/kg)的拓扑替康。进行动物的分组设计，使人白细胞数和人粒细胞数的平均值大体上均匀。
在给药日、给药后第3天、第5天、第7天、第10天、第14天、第21天和第28天，在异氟烷麻醉下从眼窝静脉丛采集外周血，使用facs计测外周血中的白细胞(wbc)数。结果见图1～图4。
图1是显示在拓扑替康的血液毒性评估中来自人的白细胞(hcd45+)数的变化的曲线图。图2是显示在拓扑替康的血液毒性评估中来自小鼠的白细胞(mcd45+)数的变化的曲线图。图3是显示在拓扑替康的血液毒性评估中来自人的粒细胞(hcd66b+)数的变化的曲线图。图4是显示在拓扑替康的血液毒性评估中来自小鼠的粒细胞(mgr－1+)数的变化的曲线图。在图1～图4中，―○―表示对照组(5w/v％葡萄糖给药组)、―●―表示30mg/kg拓扑替康组。
在tg－nog小鼠中，来自小鼠的白细胞(mcd45+)和来自小鼠的粒细胞(mgr－1+)数在拓扑替康给药后第3天～第5天显示出最低值，但在第7天转为恢复。减少程度为给药前数值的约50％左右。
在tg－nog小鼠中，来自人的粒细胞(hcd66b+)在拓扑替康给药后第7天～第10天锐减，即使在给药后第28天粒细胞数也没有恢复的趋势。由此可知：在人体内30mg/kg的拓扑替康极有可能引起粒细胞减少症。
通过分别测定人及小鼠白细胞的变化可知：拓扑替康给药后对白细胞减少的影响在人中较小鼠中表现强烈，可以确认到血液毒性的种差。
实施例2－1ptx的血液毒性评估
对9周龄的tg－nog小鼠(雌35只)照射2.5gy的x射线，在3小时～5小时后按照40,000细胞/只移植来自人脐带血的cd34+细胞。移植后第5周在异氟烷麻醉下从眼窝静脉丛采集外周血，确认外周血中的存活。结果见表2。
[表2]
(小鼠粒细胞≈中性粒细胞)
选择9只适合评估的小鼠，分为对照组5只、ptx给药组4只，对照组从尾静脉内单次静脉内给予ptx的溶剂溶液(含有5v/v％的乙醇/5v/v％的cremophor的生理盐水)，ptx给药组从尾静脉内单次静脉内给予70mg/kg(3.5mg/ml、20ml/kg)的ptx。进行动物的分组设计，使人白细胞数和人粒细胞数的平均值大体上均匀。
给药后第4天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天和第42天，在异氟烷麻醉下从眼窝静脉丛采集外周血，使用facs计测外周血中的白细胞数。结果见图5～图10。
图5是显示在紫杉醇的血液毒性评估中来自人的白细胞(hcd45+)的变化的图。图6是显示在紫杉醇的血液毒性评估中来自小鼠的白细胞(mcd45+)数的变化的图。图7是显示在紫杉醇的血液毒性评估中来自人的粒细胞(hcd66b+)的变化的图。图8是显示在紫杉醇的血液毒性评估中来自小鼠的粒细胞(mgr－1+)数的变化的图。在图5～图8中，□表示对照组(含有5v/v％的乙醇/5v/v％的cremophor的生理盐水给药组)，■表示70mg/kg的紫杉醇组。
图9是显示在紫杉醇的血液毒性评估中对照组的来自人的白细胞(hcd45+)数及来自小鼠的白细胞(mcd45+)数的比例的变化的图。图10是显示在紫杉醇的血液毒性评估中紫杉醇给药组的来自人的白细胞(hcd45+)数及来自小鼠的白细胞(mcd45+)数的比例变化的图。在图9～图10中，□表示来自小鼠的白细胞(mcd45+)数，■表示来自人的白细胞(hcd45+)数。
在tg－nog小鼠中，来自小鼠的粒细胞(mgr－1+)在ptx给药后第4天显示出减少，在给药后第7天显示出恢复性。来自人的粒细胞(hcd66b+)及来自人的白细胞(hcd45+)在ptx给药后第21天减少，来自人的粒细胞(hcd66b+)数在给药后第4天～第21天显示出低值，在给药后第28天转为增加，显示出恢复性。由此可知：在人体内70mg/kg的ptx极有可能引起粒细胞减少症。另外，由ptx给药后的人及小鼠的白细胞变化的分别测定的结果可知两者均减少，在反应性上不存在大的种差。在减少～恢复的期间变化中，小鼠显示出给药后～7天的期间恢复，相对于此，人显示出给药后～28天的恢复期间，在恢复期间上存在种差。由此可知：通过使用本模型，在推测人白细胞的减少程度的同时，还可推测恢复期间。根据恢复期间的推测，还可以设定对人的给药间隔。
实施例2－2奥沙利铂的血液毒性评估
对6周龄的tg－nog小鼠(雌，24只)照射2.5gy的x射线，3小时～4小时后按40,000细胞/只移植来自人脐带血的cd34+细胞。移植后第5周在异氟烷麻醉下从眼窝静脉丛采集外周血，确认外周血中的存活。结果见表3。
[表3]
选择11只适合评估的小鼠，分为对照组5只、奥沙利铂给药组6只。对照组从尾静脉单次静脉内给予5w/v％的葡萄糖溶液，而在奥沙利铂给药组的6只中，每2只分别从尾静脉单次静脉内给予20mg/kg(2mg/ml、10ml/kg)、30mg/kg(3mg/ml、10ml/kg)、以及40mg/kg(4mg/ml、10ml/kg)。进行动物的分组设计，使人白细胞数和人粒细胞数的平均值大体上均匀。
给药后第4天、第7天、第14天、第17天、第21天和第28天，在异氟烷麻醉下从眼窝静脉丛采集外周血，使用facs计测外周血中的白细胞数。由于30mg/kg给药动物和40mg/kg给药动物在给药后第7天为止死亡，因此图11～图14显示20mg/kg给药组的结果。
图11是显示在奥沙利铂的血液毒性评估中来自人的白细胞(hcd45+)的变化的曲线图。图12是显示在奥沙利铂的血液毒性评估中来自小鼠的白细胞(mcd45+)数的变化的曲线图。图13是显示在奥沙利铂的血液毒性评估中来自人的粒细胞(hcd66+)的变化的曲线图。图14是显示在奥沙利铂的血液毒性评估中来自小鼠的粒细胞(mgr－1+)的变化的曲线图。在图11～图14中，―○―表示对照组(5w/v％的葡萄糖给药组)、―●―表示20mg/kg的奥沙利铂组。
在tg－nog小鼠中，来自小鼠的白细胞(mcd45+)和来自小鼠的粒细胞(mgr－1+)在奥沙利铂给药后明显减少，未显示出恢复倾向，给药后第17天处于濒死状态。
在tg－nog小鼠中，来自人的粒细胞(hcd66+)在奥沙利铂给药后第4天显示出轻微的减少，第7天以后显示出缓慢的恢复倾向。由此可知：即使是对小鼠而言显示出明显的粒细胞减少的给药量，在人体内引起粒细胞减少症的可能性也较低。
通过分别测定人及小鼠白细胞的变化可知：奥沙利铂给药后对白细胞减少的影响在小鼠中较在人中表现强烈，在血液毒性评估中还可确认到不同于拓扑替康的种差。
实施例3－1基于集落形成试验的ehc及ptx对粒细胞系骨髓造血前驱细胞的影响
对于来自人脐带血的hcd34+细胞移植后第14周的小鼠，在异氟烷麻醉下从腹大动脉放血进行安乐死处置，之后采集大腿骨。使用iscove改良dulbecco培养基(imdm、lifetechnologies公司制造)，无菌操作从大腿骨中冲洗出细胞，制备细胞悬浮液。以通过了尼龙滤器(直径为35μm、细胞滤网、bdbiosciences公司制造)的滤液作为骨髓细胞液。对一部分骨髓细胞液进行facs分析，算出来自人的白细胞(hcd45+)及来自小鼠的白细胞(mcd45+)的细胞数的比率。
将人cd45+细胞悬浮于甲基纤维素培养基(methoculth4534、stemcelltechnologies公司制造)中使达到5×104细胞/1.1ml/皿，分别以0.14nm、0.4nm、1.2nm、3.7nm、11nm、33nm加入ehc、以0.12nm、0.4nm、1.1nm、3.3nm、10nm、30nm、90nm加入ptx，之后接种在皿中，在37℃、5％co2中培养16天。
将小鼠cd45+细胞悬浮于甲基纤维素培养基(methocultgfm3534、stemcelltechnologies公司制造)中使达到2×104细胞/1.1ml/皿，分别以1.2nm、3.7nm、11nm、33nm、100nm、300nm加入ehc、以0.12nm、0.4nm、1.1nm、3.3nm、10nm、30nm、90nm加入ptx，之后接种在皿中，在37℃、5％co2中培养8天。
溶剂对照使用二甲基亚砜(dmso、最终浓度为0.002v/v％)。各浓度用2皿进行试验。
在培养期间结束后计测来自粒细胞系的集落形成数，算出各浓度的集落数的平均值。以溶剂对照的平均集落数为100％的相对值的形式表示，算出显示50％及90％的集落形成抑制率的浓度(ic50值、ic90值)。结果见表4。
[表4]
由此可知：与小鼠相比，在人体内ehc对骨髓中粒细胞系前驱细胞的影响大。该结果与以下情形一致：在外周血的解析结果中，小鼠白细胞在一时性减少后表现出恢复，相对于此，人白细胞在减少后未见恢复性，在反应性上确认到了大的差异。这与以下情形一致：在人和小鼠中ptx对骨髓中粒细胞前驱细胞的影响几乎相同，在外周血的解析结果中人和小鼠的白细胞减少的程度几乎相同。
实施例3－2基于集落形成试验的拓扑替康和奥沙利铂对粒细胞系骨髓前驱细胞的影响
按照与实施例3－1所述相同的方式，进行骨髓细胞的采集制备、培养和集落形成抑制率的计算。
相对于人cd45+细胞而言，在拓扑替康的曝露浓度为0.41nm、1.2nm、3.7nm、11.1nm、33.3nm、100nm、奥沙利铂的曝露浓度为123nm、370nm、1,111nm、3,333nm、10,000nm、30,000nm下进行。
相对于小鼠cd45+细胞而言，在拓扑替康的曝露浓度为3.7nm、11.1nm、33.3nm、100nm、300nm、900nm、奥沙利铂的曝露浓度为13.7nm、41.2nm、123nm、370nm、1,111nm下进行。
在拓扑替康中溶剂对照使用生理盐水，在奥沙利铂中溶剂对照使用蒸馏水。
以溶剂对照的平均集落数为100％的相对值的形式表示，算出显示50％及90％的集落形成抑制率的浓度(ic50值、ic90值)。结果见表5。
[表5]
和ehc一样，与小鼠相比，在人体内拓扑替康对骨髓中粒细胞前驱细胞的影响较大。该结果与下述情形一致：在拓扑替康给药后的tg－nog小鼠的外周血中，人白细胞在明显减少后未见恢复，确认到了与小鼠白细胞的变化存在较大差异。
奥沙利铂对骨髓中粒细胞前驱细胞的影响与拓扑替康和ehc相反，与人相比在小鼠中的影响较大。该结果与以下情形一致：在奥沙利铂给药后的tg－nog小鼠的外周血中，人白细胞没有显示出明显的减少，相对于此，小鼠白细胞显示出明显的减少，在反应性上确认到了较大的差异。
由上述结果可知：tg－nog小鼠的外周血中的人及小鼠的白细胞组分的变化反映了对骨髓中的人及小鼠造血前驱细胞的影响，作为评估在给予抗癌药时因骨髓毒性引起的血液毒性的模型有用，对给药计划的立案也有用。
另外，对于tg－nog小鼠，通过同时分析其相对于在小鼠体内维持分化的来自人的白细胞和来自小鼠的白细胞的药物应答性，显示了其是能够对血液毒性的反应性及恢复性以及敏感性的种差进行评估的模型。
因此可知：通过使用人源化的修饰型nog小鼠，可以适当评估对于来自人的血细胞的血液毒性的反应性及恢复性，这对于来自小鼠的血细胞则有所不同，而且不限于特定的评估对象药物。根据本发明，可以提供一种骨髓毒性的人临床预见性优异的评估对象药物的血液毒性评估方法、以及评估对象药物的血液毒性评估用模型。