本发明属于残留溶剂检测分析方法，具体涉及阿哌沙班原料药中残留溶剂的气相色谱检测方法。
背景技术：
阿哌沙班（apixaban）是一种新型口服直接xa因子抑制剂，由百时美施贵宝公司和辉瑞公司联合研制。目前，阿哌沙班已获欧盟及美国在内的多个国家批准，用于降低非瓣膜性房颤患者中风和全身性栓塞的风险。此外，还可用于降低已接受择期髋关节或膝关节置换手术成人患者的静脉血栓栓塞、深静脉血栓或肺血栓、癌症患者静脉血栓形成的风险，并对血栓栓塞具有较好的治疗效果。
在该原料药的合成和精制过程中，需要用到甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、n,n-二甲基甲酰胺（dmf）、二甲基亚砜（dmso）、甲酰胺等8种有机溶剂。这些残留溶剂对人体健康有一定的不利影响，需要除去或使其残留量不超过2015年版《中国药典》和ich的规定限度。
技术实现要素：
本发明提供一种仅通过普通的毛细管柱气相色谱仪便可实现阿哌沙班原料药中残留溶剂的气相色谱检测。
为实现本发明目的，这种阿哌沙班原料药中残留溶剂的气相色谱检测方法其特征在于包括如下操作步骤：
a.供试品的dmf溶液：将阿哌沙班原料药分别溶于n,n-二甲基甲酰胺和二甲基亚砜中，得到阿哌沙班质量浓度为23～27mg/ml的供试品的dmf溶液和供试品的dmso溶液；
b.混合对照溶液的配制：将丙酮、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、二甲基亚砜和甲酰胺中分别加入n,n-二甲基甲酰胺，配制成质量浓度分别为23～27mg/ml、23～27mg/ml、13～17mg/ml、2.8～3.9mg/ml、23～27mg/ml、23～27mg/ml和1.1～1.8mg/ml的单一对照品储备液；再分别将0.5～0.6ml各单一对照储备液混合后，用n,n-二甲基甲酰胺稀释190～210倍得到混合对照溶液；
c.dmf对照溶液的配制：将dmf与dmso混合后，配制成dmf质量浓度为0.020～0.028mg/ml的dmso溶液即dmf对照溶液；
d.采用聚乙二醇毛细管柱气相色谱法分别检测上述混合对照溶液、供试品的dmf溶液、供试品的dmso溶液和dmf对照溶液，检测条件为：
色谱柱：db-wax，30m×0.45mm×0.85μm，
进样量：2μl，进样口温度：230℃，分流比：20:1，
载气：n2，流速：2ml/min，
检测器：氢火焰离子化检测器fid，检测器温度：250℃，
升温程序：起始温度40℃，维持2min；以2℃/min的速率升温至50℃，再以20℃/min的速率升温至220℃，维持5min。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明方法简便易行，利于操作。本方法采用直接进样方式，适用于检测样品中甲酰胺残留，而顶空进样方式不适用于甲酰胺（沸点210℃）的检测，同时直接进样不需要对溶液进行加热平衡（加热平衡时间一般在30min左右），顶空进样方式中每个样品瓶只能进样一次，直接进样方式中样品溶液可多次重复进样，缩短了样品准备过程和检测时间。
2、本发明方法简便易行，适用于实验室的研发和企业大规模生产的产品质量控制。在我司阿哌沙班的合成和精制过程中，可有效去除甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲酰胺等有机溶剂的残留，dmf的残留量也远小于2015年版《中国药典》和ich的规定限度0.5%。只有dmf残留量较高（0.064%），而2015年版《中国药典》和ich的规定限度0.088%，需要对dmf进行重点关注。此方法中，对于dmf的检测，只需配制dmf的单一对照溶液，不需要对其它有机溶剂配制对照溶液，有效减少了操作过程和检验时间，dmf对照溶液的稳定性可达到10天，进一步方便对dmf残留量的检测。本发明建立了测定阿哌沙班原料药中可能残留的8种有机溶剂的毛细管柱气相色谱检测方法，结果表明，该方法专属性强，分离度良好，方法稳定，简便易行，灵敏度高，操作简便，精确度高。在考察的浓度范围内线性关系良好，回收率符合规定，可以准确有效的对残留溶剂进行定量，耐用性良好，成本低廉，可作为阿哌沙班原料药中残留溶剂的检测方法，检测结果能满足结果质量判定，即适用于实验室的研发，同时适用于企业大规模生产的产品质量控制。
附图说明
图1为本发明混合对照溶液气相色谱图谱。
图2为本发明阿哌沙班dmf溶液气相色谱图谱。
图3为本发明dmf对照溶液气相色谱图谱。
图4为本发明阿哌沙班dmso溶液气相色谱图谱。
具体实施方式
实施例1：
1.1样品制备：
混合对照溶液的配制：分别精密移取丙酮、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、dmso、甲酰胺适量至10ml量瓶中，加入dmf稀释定容，摇匀，配制成质量浓度分别为25.5mg/ml丙酮的dmf溶液、25.2mg/ml乙酸乙酯的dmf溶液、15.7mg/ml甲醇的dmf溶液、3.80mg/ml二氯甲烷的dmf溶液、25.3mg/ml乙醇的dmf溶液、25.7mg/mldmso的dmf溶液和1.51mg/ml甲酰胺的dmf溶液，即各单一对照品储备液；再精密量取0.5ml各单一对照储备液后将其混合，然后加入dmf稀释定容至10ml后摇匀，得到混合对照储备液；再精密量取混合对照储备液1.0ml，加入dmf稀释定容至10ml后摇匀，得到混合对照溶液；
供试品的dmf溶液的配制：精密称取阿哌沙班原料药250mg，置10ml量瓶中，加dmf溶解后定容至10ml刻度，摇匀后得到供试品的dmf溶液；
1.2采用聚乙二醇毛细管柱气相色谱法分别检测上述混合对照溶液和供试品的dmf溶液中残留溶剂的含量，检测条件为：
色谱仪：agilent7890b型气相色谱仪，
色谱柱：db-wax，30m×0.45mm×0.85μm，
进样量：2μl，进样口温度：230℃，分流比：20:1，
载气：n2，流速：2ml/min，
检测器：氢火焰离子化检测器fid，检测器温度：250℃，
升温程序：起始温度40℃，维持2min；以2℃/min的速率升温至50℃，再以20℃/min的速率升温至220℃，维持5min。
混合对照溶液进样6针，计算峰面积相对标准偏差（rsd）不得大于10%，混合对照溶液中，色谱图中被测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5，用被测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数应大于5000，按照外标法以峰面积计算待测样品溶液中残留溶剂的含量。
1.3测定结果及结论
测定结果见表1～表2及图1～图2。
结论：从表1、表2中可以看出，混合对照溶液中各有机溶剂之间的离度均＞1.5，理论塔板数大于5000，均符合规定。表明该方法可很好的检测阿哌沙班原料药中残留溶剂，样品中检测出dmso有残留，但远小于2015年版《中国药典》和ich的规定限度0.5%。典型图谱参见图1、图2。从图1中可以看出，此方法可以完全分离七种残留溶剂，且峰型良好；从图2中可看出，阿哌沙班样品色谱图中未检测出丙酮、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、甲酰胺，而dmso峰面积很小。
实施例2：
2.1样品制备：
dmf对照溶液的配制：精密移取dmf适量至10ml量瓶中，加dmso稀释定容，摇匀，配制成质量浓度为5.39mg/ml单一对照品储备液；再精密量取dmf单一对照储备液1.0ml，加入dmso稀释定容至10ml，摇匀后即得到dmf对照储备液；再精密量取混合对照储备液1.0ml，加入dmso稀释定容至20ml，摇匀后即得到dmf对照溶液备用；
供试品的dmso溶液的配制：精密称取阿哌沙班原料药250mg，置10ml量瓶中，加入dmso溶解，定容至刻度，摇匀后即得到供试品的dmso溶液备用；
2.2采用聚乙二醇毛细管柱气相色谱法分别检测上述混合对照溶液和供试品溶液中残留溶剂的含量，检测条件为：
色谱仪：agilent7890b型气相色谱仪，
色谱柱：db-wax，30m×0.45mm×0.85μm，
进样量：2μl，进样口温度：230℃，分流比：20:1，
载气：n2，流速：2ml/min，
检测器：氢火焰离子化检测器fid，检测器温度：250℃，
升温程序：起始温度40℃，维持2min；以2℃/min的速率升温至50℃，再以20℃/min的速率升温至220℃，维持5min。
2.3测定结果及结论
测定结果见表3～表4及图3～图4。
结论：从表3、表4中可以看出，dmf对照溶液中dmf峰前后无干扰，理论塔板数大于5000，均符合规定，样品中检测出dmf有残留，但小于2015年版《中国药典》和ich的规定限度0.088%。典型图谱参见图3、图4。从图3中可以看出，此方法可以检测出dmf，前后无干扰，且峰型良好；从图4中可看出，阿哌沙班样品色谱图中检测出dmf存在残留。