一种鱼卵、仔稚鱼形态绘制方法与流程

本发明涉及渔业领域，具体涉及一种鱼卵、仔稚鱼形态绘制方法。

背景技术

早期发育阶段鱼类种类的鉴定是鱼类早期生活史研究的基础。传统的鱼类早期资源种类鉴别方法主要以早期个体形态特征为基础，利用不同种类早期发育阶段在各种可数性状、可量性状以及描述性状上的差异进行不同种类的区分。从仔稚鱼研究历史来说，国外仔稚鱼的研究开展很早，甚至可追溯至19世纪八九十年代，其主要集中于鱼类产卵习性和胚胎发育的研究。欧美、日本等发达国家由于在鱼类早期生活史相关学科研究方面的长期积累，拥有庞大的鱼类早期生活研究科研人员队伍，形成了完整丰富的鱼类早期资源形态鉴定资料。由于早期生活史阶段个体形态法的动态变化、分类特征有限、特别是一些亲缘关系接近的种类中，形态差异极为细微，鉴定结果存在误差和分类者的主观判断。因而运用经典形态学方法必须熟悉各科、属、种的幼体形态特征，系统的掌握不同发育阶段个体形态变化，并依之作为不同种类之间形态比较的基础，往往长期从事该领域研究的专家才能进行鉴定。近年来，随着分子生物学技术的快速发展，为解决鱼类早期发育阶段分类问题提供了一种新的途径。该方法利用种类群体间较高的遗传同质性，通过已知的种类样本获得种间的鉴别特征，并使用这些特征对待检测样本进行比照鉴定。该方法克服了形态学鉴定中主观性强的缺点，还具有灵敏度高、重复性好等优点，已在鱼类早期资源种类鉴定中广泛应用，基于生物解剖镜对鱼卵和仔稚鱼种类的鉴定，通过对鱼卵和仔稚鱼种类进行个体形态特征进行观察并绘制发育形态图，以往的形态特征绘制往往需要长期从事绘画和从事鱼类特征相关领域的专家才可绘制出鱼类早期资源的形态特征图，过程费时费力且效率较低。

技术实现要素：

针对上述问题，本发明的目的是提供一种鱼卵、仔稚鱼的形态绘制方法，解决现有海洋、淡水等水域鱼卵、仔稚鱼形态特征绘制的不足。本发明为实现上述目的，采用如下技术方案：

一种鱼卵、仔稚鱼形态绘制方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)鱼卵和仔稚鱼样品的采集，采集的样品采用5％福尔马林溶液进行固定；

(2)将挑出的鱼卵和仔稚鱼在生物解剖镜下进行发育阶段判定和初步种类鉴定；

(3)将初步种类鉴定的样品放入高分辨率显微镜下对鱼卵、仔稚鱼进行拍照处理；

(4)运用图片处理软件对拍摄图片进行叠图处理，导出图片；

(5)将步骤3中拍照处理的鱼卵、仔稚鱼进行分子生物学处理；

(6)将步骤5中经过分子生物学处理后确定的种类的鱼卵和仔稚鱼与步骤4处理的图片进行对应；确定该种鱼卵、仔稚鱼所对应的此发育阶段的形态特征。

优选的，所述步骤1中，海洋鱼卵、仔稚鱼采用孔径为0.505mm筛娟制成的大型浮游生物进行表层水平拖网和垂直拖网；内陆河流的鱼卵、仔稚鱼的采集使用圆锥网进行定量采集，同时使用弶网进行辅助定性采集。

优选的，所述步骤3的鱼卵拍照处理中，卵的形状、卵径、卵膜位置，油球数量和直径，卵黄大小，胚体形态，色素形状和分布区域，胚体肌节，各主要器官的形状和位置均进行拍照；仔稚鱼的拍照处理中，首先对仔稚鱼的形态进行拍照，记录体长、头长、眼径、肛前距、体高、肌节数、鳃盖棘、齿系、肛门位置以及色素的形状和分布位置；然后进行仔稚鱼鳍条的拍摄，包括有鳍膜的消长，各鳍的分化及发育情况，棘和鳍条的数目，鳍条大小，鳍条的位置，尾鳍骨的发育状况及其形态特征。

优选的，所述步骤4中：使用photoshop软件将鱼卵、仔稚鱼的拍摄图片运用进行各清晰部位叠图处理，导出具有该条鱼卵、仔稚鱼清晰形态特征的图片。

优选的，所述步骤5中，利用线粒体的细胞色素c氧化酶i基因(coi)对鱼卵和仔稚鱼相应片段进行扩增测序，然后与coi序列数据库进行比对分析的来确定鱼卵和仔稚鱼的种类。

优选的，所述绘制方法中还包括如下的步骤：将鱼卵、仔稚鱼图片打印；将硫酸纸铺在图片上，在硫酸纸上对鱼卵、仔稚鱼形态特征进行临摹，然后扫描存为图片，确定该种类鱼卵、仔稚鱼所对应的形态特征和发育形态图。

本发明基于生物解剖镜对鱼卵和仔稚鱼进行发育阶段判定和初步种类鉴定，通过高分辨显微镜对鱼卵和仔稚鱼种类的形态特征进行拍摄处理，最终运用photoshop软件进行鱼卵、仔稚鱼各部位叠图处理，最终导出具有该条鱼卵、仔稚鱼所有形态特征的图片，然后再通过硫酸纸来临摹图片进行处理，最终得到发育形态图，克服了以往鱼卵、仔稚鱼形态特征绘制需要长期从事绘画和从事鱼类特征相关领域的专家才可绘制的不足，具备快速、准确、高效的优势。

说明书附图

图1蓝圆鰺早期形态的发育描绘图；

图2黄鳍金枪鱼早期形态发育描绘图；

图3脂眼凹肩鲹早期形态发育描绘图；

图4条纹鯻早期形态发育描绘图。

具体实施方式

下面通过具体的实施例对本发明的技术方案进行详细的说明，但是本发明的范围不受这些实施例的限制。本发明为一种鱼卵、仔稚鱼形态绘制方法，采用以下步骤：

(1)鱼卵和仔稚鱼样品的采集，海洋鱼卵、仔稚鱼的采集按照《海洋调查规范》(gb12763·1-7-91)采用孔径为0.505mm筛娟制成的大型浮游生物网(网口内径80cm、长270cm、网口面积为0.5m²)按照预先设置的调查站位点进行表层水平拖网和垂直拖网；内陆河流的鱼卵、仔稚鱼的采集使用bongo网仿改的圆锥网进行定量采集，同时使用根据渔民绠网改制的弶网进行辅助定性采集，采集的样品使用5％福尔马林溶液固定；

(3)将挑出的鱼卵和仔稚鱼在实验室生物解剖镜下进行发育阶段判定和初步种类鉴定；

(4)将初步种类鉴定的样品放入高分辨率显微镜下对鱼卵、仔稚鱼进行拍照处理：鱼卵拍照处理中，卵的形状、卵径、卵膜位置，油球数量和直径，卵黄大小，胚体形态，色素形状和分布区域，胚体肌节，各主要器官的形状和位置均进行拍照；仔稚鱼的拍照处理中，首先对仔稚鱼的形态进行拍照，记录体长、头长、眼径、肛前距、体高、肌节数、鳃盖棘、齿系、肛门位置以及色素的形状和分布位置；然后进行仔稚鱼鳍条的拍摄，包括有鳍膜的消长，各鳍的分化及发育情况，棘和鳍条的数目，鳍条大小，鳍条的位置，尾鳍骨的发育状况及其形态特征；

(5)将鱼卵、仔稚鱼的拍摄图片运用photoshop软件进行各部位叠图处理，导出具有该条鱼卵、仔稚鱼所有清晰形态特征的图片；

(6)然后将每条拍照完的鱼卵、仔稚鱼进行分子生物学处理，利用线粒体的细胞色素c氧化酶i基因(coi)对鱼卵和仔稚鱼相应片段进行扩增测序，然后与coi序列数据库进行比对分析的方法来确定鱼卵和仔稚鱼的种类；

(7)将每条鱼经过分子生物学处理后确定的种类和前面photoshop处理的图片进行对应，即确定该种鱼卵、仔稚鱼所对应的此发育阶段的形态特征；

(8)将鱼卵、仔稚鱼最终图片打印到a4纸；将打印好的a4纸放在桌面，把专门用来临摹和描图用的硫酸纸铺在a4纸上；在硫酸纸上对鱼卵、仔稚鱼形态特征进行临摹，勾勒鱼卵、仔稚鱼各部位的形态特征；

(11)将临摹好的硫酸纸放入扫描仪进行扫描处理，将扫描好的图片导入电脑，从而确定该种类鱼卵、仔稚鱼所对应的形态特征和发育形态图；

(12)将实验室生物解剖镜下进行发育阶段判定和初步种类鉴定的鱼卵和仔稚鱼进行挑选，初步确定将每个种类不同发育期进行拍照处理，然后对每条鱼卵、仔稚鱼进行上述步骤处理。

最后应当说明的是，以上实例仅用说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明创造技术方案的实质和范围。