本发明涉及医学检测领域，特别涉及试剂、试剂盒、应用及检测方法。
背景技术：
碘是人体的必需微量元素之一，有“智力元素”之称。1994年，尿碘被世界卫生组织(who)、联合国儿童基金会(unicef)和国际碘缺乏病控制理事会(iccidd)共同选定为评价碘缺乏病病情和通过食盐加碘控制碘缺乏病效果的一个生化指标。健康成人体内的碘的总量约为30mg(20～50mg)，其中70％～80％存在于甲状腺。碘是维持人体甲状腺正常功能所必需的元素。但是人体摄入过多的碘也是有害的，日常饮食碘过量会引起“甲亢”。
碘含量的测定方法颇多，常用方法有：砷铈催化分光光度法、离子选择性电极法、x-射线荧光法、阴极溶出伏安法、同位素稀释质谱法、电感耦合等离子体原子发射光谱法和中子活化法等。其中中子活化法(icp-ms)被认为是测定尿碘的最好方法。但是该法所用的仪器特别昂贵，操作相对比较复杂，不适合大多数基层医院实验室的尿碘监测工作。本发明所用方法为砷铈催化分光光度法。who、unicef和iccidd于1994年共同推荐了一个简便、成本较低，比较适合于发展中国家开展的尿碘测定方法。该方法用氯酸在温和条件下消化尿样，经sandell-kolthoff反应后，用分光光度法测定尿碘含量。该法已申请作为国家标准方法，其可靠性和可行性已被国内分析工作者所证实。虽然氯酸消化法有效的消除了干扰物质的潜在干扰作用，并使尿碘的测定具有较高的准确性，但是该法仍有不足之处。第一，氯酸很难直接从供应商那里买到，需要在实验室利用高氯酸和氯酸钾反应来制造得到，这样就增加了实验的难度。第二，样品在消化时需加热，增加了实验的步骤和设备成本。第三，氯酸和氯酸钾有爆炸的潜在危险性。
本发明在sam.pino等尿碘测定方法的基础上，对原方法做了的改进，使测定更方便、更灵敏、更适合一般实验室。改进后，实验在酶标板上进行，试剂量减少为原来的十分之一以下。样品加入次氯酸钠溶液20分钟后加入硫酸溶液，20分钟后加入亚砷酸溶液混匀，随后加入硫酸铈铵溶液混匀，混匀后置于相对恒温的室内20分钟。实验前2步有极少量氯气生成，建议在通风处或通风橱中进行。取出放入酶标仪上读取吸光度值。该方法的灵敏度为5μg/l，标准曲线的范围为0～600μg/l，在曲线范围内线性关系良好。硫氰酸根、维生素c和维生素b2对分析的潜在影响得以消除。改进后具有准确、可靠、方便快速、经济等优点，特别适合一般实验室对碘缺乏病的监测。
技术实现要素：
本发明提供了尿碘及唾液碘常温前处理后上酶标仪检测的试剂及检测方法,用以解决现有技术的不足。
为解决上述问题，本发明的技术解决方案是：
尿碘及唾液碘常温前处理后上酶标仪检测的试剂由以下成份组成：
(1)、a试剂：次氯酸钠溶液naclomr＝74.44，0.5～2.0mol/l；
(2)、b试剂：硫酸溶液h2so4mr＝98.078，0.5～2.0mol/l；
(3)、c试剂：亚砷酸溶液h3aso3，0.01～0.2mol/l；
(4)、d试剂：硫酸铈铵溶液ce(nh4)4(so4)4·2h2o，mr＝632.6，0.01～0.2mol/l；
(5)、定标液：碘标准系列溶液(碘酸钾溶液kio3，mr＝214.0)。
所述的定标液的数量为七份，其浓度分别为：0μg/l、25μg/l、50μg/l、100μg/l、200μg/l、400μg/l、600μg/l。
尿碘及唾液碘常温前处理后上酶标仪检测的试剂及检测方法如下：
(1)、先准备一个平底的酶标板和0～50μl容量的移液器。
(2)、分别取20μl的定标液和尿液或唾液(尿样取样前摇匀样品，使沉淀物混悬；唾液先离心再取样)加入酶标板中，酶标板的各孔加入50μl的a试剂，混匀后在20℃～35℃之间一个稳定的温度环境下静置20分钟，期间需多次震荡利于气体排出。
(3)、酶标板的各孔加入50μl的b试剂，混匀后在20℃～35℃之间一个稳定的温度环境下静置20分钟，期间需多次震荡利于气体排出。
(4)、酶标板的各孔加入50μl的c试剂，随后加入50μl的d试剂，充分混匀，静置20分钟。
(5)将酶标板放入酶标仪上读取吸光度值，在上酶标仪前先在酶标仪上设置把好参数如下：
检测波长为：405nm
拟合类型：线性回归(lls)
浓度转换：线性
标记：平均值
(6)、采用以下回归方程法进行计算：
碘浓度c(μg/l)与吸光度值a的对数值成线性关系，通过定标点的吸光度值求出标准曲线回归方程c＝a+b·lga或c＝a+b·lna中的a,b值，再将样品孔的吸光度值代入方程，求出所测样品中全碘浓度。
c＝a+b·lga或c＝a+b·lna
式中：
c——碘标准系列溶液(及所测样品)中碘的质量浓度，单位为微克每升(μg/l)；
a——碘标准系列溶液(或所测样品)测定的吸光度值；
a——标准曲线回归方程的截距；
b——标准曲线回归方程的斜率。
本发明的有益效果是：消除干扰物质，误差值小，通过不间断加样缩短加样时间，延长反应时间，减小实验中的人为误差，把样品间反应时间差对实验的影响减小到误差正常范围内，以适应在酶标仪上的检测，该方法能准确定量检测的人体尿液及唾液中全碘浓度，能准确定量检测的浓度为0～600μg/l。
具体实施方式
下面对发明的具体实施方式作进一步详细说明。
本发明的尿碘及唾液碘常温前处理后上酶标仪检测的试剂由以下成份组成：
(1)、a试剂：次氯酸钠溶液naclomr＝74.44，0.5～2.0mol/l；
(2)、b试剂：硫酸溶液h2so4mr＝98.078，0.5～2.0mol/l；
(3)、c试剂：亚砷酸溶液h3aso3，0.01～0.2mol/l；
(4)、d试剂：硫酸铈铵溶液ce(nh4)4(so4)4·2h2o，mr＝632.6，0.01～0.2mol/l；
(5)、定标液：碘标准系列溶液(碘酸钾溶液kio3，mr＝214.0)。
所述的定标液的数量为七份，其浓度分别为：0μg/l、25μg/l、50μg/l、100μg/l、200μg/l、400μg/l、600μg/l。
尿碘及唾液碘常温前处理后上酶标仪检测的试剂及检测方法如下：
(1)、先准备一个平底的酶标板和0～50μl容量的移液器。
(2)、分别取20μl的定标液和尿液或唾液(尿样取样前摇匀样品，使沉淀物混悬；唾液先离心再取样)加入酶标板中，酶标板的各孔加入50μl的a试剂，混匀后在20℃～35℃之间一个稳定的温度环境下静置20分钟，期间需多次震荡利于气体排出。
(3)、酶标板的各孔加入50μl的b试剂，混匀后在20℃～35℃之间一个稳定的温度环境下静置20分钟，期间需多次震荡利于气体排出。
(4)、酶标板的各孔加入50μl的c试剂，随后加入50μl的d试剂，充分混匀，静置20分钟。
(5)将酶标板放入酶标仪上读取吸光度值，在上酶标仪前先在酶标仪上设置把好参数如下：
检测波长为：405nm
拟合类型：线性回归(lls)
浓度转换：线性
标记：平均值
(6)、采用以下回归方程法进行计算：
碘浓度c(μg/l)与吸光度值a的对数值成线性关系，通过定标点的吸光度值求出标准曲线回归方程c＝a+b·lga或c＝a+b·lna中的a,b值，再将样品孔的吸光度值代入方程，求出所测样品中全碘浓度。
c＝a+b·lga或c＝a+b·lna
式中：
c——碘标准系列溶液(及所测样品)中碘的质量浓度，单位为微克每升(μg/l)；
a——碘标准系列溶液(或所测样品)测定的吸光度值；
a——标准曲线回归方程的截距；
b——标准曲线回归方程的斜率。
本发明由标准氯酸法尿碘浓度检测试验改进后使用酶标仪替代分光光度计检测尿液及唾液中的全碘浓度，在实验方法上，次氯酸钠和硫酸替代氯酸消除干扰物质，标准氯酸法为减小误差，加硫酸铈铵溶液时采用间隔30秒钟加样，分光光度计读数采用间隔30秒钟读数，这样同时增加了人为因素，本发明通过不间断加样缩短加样时间，延长反应时间，减小实验中的人为误差，把样品间反应时间差对实验的影响减小到误差正常范围内，以适应在酶标仪上的检测。该方法能准确定量检测的人体尿液及唾液中全碘浓度，能准确定量检测的浓度为0～600μg/l。
本发明公开了一种试剂、试剂盒、应用及检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现,特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。