一种苦水玫瑰花水中香气成分的分析方法与流程

本发明涉及分析检测的技术领域，特别涉及一种苦水玫瑰花水中香气成分的分析方法。

背景技术：

甘肃永登县主产的中国苦水玫瑰是中国玫瑰和钝齿蔷薇的杂交种，历经200多年的栽培，形成了闻名遐迩的“苦水玫瑰”品牌，其特点是花繁汁多、清香纯正，苦水镇也因此享有“中国玫瑰第一乡”的美誉。玫瑰花水是玫瑰花蒸馏提取制成的含少量玫瑰精油的产品，适量的玫瑰花水具有抗衰老的功效。目前国内没有关于玫瑰花水的加工工艺标准，也没有产品的行业标准和国家标准。因此，对苦水玫瑰花水的特征香气成分进行定性定量分析，将为苦水玫瑰花水产品质量标准的确定提供非常有效的依据。

目前，国内有关玫瑰花水香气成分的报道较少，杜鹃等通过静态吸附法，二次蒸馏法，溶剂萃取法对新疆喀什地区玫瑰花水中的芳香成分进行捕获富集检测，其中，以二次蒸馏法富集效果最为理想，共获得玫瑰花水中残留的22种芳香组分，但用二次蒸馏法处理样品时间较长；虞伊林等人采用大孔树脂吸附法对种植于上海的紫枝玫瑰花水香气进行萃取富集，分析和比较了5月～7月间所得花水的主要香气成分并对其质量进行评价，月份不同，花水的成分亦不相同，但大孔树脂吸附法萃取前处理周期较长且所用玫瑰花水较多，会造成大量玫瑰花水的浪费。目前针对中国苦水玫瑰花水香气成分分析及定量的研究尚未报道。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明目的在于提供一种苦水玫瑰花水中香气成分的分析方法。本发明提供的方法操作快速简便、灵敏度高、成本低，具有良好的重复性和精密度，可以满足苦水玫瑰花水中8种特征香气成分快速测定的需求，适合大批量样品的高通量分析。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种苦水玫瑰花水中香气成分的分析方法，包括以下步骤：

(1)将苦水玫瑰花水和二氯甲烷涡旋混合，得到混合溶液；

(2)将所述步骤(1)得到的混合溶液进行离心分离，得到二氯甲烷层；

(3)对所述步骤(2)得到的二氯甲烷层依次进行气相色谱-质谱联用分析和气相色谱分析，得到苦水玫瑰花水中香气成分的定性和定量结果。

优选地，所述步骤(1)中苦水玫瑰花水与二氯甲烷的体积比为1～4:1。

优选地，所述步骤(1)中涡旋混合的时间为1.5～2.5min，转速为3000～3200rpm。

优选地，所述步骤(2)中离心分离的时间为3～8min，转速为10000～15000rpm，温度为0～8℃。

优选地，所述步骤(3)中气相色谱-质谱的条件为：hp-innowax毛细管柱型，规格60m×0.250mm×0.50μm，柱始温60℃，保持1.0min，以2℃/min程序升温至255℃，保持20min；载气为高纯氦，恒流模式，柱流量0.8ml/min，不分流；进样口温度260℃，离子源温度230℃，传输线温度250℃；电离方式ei，电子能量70ev，扫描范围m/z30～400，采集方式为全扫描模式。

优选地，所述步骤(3)中气相色谱的条件为：hp-innowax毛细管柱，规格60m×0.250mm×0.50μm，柱始温60℃，保持1.0min，以2℃/min程序升温至212℃，保持1min；载气为高纯氮，氮气流量0.8ml/min，分流比30:1；fid检测器温度260℃，进样口温度260℃。

本发明提供了一种苦水玫瑰花水中香气成分的分析方法。本发明以二氯甲烷为萃取溶剂对苦水玫瑰花水中的香气成分进行萃取富集，然后依次通过气相色谱-质谱联用(gc/ms)和气相色谱(gc)进行定性和定量分析。本发明提供的分析方法操作快速简便、灵敏度高、成本低，具有良好的重复性和精密度，可以满足苦水玫瑰花水中8种特征香气成分快速测定的需求，适合大批量样品的高通量分析，为苦水玫瑰花水的掺杂掺假分析提供了有效的鉴别方法。实施例结果表明，由本发明提供的分析方法对苦水玫瑰花水中香气成分进行检测，苦水玫瑰花水中8种特征性香气成分在相应浓度范围内线性关系良好，相对标准偏差(rsd)小于9.45％，回收率为71.25％～104.05％，检出限最低为0.41mg/l，说明本发明提供的分析方法回收率和精密度良好，符合分析的要求。

附图说明

图1为本发明实施例1中苦水玫瑰花水香气成分气相色谱图。

具体实施方式

本发明提供了一种苦水玫瑰花水中香气成分的分析方法，包括以下步骤：

(1)将苦水玫瑰花水和二氯甲烷涡旋混合，得到混合溶液；

(2)将所述步骤(1)得到的混合溶液进行离心分离，得到二氯甲烷层；

(3)对所述步骤(2)得到的二氯甲烷层依次进行气相色谱-质谱联用分析和气相色谱分析，得到苦水玫瑰花水中香气成分的定性和定量结果。

本发明将苦水玫瑰花水和二氯甲烷涡旋混合，得到混合溶液。在本发明中，所述苦水玫瑰花水优选为苦水玫瑰花经水蒸气蒸馏法提取玫瑰精油时产生的副产物；所述二氯甲烷优选为色谱纯级。在本发明中，所述苦水玫瑰花水与二氯甲烷的体积比优选为1～4:1，更优选为3:1。本发明以二氯甲烷为萃取溶剂，对苦水玫瑰花水中的香气成分进行萃取富集，可获得较多的色谱组分，且只需一次萃取，不需额外添加其他助剂，操作步骤简单。

在本发明中，所述苦水玫瑰花水和二氯甲烷涡旋混合的时间优选为1.5～2.5min，涡旋混合的转速优选为3000～3200rpm。

得到混合溶液之后，本发明将所述混合溶液进行离心分离，得到二氯甲烷层。在本发明中，所述离心分离的时间优选为3～8min，更优选为5min，转速优选为10000～15000rpm，更优选为13000rpm，温度优选为0～8℃，更优选为4℃。

得到二氯甲烷层后，本发明将二氯甲烷层依次进行气相色谱-质谱联用分析和气相色谱分析，得到苦水玫瑰花水中香气成分的定性和定量结果。

在本发明中，所述气相色谱-质谱联用分析优选在气相色谱-质谱联用仪中进行；所述气相色谱-质谱联用分析的条件优选为：hp-innowax毛细管柱型，规格60m×0.250mm×0.50μm，柱始温60℃，保持1.0min，以2℃/min程序升温至255℃，保持20min；载气为高纯氦，恒流模式，柱流量0.8ml/min，不分流；进样口温度260℃，离子源温度230℃，传输线温度250℃；电离方式ei，电子能量70ev，扫描范围m/z30～400，采集方式为全扫描模式。在本发明的具体实施例中，优选使用美国agilent公司、型号为agilent7890a/5975c的气相色谱-质谱联用仪。

在本发明中，将所述二氯甲烷层进行气相色谱-质谱联用分析，得到gc/ms谱图后，本发明优选对gc/ms谱图进行分析，确定其中香气组分的种类。本发明优选利用nist11标准谱库检索对谱图中检测出的香气组分进行初步定性，然后用香料标准品对香气组分进行进一步确证，再结合相关文献，确定苦水玫瑰花水中的香气成分。

在本发明中，所述用香料标准品对香气组分进行确证具体优选为：在相同气相色谱条件下，对香料标准品进行气相色谱测试，确定香料标准品的保留时间。在本发明中，所述香料标准品优选为芳樟醇、香茅醇、橙花醇、香叶醇、苯甲醇、苯乙醇、甲基丁香酚和丁香酚标准品，在本发明具体实施例中，所述香料标准品优选自dr.ehrenstorfer公司。

通过气相色谱-质谱联用分析对苦水玫瑰花水中香气成分定性之后，本发明对所述二氯甲烷层进行气相色谱分析，得到苦水玫瑰花水中香气成分的定量结果。在本发明中，所述气相色谱分析优选在气相色谱仪中进行；所述气相色谱分析的条件优选为：hp-innowax毛细管柱，规格60m×0.250mm×0.50μm，柱始温60℃，保持1.0min，以2℃/min程序升温至212℃，保持1min；载气为高纯氮，氮气流量0.8ml/min，分流比30:1；fid检测器温度260℃，进样口温度260℃。在本发明的具体实施例中，优选使用美国pe公司、型号为clarus600的气相色谱仪。

在本发明中，所述气相色谱分析具体优选为：

(1)将芳樟醇、香茅醇、橙花醇、香叶醇、苯甲醇、苯乙醇、甲基丁香酚和丁香酚标准品溶解于二氯甲烷中，得到混合标准储备(二氯甲烷)溶液；所述混合标准储备(二氯甲烷)溶液中芳樟醇、香茅醇、橙花醇、香叶醇、苯甲醇、苯乙醇、甲基丁香酚和丁香酚标准品的质量浓度分别为3043mg/l、3040mg/l、3084mg/l、3182mg/l、3182mg/l、3034mg/l、2077mg/l和3448mg/l；

(2)分别移取不同体积的混合标准储备溶液和二氯甲烷混合，配制成不同质量浓度的混合标准工作(二氯甲烷)溶液；所述混合标准工作(二氯甲烷)溶液中芳樟醇、香茅醇和苯乙醇质量浓度范围为2.06～304.30mg/l，橙花醇质量浓度范围为2.09～308.40mg/l，香叶醇和苯甲醇质量浓度范围为2.16～318.20mg/l，甲基丁香酚质量浓度范围为1.41～207.70mg/l，丁香酚质量浓度范围为2.34～344.80mg/l；

(3)对步骤(2)所得的混合标准工作(二氯甲烷)溶液进行气相色谱分析，以每种标准品的色谱峰面积(y)对相应浓度(x)绘制标准曲线，并且以3倍信噪比计算方法的检出限；

(4)对所述二氯甲烷层进行气相色谱分析，根据谱图中各峰面积结合步骤(3)所得标准曲线，得到各香气成分的含量。

下面结合实施例对本发明提供的苦水玫瑰花水中香气成分的分析方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

本实施例中的香料标准品均购买于dr.ehrenstorfer公司；二氯甲烷、乙醇为色谱纯，购买自默克股份两合公司。

(1)样品处理：取甘肃省永登县种植的苦水玫瑰经水蒸气蒸馏法制得的玫瑰花水，收集于密封瓶中；准确移取15ml的玫瑰花水样品于50ml离心管中，加入5ml二氯甲烷，涡旋2min，高速冷冻离心机离心5min，转速13000r/min，然后取二氯甲烷层于进样小瓶中。

(2)苦水玫瑰花水样品挥发性香气成分的定性分析：

将二氯甲烷层进行气相色谱-质谱联用分析，其中使用的气相色谱-质谱联用仪(美国agilent公司)，型号agilent7890a/5975c；气相色谱-质谱的色谱条件为：hp-innowax毛细管柱型(60m×0.250mm×0.50μm)，柱始温60℃，保持1.0min，以2℃/min，程序升温至255℃，保持20min；载气为高纯氦，恒流模式，柱流量0.8ml/min，不分流，进样口温度260℃；离子源温度230℃，传输线温度250℃，电离方式ei，电子能量70ev，扫描范围m/z30～400，采集方式为全扫描模式。

得到gc/ms谱图后，利用nist11标准谱库对谱图中检测出的香气组分进行初步检索定性，根据gc/ms的定性结果，用香料标准品对香气组分进行进一步确证，在同一色谱条件下经气相色谱仪进样，确定香料标准品保留时间，再结合相关文献，确定苦水玫瑰花水中的香气成分。以此确定出苦水玫瑰花水中8种特征香气成分，得到的苦水玫瑰花水香气成分的气相色谱图见图1，图1中数字1表示芳樟醇(linalool)，数字2表示香茅醇(citronellol)，数字3表示橙花醇(nerol)，数字4表示香叶醇(geraniol)，数字5表示苯甲醇(benzylalcohol)，数字6表示苯乙醇(phenethylalcohol)，数字7表示甲基丁香酚(methyleugenol)，数字8表示丁香酚(eugenol)。

从图1可以看出，本方法得到的色谱图出峰较多并且峰响应较高，可以满足苦水玫瑰花水特征香气成分测定的需要。

(3)苦水玫瑰花水样品中8种特征组分的定量分析：

混合标准储备(二氯甲烷)溶液：准确称取芳樟醇、香茅醇、橙花醇、香叶醇、苯甲醇、苯乙醇、甲基丁香酚和丁香酚标准品适量用二氯甲烷溶解并定容至100ml，得到各物质质量浓度分别为3043mg/l、3040mg/l、3084mg/l、3182mg/l、3182mg/l、3034mg/l、2077mg/l和3448mg/l的混合标准储备溶液，4℃冷藏，备用。

混合标准工作(二氯甲烷)溶液：分别移取不同体积的混合标准储备溶液用二氯甲烷配制成不同质量浓度的混合标准工作溶液，其中芳樟醇、香茅醇和苯乙醇质量浓度范围为2.06～304.30mg/l，橙花醇质量浓度范围为2.09～308.40mg/l，香叶醇和苯甲醇质量浓度范围为2.16～318.20mg/l，甲基丁香酚质量浓度范围为1.41～207.70mg/l，丁香酚质量浓度范围为2.34～344.80mg/l。

取混合标准工作(二氯甲烷)溶液进行气相色谱分析，其中使用的气相色谱仪为美国pe公司生产的，型号clarus600；气相色谱条件为：hp-innowax毛细管柱(60m×0.250mm×0.50μm)，柱始温60℃，保持1.0min，以2℃/min，程序升温至212℃，保持1min；载气为高纯氮，氮气流量0.8ml/min，分流比30:1；fid检测器(260℃)，进样口温度260℃。

以每种标准品的色谱峰面积(y)对相应浓度(x)绘制标准曲线，并且以3倍信噪比计算方法的检出限，8种香气成分的标准曲线、线性相关系数及检出限(lod)结果见表1。

将二氯甲烷层进行气相色谱分析，气相色谱条件和上述方案一致；根据谱图中各峰面积结合标准曲线，得到8种香气成分的含量，所得结果见表1。

表18种香气成分的标准曲线、线性相关系数及检出限

由表1可以看出，芳樟醇、香茅醇、橙花醇、香叶醇、苯甲醇、苯乙醇、甲基丁香酚和丁香酚在相应浓度范围内线性关系良好。

(4)方法回收率与精密度考察：

混合标准储备(乙醇)溶液：准确称取芳樟醇、香茅醇、橙花醇、香叶醇、苯甲醇、苯乙醇、甲基丁香酚和丁香酚标准品适量用乙醇溶解并定容至50ml，得到各物质质量浓度分别为1236mg/l、1234mg/l、1356mg/l、1306mg/l、1090mg/l、1142mg/l、1280mg/l和1430mg/l的混合标准储备(乙醇)溶液，4℃冷藏，备用。

混合标准工作(乙醇)溶液：分别移取不同体积的混合标准储备(乙醇)溶液用乙醇配制成不同质量浓度的混合标准工作(乙醇)溶液，其中芳樟醇质量浓度范围为4.95～123.60mg/l，香茅醇质量浓度范围为4.94～123.40mg/l，橙花醇质量浓度范围为5.42～135.60mg/l，香叶醇质量浓度范围为5.22～130.60mg/l，苯甲醇质量浓度分别为4.36～109.00mg/l，苯乙醇质量浓度分别为4.57～114.20mg/l，甲基丁香酚质量浓度分别为5.12～128.00mg/l，丁香酚质量浓度分别为5.72～143.00mg/l。

在苦水玫瑰花水中分别添加3个水平的混合标准工作(乙醇)溶液用于方法回收率考察。按步骤(1)所述方法进行样品处理，然后进行气相色谱分析，气相色谱条件同步骤(3)所述，每个添加水平的样品测定6次，计算平均回收率和相对标准偏差，结果如表2。

表28种香气成分在不同添加浓度下的回收率与相对标准偏差

由表2结果可以看出，8种目标物在3种添加水平下的回收率在71.25％～104.05％之间，相对标准偏差在1.49％～9.45％之间。说明本发明提供的分析方法回收率和精密度良好，符合分析的要求。

实施例2

采用实施例1方法，对采自不同厂家生产的玫瑰花水样品进行测定，样品编号为1～5，测定结果见表3。

表3实际样品测定结果

由表3可以看出，1号工厂生产的苦水玫瑰花水中以香茅醇和苯甲醇为主要的成分，2号工厂生产的大马士革玫瑰花水以苯乙醇作为主要的成分，且含量较高，与国外相关报道一致，3、4和5号均购自于不同品牌玫瑰化妆水，厂家不一样，香气成分含量亦不一样。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。