一种免疫微球层析快速HIT抗体检测试纸的制作方法

文档序号:14909731发布日期:2018-07-10 23:04阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种免疫微球层析快速HIT抗体检测试纸,可以在临床帮助诊断患者中肝素诱导的血小板减少症抗体,包括使用即时免疫层析定量或定性测定患者中肝素-PF4复合物诱导的免疫球蛋白抗体的体液水平是否高于预定范围,其特征在于,包括如下步骤:

S1、制备肝素-PF4复合物,将缓冲液配制的肝素制剂与血小板4因子在室温条件按照以下体积比1:1-1:5但不限于该比例进行混合孵育,向反应液中加入10%-50%的糖类物质作为稳定剂;

S2、蛋白A颗粒制备,选用但不限于染色后的乳胶微球、荧光微球、制备包被有蛋白A用于显色,便于仪器定量或定性检测肝素/PF4抗体浓度;

S3、反应膜的制备,其特征在于反应垫包括但不限于NC膜,硝酸纤维膜、醋酸纤维膜,反应垫上质控线与检测线各一条,检测线固定喷涂有S1步骤肝素/PF4复合物,质控线固定喷涂有人免疫球蛋白抗体。

S4、样品垫制备,应用但不限于玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、NC膜,用一种或几种防腐剂、表面活性剂、血清白蛋白、氯化钠、糖类试剂进行浸泡,置于37-56℃干燥处理,储存于密封包装袋中待用;

S5、颗粒标记的样品垫,在干燥后的S4样本垫近端标记S2中的蛋白A颗粒试剂,置于37-56℃干燥处理;

S6、血液分离膜组装,将测试条的样品垫上加入血液分离膜,用于分离血细胞,允许分离后的血浆或血清进入样品垫;

S7、试纸条的组装,将S5中标记蛋白A的样本垫组装到带有黏胶载体塑料板一端,用力按压,将一种不限于硝酸纤维素膜或NC膜组装于试纸条中部,试纸条的另一端粘贴吸水膜,维持样品侧向层析,将试纸条放入塑料盒中,将样品垫的一段放置在塑料盒底部,吸水纸一端固定于塑料盒顶端;

临床样本检测,室温下在试纸条的样品垫部位加入全血样本,反应;

在步骤S1中的制备肝素-PF4复合物,肝素制剂和血小板因子4的缓冲液包括但不限于磷酸盐、Tris、HEPES等常规的缓冲液。

在步骤S1中肝素制剂和血小板因子4的混合比例包括但不限于体积比1:1-1:5进行混合反应,

在步骤S1中加入的糖类物质包括但不限于加入蔗糖、海藻糖、葡萄糖等糖类,糖类物质加入比例包括但不限于10%-50%。

在步骤S2中的蛋白A颗粒制备的显色颗粒包括但不限于染色微球、荧光微球。

在步骤S3中的样品垫处理试剂表面活性剂包括但不限于吐温、曲拉通等,血清白蛋白包括但不限于牛血清白蛋白、人血清白蛋白等,糖类物质包括但不限于加入蔗糖、海藻糖、葡萄糖等糖类。

2.根据权利要求1所述的测试样本是全血或成分血液。

3.根据权利要求1所述的一种免疫微球层析快速HIT抗体检测试纸制备方法,其特征在于,微球或显色颗粒粒径包括但不限于0.1-1微米。

4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于试纸条中部的纤维素膜上分布有检测线和质控线。

5.根据权利要求1所述的显色颗粒标记为重组蛋白A标记颗粒。

6.根据权利要求4所述的检测线标记有S1步骤中的肝素/PF4复合物。

7.根据权利要求4所述的质控线标记有重组蛋白A抗体,该抗体特异性结合重组蛋白A标记颗粒。

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