一种防晒护肤品防晒功效的检测方法与流程

本发明涉及检测
技术领域：
，具体涉及一种防晒护肤品防晒功效的检测方法。
背景技术：
随着人们物质生活水平的不断提升，生活观念的改观，在外出工作、旅游、购物等活动的时候皮肤会长时间暴露在紫外线辐射下。为达到防止肌肤被晒黑、晒伤等目的而采取一些方法来阻隔或吸收紫外线。一般的防晒方法：涂抹防晒产品、使用防晒衣等物品、食用防晒食物等。由于涂抹防晒类护肤品简洁方便，因此越来越多的人外出会擦涂防晒类护肤品。防晒护肤品的功效主要取决于防晒护肤品的spf和pa值，spf指数高，紫外线防护时间就会长。传统的防晒类护肤品的防晒功效主要是用小鼠、猴子甚至人体进行实验，这些实验方法的实验周期长，费用高，不适合大量外源物质的筛选。技术实现要素：为了解决上述问题，本发明的目在于，提供一种防晒护肤品防晒功效的检测方法；该方法能快速，并科学有效的对防晒类护肤品的防晒功效进行评价。本发明是通过以下技术方案来实现的：一种防晒护肤品防晒功效的检测方法，具体方法为：(1)将待检测的防晒护肤品溶解到含有斑马鱼的养殖水中，所述待检测的防晒护肤品在养殖水中的浓度为400-800mg/l；(2)将含有待检测的防晒护肤品、斑马鱼的养殖水,于紫外线照射，以含有斑马鱼的养殖水组不经过紫外线照射为空白对照(-uv)，含有斑马鱼的养殖水组经过紫外线照射为模型对照(+uv)；(3)取出步骤(2)中各组经过紫外线照射的斑马鱼，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位，测量斑马鱼鱼鳍面积；(4)通过对比含有防晒护肤品养殖水中的斑马鱼鱼鳍与-uv和+uv中斑马鱼鱼鳍面积的大小，对所述防晒护肤品的防晒效果进行检测。所述防晒护肤品防晒功效的检测方法，具体方法为：(1)准备：实验前，挑选一对雌雄斑马鱼于交配盒，用隔板将斑马鱼雌雄分开，夜晚或黑暗状态放置10h；第二天早上抽开隔板，斑马鱼交配产卵；捞出斑马鱼，收集斑马鱼鱼卵；(2)以抽开隔板时间为0hpf(hourspost-fertilization)，在72hpf时开始实验；(3)具体实验：a.配制好实验溶液，以养殖水组不经过紫外线照射为-uv，以养殖水组经过紫外线照射为+uv；b.用玻璃平皿装载斑马鱼，用养殖水或pbs清洗2-3遍，将每条斑马鱼编号，置于体式显微镜下拍照；对体式显微镜进行长度标定，在体式显微镜5倍镜下进行拍照，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位，对应并记录好编号，用6孔板为实验容器，每孔1条斑马鱼，加入实验溶液5ml；c.将加入实验溶液和斑马鱼的6孔板置于cl-1000紫外交联仪(波长302nm和365nm)下照射，每次照射30s，共照射5-6次；d.照射完毕后，将斑马鱼从6孔板用塑料吸管吸出，用养殖水清洗1-2遍。然后将斑马鱼转移至24孔板，对应并记录好斑马鱼编号；将24孔板置于生化培养箱中培养；e.于紫外线照射后24、48h时，在体式显微镜5倍镜下进行拍照，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位，记录照片和对应的斑马鱼的编号；导出图片至电脑，使用image测量斑马鱼鱼鳍面积；f.通过对比含有防晒护肤品养殖水中的斑马鱼鱼鳍与-uv和+uv中斑马鱼鱼鳍面积的大小，对所述防晒护肤品的防晒效果进行检测。较佳地，所述挑选的雌雄斑马鱼为野生型ab系斑马鱼。较佳地，所述(1)中实验前，每晚22:00左右，挑选一对雌雄斑马鱼于交配盒，用隔板将斑马鱼雌雄分开，夜晚或黑暗状态放置10h；第二天早上8:00左右抽开隔板，斑马鱼交配产卵；捞出斑马鱼，收集斑马鱼鱼卵。较佳地，所述24孔板置于生化培养箱，培养箱温度为28±0.5℃。本发明以斑马鱼为实验载体，通过斑马鱼鱼鳍完整性对防晒类护肤品的防晒功效进行评价。经过长时间科学验证，模式生物斑马鱼能很好解决这些问题。斑马鱼个体小，易饲养，繁殖快，实验周期短，成本低廉，与人类基因同源性达到87％。因此能快速，并科学有效的对防晒类护肤品的防晒功效进行评价。斑马鱼鱼鳍透明，并对外界环境刺激非常敏感，在受到紫外线辐射后会做出相应反应。因此斑马鱼可以很好的对防晒类护肤品的防晒功效进行评价。附图说明图1为本发明以不同浓度的奥克立林，紫外线照射前、照射后1天、2天斑马鱼鱼鳍面积对照；以无紫外线照射的养殖水组作为-uv，以经过紫外线照射的养殖水组作为+uv。图2为本发明以不同浓度的奥克立林紫外线照射后1天、2天斑马鱼鱼鳍相对面积对照；以无紫外线照射的养殖水组作为-uv，以经过紫外线照射的养殖水组作为+uv。图3为本发明以不同浓度的奥克立林紫外线照射前斑马鱼鱼鳍照片；以无紫外线照射的养殖水组作为-uv，以经过紫外线照射的养殖水组作为+uv。图4为本发明以不同浓度的奥克立林紫外线照射后1天斑马鱼鱼鳍照片；以无紫外线照射的养殖水组作为-uv，以经过紫外线照射的养殖水组作为+uv。图5为本发明以不同浓度的奥克立林紫外线照射后2天斑马鱼鱼鳍照片；以无紫外线照射的养殖水组作为-uv，以经过紫外线照射的养殖水组作为+uv。具体实施方式一种防晒护肤品防晒功效的检测方法，具体实验方法为：(1)实验前(大概每晚22:00)，挑选一对雌雄(野生型ab系)斑马鱼于交配盒，用隔板将斑马鱼雌雄分开，夜晚(黑暗)状态放置10h。(2)第二天早上(8:00左右)抽开隔板，斑马鱼交配产卵。(3)捞出斑马鱼，收集斑马鱼鱼卵。(4)以抽开隔板时间为0hpf，在72hpf时开始实验。(5)配制好实验溶液，以养殖水组不经过紫外线照射为-uv，以养殖水组经过紫外线照射为+uv。(6)用玻璃平皿装载斑马鱼，用养殖水(或pbs)清洗2～3遍。将每条斑马鱼编号，置于体式显微镜下拍照。(7)对体式显微镜进行长度标定。在体式显微镜5倍镜下进行拍照，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位。对应并记录好编号，用6孔板为实验容器，每孔1条斑马鱼，加入实验溶液5ml。(8)将加入实验溶液和斑马鱼的6孔板置于cl-1000紫外交联仪(波长302nm和365nm)下照射，每次照射30s，共照射5～6次。(9)照射完毕后，将斑马鱼从6孔板用塑料吸管吸出，用养殖水清洗1～2遍。然后将斑马鱼转移至24孔板，对应并记录好斑马鱼编号。(10)将24孔板置于生化培养箱，于28±0.5℃培养。(11)于紫外线照射后24、48h时，在体式显微镜5倍镜下进行拍照，拍取斑马鱼卵黄囊以下至尾部的照片，聚焦在斑马鱼鱼鳍部位。记录照片和对应的斑马鱼的编号。(12)导出图片至电脑，使用image测量斑马鱼鱼鳍面积。-uv组，相对于紫外线照射前，发育24、48h鱼鳍面积的变化，见表1。表1紫外线照射情况-uv紫外线照射前100.00％紫外线照射24h134.20±2.04％紫外线照射48h159.98±5.87％+uv组和药物浓度组，相对于-uv组鱼鳍面积比例的变化，详见表2.表2由上表1表2可以得出如下结论：(1)-uv组，斑马鱼鱼鳍完整，且鱼鳍面积随着时间推移正常发育。(2)+uv组，斑马鱼鱼鳍与-uv相比较有明显损伤。(3)与-uv组相比，奥克立林各浓度组有明显损伤，与+uv组相比，斑马鱼鱼鳍面积损伤较小。且随着浓度的增加，而损伤面积越小。(4)根据-uv、+uv和药物组的数据比较，斑马鱼防晒模型有效，模型建立成功。上述实施例，只是本发明的较佳实施例，并非用来限制本发明实施范围，故凡以本发明权利要求所述的特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括在本发明权利要求范围之内。当前第1页12