本发明涉及医学检测
技术领域：
，特别是涉及一种快速检测水蛭抗凝血酶活性的试验箱及检测方法。
背景技术：
根据2015版药典要求，水蛭抗凝血酶活性测定的条件较为苛刻，需要在36±0.5℃的水浴中进行检测，且试验仪器较大，不方便携带与快速检测，但目前水蛭多为野生，在测定野生水蛭的抗凝血酶活性时，需要采集后邮寄回实验室进行抗凝血酶活性的测定，不能在现场进行快速测定，影响采购及采集周期。因此本领域技术人员致力于开发一种可在野外进行快速检测鲜活水蛭中的抗凝血酶活性的试验箱及快速的检测方法。技术实现要素：有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种可在野外进行快速检测鲜活水蛭中的抗凝血酶活性的试验箱及快速的检测方法。为实现上述目的，本发明提供了一种快速检测水蛭抗凝血酶活性的试验箱，包括0.9％氯化钠溶液、含0.5％纤维蛋白原的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液、配制好的凝血酶溶液。较佳的，还包括刻度离心管、试管、进样器、剪刀、烧杯、温度计。一种快速检测水蛭抗凝血酶活性的检测方法，包括以下步骤：1)称取一定重量剪碎的水蛭置于刻度离心管中，搅拌均匀，所述刻度离心管盛有一定体积的0.9％氯化钠溶液；2)浸提25～35分钟，时时振摇，静置3～8分钟；3)用第一进样器精密量取一定体积的上清液置于试管中，再加入含0.5％(牛)纤维蛋白原(以凝固物计)的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液，摇匀；4)用第二进样器滴加配制好的凝血酶溶液，边滴加边摇匀至凝固，记录消耗凝血酶溶液的体积和浓度；5)按下列公式计算每单位重量所含抗凝血酶活性单位：其中，u为每单位重量所含抗凝血酶活性单位；c1为凝血酶溶液浓度；v1为消耗凝血酶溶液的体积；c2为供试水蛭浓度，为步骤1)中称取水蛭的重量除以氯化钠溶液的体积；v2为步骤3)中量取的上清液体积；6)根据测定的环境温度，对步骤5)所得结果进行校准，得最终供试水蛭每单位重量所含抗凝血酶活性单位u1：其中a.环境温度为20℃以下，u1＝u-10；b.环境温度为20～40℃,u1＝u；c.环境温度为40℃以上,u1＝u+10。较佳的，所述步骤2)中浸提30分钟，静置5分钟。较佳的，所述三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液ph值为7.2～7.4。较佳的，用第二进样器滴加配制好的凝血酶溶液时，每1分钟滴加一次，每次滴加5μl。本发明的有益效果是：本发明中快速检测水蛭抗凝血酶活性的试验箱方便携带、体积小、重量轻、成本低、检测结果精准；本发明中一种快速检测水蛭抗凝血酶活性的检测方法能够快速测定水蛭中抗凝血酶含量，检测结果精准、设备要求低、检测快速、可适用于野外现场操作。具体实施方式下面以实施例对本发明作进一步说明，此处所描述的实施例仅用以解释本发明，并不用以限定本发明。实施例12018年5月于四川省广安市九龙镇，野外捕获野生日本医蛭若干，采用本发明的快速检测水蛭抗凝血酶活性的试验箱进行在野外进行检测。试验箱中，包括5支10ml刻度离心管，内装0.9％氯化钠溶液5ml，试管(9×110mm)5支，1瓶配置好的凝血酶溶液；1瓶配置好的含0.5％纤维蛋白原的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液；1把剪刀；2个烧杯；1台百分之一电子天平；1支500ul进样器；2支100ul进样器，1支温度计。将捕获到的日本医蛭随机选选取六只，分成两组分别为试验组1-1和试验组1-2，分别将两组水蛭置于两个烧坏中，剪碎，分别检测水蛭抗凝血酶活性。其中试验组1-1作如下处理：1)称取重量m为1g剪碎的水蛭置于刻度离心管中，搅拌均匀，其中,刻度离心管盛有体积v为5ml的0.9％氯化钠溶液；其余剪碎的水蛭立即冰冻，作为对照组1-1。2)盖上塞子,浸提25分钟，时时振摇，静置3分钟；3)用第一进样器即一支100ul进样器精密量取上清液体积v2为100ul置于试管中，再用500μl进样器加入含0.5％(牛)纤维蛋白原(以凝固物计)的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液200μl，摇匀；三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液ph值为7.2；4)用第二进样器即另一支100ul进样器滴加配制好的凝血酶溶液，边滴加边摇匀至凝固，每1分钟滴加一次，每次滴加5μl记录消耗凝血酶溶液的体积v1为35ul和浓度c1为：43u/ml5)按下列公式计算每单位重量所含抗凝血酶活性单位u:u＝75.2u/g其中，c2为供试水蛭浓度，c2＝1g/5ml＝0.2g/ml；6)根据测定的环境温度，试验环境为26.3℃，对步骤5)所得结果进行校准，得最终供试水蛭每单位重量所含抗凝血酶活性单位u1＝u＝75.2u/g试验组1-2采用与试验组1-1相同的方法检测水蛭中的抗凝血酶活性，得结果如下u1＝70.8u/g试验组1-2剪碎未用的水蛭浆立即冰冻，作为对照组1-2。对冰冻后拿回实验室的对照组1-1和对照组1-2，按照药典第一部“水蛭”项下记录的方法检测对照组1-1和对照组1-2，记录所含抗凝血酶活性单位，分别为74.5u/g、70.1u/g。实施例22018年1月于广西玉林市陆川县，野外捕获野生宽体金线蛭若干，采用本发明的快速检测水蛭抗凝血酶活性的试验箱进行在野外进行检测。试验箱中，包括5支10ml刻度离心管，内装0.9％氯化钠溶液5ml，试管(9×110mm)5支，1瓶配置好的凝血酶溶液；1瓶配置好的含0.5％纤维蛋白原的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液；1把剪刀；2个烧杯；1台百分之一电子天平；1支500ul进样器；2支100ul进样器，1支温度计。将捕获到的宽体金线蛭随机选选取六只，分成两组分别为试验组2-1和试验组2-2，分别将两组水蛭置于两个烧坏中，剪碎，分别检测水蛭抗凝血酶活性。其中试验组2-1作如下处理：1)称取重量m为1g剪碎的水蛭置于刻度离心管中，搅拌均匀，其中,刻度离心管盛有体积v为5ml的0.9％氯化钠溶液；其余剪碎的水蛭立即冰冻，作为对照组2-1.2)盖上塞子,浸提30分钟，时时振摇，静置5分钟；3)用第一进样器即一支100ul进样器精密量取上清液体积v2为100ul置于试管中，再用500μl进样器加入含0.5％(牛)纤维蛋白原(以凝固物计)的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液200μl，摇匀；三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液ph值为7.4；4)用第二进样器即另一支100ul进样器滴加配制好的凝血酶溶液，边滴加边摇匀至凝固，每1分钟滴加一次，每次滴加5μl记录消耗凝血酶溶液的体积v1为10ul和浓度c1为43u/ml；5)按下列公式计算每单位重量所含抗凝血酶活性单位u：u＝21.5u/g其中，c2为供试水蛭浓度，c2＝1g/5ml＝0.2g/ml；6)根据测定的环境温度，试验环境为15.9℃，对步骤5)所得结果进行校准，得最终供试水蛭每单位重量所含抗凝血酶活性单位u1＝u-10＝11.5u/g试验组2-2采用与试验组2-1相同的方法检测水蛭中的抗凝血酶活性，得结果如下u1＝10.9u/g试验组2-2剪碎未用的水蛭浆立即冰冻，作为对照组2-2。对冰冻后拿回实验室的对照组2-1和对照组2-2，按照药典第一部“水蛭”项下记录的方法检测对照组2-1和对照组2-2，记录所含抗凝血酶活性单位，分别为11.9u/g、10.5u/g。实施例32018年7月于重庆市万州区长滩镇，野外捕获野生宽体金线蛭若干，采用本发明的快速检测水蛭抗凝血酶活性的试验箱进行在野外进行检测。试验箱中，包括5支10ml刻度离心管，内装0.9％氯化钠溶液5ml，试管(9×110mm)5支，1瓶配置好的凝血酶溶液；1瓶配置好的含0.5％纤维蛋白原的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液；1把剪刀；2个烧杯；1台百分之一电子天平；1支500ul进样器；2支100ul进样器，1支温度计。将捕获到的宽体金线蛭随机选选取六只，分成两组分别为试验组3-1和试验组3-2，分别将两组水蛭置于两个烧坏中，剪碎，分别检测水蛭抗凝血酶活性。其中试验组3-1作如下处理：1)称取重量m为1g剪碎的水蛭置于刻度离心管中，搅拌均匀，其中,刻度离心管盛有体积v为5ml的0.9％氯化钠溶液；其余剪碎的水蛭立即冰冻，作为对照组2-1。2)盖上塞子,浸提35分钟，时时振摇，静置8分钟；3)用第一进样器即一支100ul进样器精密量取上清液体积v2为100ul置于试管中，再用500μl进样器加入含0.5％(牛)纤维蛋白原(以凝固物计)的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液200μl，摇匀；三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液ph值为7.3；4)用第二进样器即另一支100ul进样器滴加配制好的凝血酶溶液，边滴加边摇匀至凝固，每1分钟滴加一次，每次滴加5μl记录消耗凝血酶溶液的体积v1为10ul和浓度c1为43u/ml；5)按下列公式计算每单位重量所含抗凝血酶活性单位u：u＝21.5u/g其中，c2为供试水蛭浓度，c2＝1g/5ml＝0.2g/ml；6)根据测定的环境温度，试验环境为40.3℃，对步骤5)所得结果进行校准，得最终供试水蛭每单位重量所含抗凝血酶活性单位u1＝u+10＝31.5u/g试验组3-2采用与试验组3-1相同的方法检测水蛭中的抗凝血酶活性，得结果如下：u1＝33.9u/g试验组3-2剪碎未用的水蛭浆立即冰冻，作为对照组3-2。对冰冻后拿回实验室的对照组3-1和对照组3-2，按照药典第一部“水蛭”项下记录的方法检测对照组3-1和对照组3-2，记录所含抗凝血酶活性单位，分别为31.2u/g、34.0u/g。将实施例1-至3中各试验组与对照组结果进行对比，得结果见表1。表1实施例1至3试验组与对照组检测结果对照表试验组对照组相对偏差实施例1-175.274.50.5％实施例1-270.870.10.5％实施例2-111.511.91.8％实施例2-210.910.51.9％实施例3-131.531.20.5％实施例3-233.934.00.2％综上，采用本发明方法检测的水蛭抗凝血酶活性与药典采用方法检测结果相对偏差低于药典的2.0％要求，数据基本一致。以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本
技术领域：
中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。当前第1页12