本发明涉及金胺o快速检测试剂盒、检测方法及在检测中药材的应用。
背景技术：
金胺o，又称盐基淡黄、金丝雀黄、奥黄、碱性槐黄等，为化工色素，被国际癌症研究所(iarc)列为人类致癌化合物，主要用于醋纤、棉织品的染色，和纸张、皮革、油漆等的着色，金胺o对人体具有一定毒性作用，对皮肤黏膜有轻度刺激，可引起结膜炎、皮炎和上呼吸道刺激症状，长期过量食用，将对人体肾脏、肝脏造成损害甚至致癌，卫生部早于2008年将其列为非食用物质。
中药养生是近些年的热门话题，然中药材质量实在令人担忧，采用化工染料对中药材染色的问题更是屡见不鲜，其中金胺o主要用于黄色药材的染色，曾发现被用于劣质黄柏、蒲黄、延胡索等中药材、中药饮片的非法染色，病人在不知情的情况下长期使用，容易引起暂时性或持久性的病理状态，甚至危及生命，故在中药材、中药饮片和中成药中均不得检出。
目前对于中药材中非法添加金胺o的检测，主要采用薄层色谱法(tlc法)、高效液相色谱法(hplc法)、高效液相色谱串联紫外检测(hplc-pad法)、高效液相色谱-质谱联用(hplc-ms/ms)二级质谱对样品进行确认。高效液相色谱及液质联用色谱等方法是最先进的现代分析手段，能够很好的分离检测金胺o，并且达到一个很低的检测限，灵敏度非常高。采用标准品对照法，可以非常精确的检测出样本中金胺o的含量。
另外，市面上还未发现有金胺o的快检试剂盒，若采用上述实验方法，操作过程都比较复杂，实验时间长、实验成本高，且并不适用于现场检测。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种金胺o快速检测试剂盒，具有分析成本非常低，对金胺o的专属性强、灵敏度高且实验现象明显，检测结果正确率高、适用于现场快速检测样本中是否含有金胺o化学成分的快速检测。
本发明采用的技术方案如下：一种金胺o快速检测试剂盒，该试剂盒包含提取液、薄层板、点样管，以及离心管、吸管、西林瓶、取样勺、水、乙醇或甲醇等配件和配液；
所述提取液为水、乙醇、甲醇等极性溶剂的一种或几种；
所述点样管为毛细管或微量进样器；
本发明的另一个目的在于提供一种上述金胺o的快速检测试剂盒的检测方法：
一种金胺o的快速检测方法，该方法是利用该实验原理及所用试剂的如下几个性质实现的：
金胺o，化学名为盐酸氨基四甲基二氨基苯甲烷(c17h21n3·hcl)，溶于冷水，易溶于热水、乙醇等极性溶剂；金胺o通过薄层板进行富集显色，薄层板中央处会出现嫩黄色斑点，有些检测样品本身有黄色，经提取后提取液也显淡黄色，但经过点样后，会在薄层板上出现极微弱的暗黄色，不同于金胺o所显的嫩黄色，非常容易判别；另外，金胺o通过薄层板进行了一定程度的富集，所达的检测限非常低，完全能够达到快速检测少量添加的目的。
利用金胺o的上述性质，本发明设计出用溶剂提取后直接在薄层板上富集进行显色的方法，该方法包括以下步骤：
(1)、取待测中药材中加入到西林瓶中，再加入适量提取液进行提取，使金胺o尽可能多的溶到提取液中；
(2)、大力震荡若干分钟使中药材与提取液充分接触，静置1分钟后再振摇约30秒，再静置最少一分钟；
(3)、通过器械取提取液在薄层板中央处点样，可重复点样，显色。
上述步骤(1)中，所述提取液的用量为1-5ml，待测样品量为1-5g，所述提取液的体积可优选所取中药材量的0.5～2倍，这样可以将中药材中的金胺o充分提取，又不用将金胺o的含量稀释太多以降低检出效果；
上述步骤(1)中，所述提取液可以是水、乙醇、甲醇或其它极性溶剂，所述提取液可以是纯一种极性溶剂，也可以是几种混合极性溶剂，其中提取液优选为纯乙醇，其原因是因为乙醇较为安全、廉价，不会对操作者构成化学伤害，并且挥发性好，显色更快，反应效果非常好；
上述步骤(3)中的点样管可选用毛细点样管、微量注射器等，优选点样量少的毛细点样管，其原始是因为毛细点样管更为廉价、易得，并且取样量容易控制，反应效果好；
上述步骤(3)中，点样次数优选为2～3次，可使显色更为明显；
上述步骤(3)中，所述点样量加入体积为液体展开直径约5～10mm左右。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1、本发明的快速检测方法是将样品用水或乙醇等极性溶剂进行提取，直接通过薄层板点样进行显色，有些检测样品本身有黄色，经提取后提取液也显淡黄色，但经过点样后，会在薄层板上出现极微弱的暗黄色，不同于金胺o所显的嫩黄色，所以中药材基质对显色没有太多影响，从而保证了显色反应结果准确率高于98％，假阴性率为0。
2、本发明的检测方法操作简单，方便，不需要精密或大型仪器，检测时间短，一般4～6分钟内即可完成检测，而且检测结果直观通过看颜色变化就可以进行判断，非常适合从大批样品中挑选出少量的可疑样品，大大简化了检测的步骤，而只需要少量可疑的样品再进行质谱、色谱等精密检测，这也使检测成本大大降低，非常适合监管部门快速筛查的需要，对提高监管部门的运作效率、快速打击不法分子有着重大的社会效益。
3、本发明的快速检测方法其专属性强、灵敏度高、试验现象明显、检测结果准确率高、操作简单，对实验场地没有特殊要求，适用于现场快速筛查样品中是否违法添加了金胺o，尤其符合市场监管部门现场快速检查的需求，可极大的提高监管部门的运作效率。
附图说明
图1为本发明个实施例的显色效果对比图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合，下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。
实施例1：检测对象为蒲黄；
本实施例对蒲黄中是否含有金胺o进行快速检测，其具体步骤如下：
取约1g蒲黄装入加有3ml乙醇的西林瓶中，拧紧瓶盖，大力振摇约30秒，静置1分钟后再振摇约30秒，取一支毛细管，吸入待测液，在薄层板中心点样，液体展开直径约5～10mm左右，1分钟后再重复点样一次。观察薄层板中央处有嫩黄色斑点，则可判断本实施例蒲黄中含有金胺o成分。
实施例2：检测对象为延胡索。
本实施例对延胡索中是否含有金胺o进行快速检测，其具体步骤如下：
样品压碎后，取约2g装入加有5ml乙醇的西林瓶中；拧紧瓶盖，大力振摇约30秒，静置1分钟后再振摇约30秒，取一支毛细管，得待测液，在薄层板中心点样，液体展开直径约5～10mm左右，1分钟后再重复点样一次，观察薄层板中央处有嫩黄色斑点，则可判断本实施例延胡索中含有金胺o成分。
实施3：检测对象为黄柏；
本实施例对黄柏中是否含有金胺o进行快速检测，其具体步骤如下：
样品压碎后，取约5g装入加有5ml乙醇的西林瓶中；拧紧瓶盖，大力振摇约30秒，静置1分钟后再振摇约30秒。取一支毛细管，得待测液，在薄层板中心点样，液体展开直径约5～10mm左右，1分钟后再重复点样一次。观察薄层板中央处有嫩黄色斑点，则可判断本实施例黄柏中含有金胺o成分。
实施4：检测对象为黄连；
本实施例对黄连中是否含有金胺o进行快速检测，其具体步骤如下：
样品压碎后，取约2g装入加有4ml乙醇的西林瓶中；拧紧瓶盖，大力振摇约30秒，静置1分钟后再振摇约30秒，取一支毛细管，得待测液，在薄层板中心点样，液体展开直径约5～10mm左右，1分钟后再重复点样一次，1分钟后再重复点样一次。观察薄层板中央处有嫩黄色斑点，则可判断本实施例黄连中含有金胺o成分。
实施5：检测对象为黄芩；
本实施例对黄芩中是否含有金胺o进行快速检测，其具体步骤如下：
样品压碎后，取约1g装入加有3ml乙醇的西林瓶中；拧紧瓶盖，大力振摇约30秒，静置1分钟后再振摇约30秒，取一支注射器，拔出活塞，接好过滤器，下接反应管，将西林瓶内液体慢慢倒入到注射器器内，加上活塞挤压，得待测液，在薄层板中心点样，液体展开直径约5～10mm左右，1分钟后再重复点样一次。观察薄层板中央处有嫩黄色斑点，则可判断本实施例黄芩中含有金胺o成分。
实例6：金胺o检出情况对比；
采用实例5所述检测试剂和检测方法，并经检测模拟双盲中药材中非法添加金胺o的黄芩样本，对金胺o提取率、抗干扰能力、特异性试验表明该方法切实可行。与高效液相色谱法进行对比检测结果，共检测30批样品，先用本法检测判断样品中是否含有金胺o成分，然后用高效液相色谱法进行比较，结果如下：
注：“-”表示未检出，“+”表示检出阳性。
实施例1-6的检测显色对比图如图1所示。
由上表可以看出，两种方法的吻合率为100％，可见本发明显色反应结果准确率较高，假阳性率为0，本发明主要是作为现场快速初筛的，而且可以快速地将可疑样品缩小到很小范围，最后只需要对这些极少的可疑样品进行色谱、质谱等精密检测，即可检测出违法含有金胺o的样品。
本发明通过加入乙醇等极性溶剂来进行显示反应，其灵敏度高，显色明显，检测结果准确率较高，本发明通过大量样本采用本发明方法进行检测，同时进行色谱和质谱验证，发现本发明方法的准确率可以达到98％以上，假阴性率为零，此外，本发明的检测方法操作简单，方便，不需要精密或大型仪器，检测时间短，一般4～6分钟内即可完成检测，而且检测结果直观通过看颜色变化就可以进行判断，非常适合从大批样品中挑选出少量的可疑样品，大大简化了检测的步骤，而只需要少量可疑的样品再进行质谱、色谱等精密检测，这也使检测成本大大降低，非常适合监管部门快速筛查的需要，对提高监管部门的运作效率、快速打击不法分子有着重大的社会效益。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。