本发明涉及检测方法领域，特别涉及药物残留的检测方法。
背景技术：
马波沙星是氟喹诺酮类抗菌药，专门用于兽用。马波沙星作用于广谱需氧革兰氏阴性和一些革兰氏阳性菌，及支原体属，具有高度杀菌活性。作为第三代马波沙星药物，其也主要靶向作用于复制和转录酶，如dna解旋酶和拓扑异构酶iv，这两者对细菌存活都非常重要。
马波沙星通过口服和注射给药均能够吸收良好，毒副作用较低，因而越来越多地应用于治疗犬的深部及浅表皮肤感染、尿路感染。
建立狗血浆中马波沙星的检测方式，可以指导临床合理用药。目前检测血浆中马波沙星含量的方法主要有：反高效液相色谱法，高效液相色谱(hplc)-荧光检测法，荧光分光光度法，高效毛细管电泳，其中国内外最常用的是高效液相色谱法，但灵敏度不高，检测时间长，需要样品量较大。
基于此，本人拟建立一种快速高效灵敏度高的检测方式。高效液相-电喷雾-串联质谱法，检测限低，灵敏高，分析时间快，需样量少，比较顺应时代的发展。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对上述现有检测方法灵敏度不高、检测时间长、需样量大的不足，提供一种狗血浆中马波沙星含量的检测方法。
本发明所采取的技术方案是：一种狗血浆中马波沙星含量的检测方法，其包括如下步骤：
1)取含有马波沙星的狗血浆样品，加入氧氟沙星为内标，涡旋混匀8～13s，然后加入乙腈沉淀蛋白，涡旋混匀20～40s，静置2～4min，离心处理后移取上清液；
2)将步骤1)所得上清液经氮吹仪50℃吹干，加入流动相溶液复溶，过0.22μm微孔滤膜，得待测样；
3)取步骤2)所得待测样，通过lc-ms/ms法对其进行定性定量检测。
作为上述方案的进一步改进，步骤1)中所述氧氟沙星的浓度为250μg/ml。具体地，氧氟沙星为氟喹诺酮类抗菌药，其分子结构与马波沙星相似，分子量相近，同时与马波沙星相比稳定性更高，因此本发明选取氧氟沙星作为内标，可更好地保证该检测方法的准确性和重现性。
作为上述方案的进一步改进，步骤1)中所述的离心处理过程中温度控制在3～5℃，离心速度为12000r/min，离心时间为10min。具体地，该离心处理条件的限定可有效提高沉淀与上清液的稳定性，使离心效果更好，有利于保证后期检测的准确度。
作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述流动相溶液由乙腈与浓度为0.1％的甲酸水溶液以体积比20:80混合而成。具体地，该流动相溶液与离心所得的上清液具有优异的相容性，有利于保证后期检测的准确度。
本发明的有益效果是：本发明采用氧氟沙星作为内标，以乙腈沉淀血浆蛋白，大大提高了狗血浆中马波沙星的提取率，并进一步采用lc-ms/ms法对其进行定量检测，所得检测结果准确，且检测过程步骤简单、特异性高、耗时短，为马波沙星临床药代动力学等提供了快捷、精准的分析测定方法。
附图说明
本发明的图1a是待测样中马波沙星的离子流色谱图；
本发明的图1b是待测样中内标氧氟沙星的离子流色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行具体描述，以便于所属技术领域的人员对本发明的理解。有必要在此特别指出的是，实施例只是用于对本发明做进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，所属领域技术熟练人员，根据上述发明内容对本发明作出的非本质性的改进和调整，应仍属于本发明的保护范围。同时下述所提及的原料未详细说明的，均为市售产品；未详细提及的工艺步骤或制备方法为均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或制备方法。
本发明的狗血浆中马波沙星含量的检测方法，其包括如下步骤：
1)取含有马波沙星的狗血浆样品，加入50μl浓度为250μg/ml的氧氟沙星为内标，涡旋混匀8～13s，然后加入乙腈沉淀蛋白，涡旋混匀20～40s，静置2～4min，离心处理，离心处理过程中温度控制在3～5℃，离心速度为12000r/min，离心时间为10min，后移取上清液；
2)将步骤1)所得上清液经氮吹仪50℃吹干，加入流动相溶液复溶，所述流动相溶液由乙腈与浓度为0.1％的甲酸水溶液以体积比20:80混合而成，然后过0.22μm微孔滤膜，得待测样；
3)取步骤2)所得待测样，通过lc-ms/ms法对其进行定量检测。
具体地，步骤3)中所述lc-ms/ms法的检测条件如下表1所示，最终检测结果如附图1a和附图1b所示，其中附图1a为待测样中马波沙星的离子流色谱图，附图1b为待测样中内标物氧氟沙星的离子流色谱图。
表1lc-ms/ms法的检测条件
上述实施例为本发明的优选实施例，凡与本发明类似的工艺及所作的等效变化，均应属于本发明的保护范畴。