本申请涉及一种生物样本数据质量评价用内标物、内标液、方法和试剂盒，属于分析化学领域。
背景技术：
在大数据时代，数据是重要而有价值的基础性战略资源，也是科学认知复杂现象和事物内在规律的知识宝藏。各种组学、生物信息学等生物大数据研究往往需要大量甚至海量数据来获得相关的生物学发现。液相色谱-质谱联用技术将应用范围极广的分离方法-液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，已经成为生物大数据研究中必不可少的一种手段，在生物样本的定性和定量分析、数据挖掘等诸多方面得到广泛应用。
生物大数据分析时，样本量巨大，样品的检测可能持续很长时间。液质联用仪是一个十分复杂精密的系统，随着时间的推移会受到诸多客观因素(如温度、湿度、震动、电路板老化等)的综合影响，产生不可避免的系统误差。另外，色谱柱本身的影响(如色谱柱老化，填充不均匀，柱内残留污染物等)、更换色谱柱及仪器误差(如死体积，流速变化，基线漂移等)都会产生一定的误差。此外，人的不确定性也会引入一些误差。为了获得准确和可靠的原始数据，数据使用前需要进行数据质量评价。
目前，大量样本数据质控主要在数据采集中通过质控样本(qc样本)进行评价。qc样本一般采用混合标准品溶液或混合样本溶液，它们都属于外标质量评价法。虽然混合标准品溶液法易于操作，但适合的混合标准品选择较难；混合样本溶液在样本量不太大时适用，当样本量大，样品前处理不能同批次完成时难以实现。最重要的是，外标质量评价法的qc样本间隔性地穿插于实测样本间，难以反映仪器的实时误差；并且该方法以轮廓信息评价整体数据的质量，缺乏数据细节质量的反映，易产生“假阴性”结果。
生物样本(血浆、尿液、中药提取物、复方制剂等)的化学成分极端复杂，是典型的复杂体系。实验因素对不同性质的化合物的影响不尽相同。因此，数据质量评价时对每个成分逐一评价显然是不现实的。
技术实现要素：
根据本申请的一个方面，提供了一种生物样本数据质量评价用内标物和内标液，该内标物和内标液可以准确、方便评价液质联用数据质量。
采用内标法将内标物加入到每个实测样本中，可以最大程度地反映每个实测样本数据质量。
所述生物样本数据质量评价用内标物，其特征在于，包含5-氟尿嘧啶、没食子酸、原儿茶酸、间硝基苯酚、4-叔丁基苯酚、2,4-二叔丁基苯酚中的至少一种。
可选地，所述内标物包含5-氟尿嘧啶，没食子酸，原儿茶酸，间硝基苯酚，4-叔丁基苯酚和2,4-二叔丁基苯酚。
可选地，所述生物样本包括血浆、血清、脑脊液、尿液、中药原药材、中药的任一部位、中药的加工品中的至少一种。
可选地，所述中药的加工品包括饮片、粉末、制剂中的至少一种。
具体地，所述生物样本包括但不局限于血浆，血清，脑脊液，尿液，中药原药材、饮片、粉末、制剂(中药颗粒、中药注射液等)，同时也包含但不局限于中药的不同部位以及它们的各种加工品等等。
本申请的另一方面，提供了一种生物样本数据质量评价用内标液，其特征在于，包含上述所述的生物样本数据质量评价用内标物中的至少一种。
可选地，所述生物样本数据质量评价用内标液，包含内标物；其中，所述内标物选自5-氟尿嘧啶、没食子酸、原儿茶酸、间硝基苯酚、4-叔丁基苯酚、2,4-二叔丁基苯酚中的至少一种。
可选地，所述生物样本数据质量评价用内标液，包含内标物；其中，所述内标物包含5-氟尿嘧啶，没食子酸，原儿茶酸，间硝基苯酚，4-叔丁基苯酚和2,4-二叔丁基苯酚。
可选地，所述内标液还包括溶剂；其中，所述溶剂溶解所述内标物。
可选地，所述溶剂可以使用任何适合的溶剂。如甲醇、乙醇等有机溶剂都可以。
可选地，所述溶剂包含乙腈、水、甲醇、乙醇中的至少一种。
可选地，所述溶剂选自乙腈、水、甲醇、乙醇中的至少一种。
可选地，所述溶剂选自乙腈、水、甲醇、乙醇中的至少两种以任意比例混合得到的混合物。
可选地，所述溶剂选自以任意比例混合的乙腈和水的混合物。
可选地，所述溶剂包含乙腈和水的混合物。
具体地，所述内标液包括预定浓度的内标物；和用于溶解所述内标物的溶剂。所述预定浓度为内标液中内标物的浓度。
可选地，所述内标液中4-叔丁基苯酚的浓度为最高浓度。
可选地，所述内标液中间硝基苯酚的浓度为最低浓度。
可选地，所述内标液的浓度可有本领域技术人员根据具体的被评价的生物样本进行适应性的选择。
可选地，所述内标物和/或内标液用于质谱仪和/或液相色谱仪。
可选地，所述内标物和/或内标液用于负离子化模式中。
可选地，所述质谱仪为电喷雾质谱仪。
具体地，所述内标物和/或内标液用于但不局限于电喷雾质谱仪。
本申请的另一方面，提供了一种生物样本数据质量评价的方法，其特征在于，采用上述任一项所述的生物样本数据质量评价用内标物、上述任一项所述的生物样本数据质量评价用内标液中的至少一种。
可选地，所述方法用于评价液质联用数据质量。
可选地，所述方法为基于内标法的生物样本液质联用仪负离子模式数据质量评价方法。
可选地，所述方法包括：
(1)获得待分析样本；
(2)将所述内标液与步骤(1)中所述待分析样本混合，获得待测样品；
(3)将步骤(2)中待测样品加入至测试仪器中，获得待测样品的液质联用色谱图；
(4)提取待测样品中内标物的eic色谱图，测定各内标物的参数；
(5)以第一个进样待测样品的内标物的参数为基准，计算其余各待测样本与基准样本的差值是否在设定阈值范围内，获得数据质量评价结果。
可选地，步骤(4)中所述内标物的eic色谱图选自m/z＝129.0110、169.0126、153.0191、138.0186、149.0963、205.1593的eic色谱图中的至少一种。
可选地，步骤(4)中所述内标物的eic色谱图选自m/z＝129.0110，169.0126，153.0191，138.0186，149.0963，205.1593的eic色谱图。
可选地，步骤(4)中所述内标物的参数包括内标物的保留时间、峰高、峰面积中的至少一种。
可选地，步骤(4)中所述内标物的参数包括内标物保留时间和内标物的峰高、内标物保留时间和内标物的峰面积中的一种。
可选地，步骤(4)中所述内标物的参数包括内标物保留时间和内标物峰高以及内标物的峰面积。
可选地，步骤(5)中所述数据质量评价结果包括合格或不合格。
可选地，步骤(5)包括：以第一样进样待测样品的内标物保留时间为基准，计算其余各个样本内标物与基准样本保留时间差的绝对值，各内标物绝对值均小于等于阈值的待测样品的数据质量判定为合格；否则，待测样品的数据质量判定为不合格；和/或
以第一个进样待测样品的内标物峰高或峰面积为基准，计算其余各个样本内标物与基准样本峰高或峰面积的比值，各比值范围均小于等于阈值范围的待测样品数据判定为合格；否则，待测样品的数据质量判定为不合格。
可选地，所述保留时间差的绝对值阈值根据色谱柱规格和数据用途确定。
可选地，所述峰面积或峰高的比值范围阈值根据数据用途确定。
可选地，所述方法包括：
a.获得待分析样本；
b.将内标液加入待分析样本中，充分混合，得到待测样品；
所述内标液含有内标物和用于溶解所述内标物的溶剂；
c.将待测样品注入液质联用仪中，经色谱柱分离，获得待测样品的液质联用色谱图；
d.提取待测样品m/z＝129.0110,169.0126,153.0191,138.0186,149.0963,205.1593的eic色谱图，测定各内标物的保留时间、峰高、峰面积中的至少一个；
e.以第一个进样待测样品的内标物保留时间为基准，计算第2个样本～第n个样本内标物与基准样本保留时间差的绝对值；各内标物绝对值均小于等于阈值的待测样品的数据质量判定为合格；否则，待测样品的数据质量判定为不合格；
f.以第一个进样待测样品的内标物峰高或峰面积为基准，计算第2个样本～第n个样本内标物与基准样本峰高或峰面积的比值；各比值范围均小于等于阈值范围的待测样品数据判定为合格；否则，待测样品的数据质量判定为不合格；
其中，n为样品的总个数。
作为其中一种具体的实施方式，所述方法包括：
a1、按一定制备方法制备得到待分析样本；
b1、将一定体积的内标物加入待分析样本中，充分混合，得到待测样品。所述内标物含有多种已知化合物和用于溶解所述内标物的溶剂；
c1、将待测样品注入液质联用仪中，经色谱柱分离，获得待测样品的液质联用色谱图；
d1、提取待测样品m/z＝129.0110，169.0126，153.0191，138.0186，149.0963，205.1593的eic色谱图，测定各内标物的保留时间和峰高(或峰面积)；
e1、以第一个进样待测样品的内标物保留时间为基准，计算第2个样本～第n个样本内标物与基准样本保留时间差的绝对值。各内标物绝对值均小于等于阈值的待测样品的数据质量判定为合格；否则，待测样品的数据质量判定为不合格；
f1、以第一个进样待测样品的内标物峰高(或峰面积)为基准，计算第2个样本～第n个样本内标物与基准样本峰高(或峰面积)的比值。各比值范围均小于等于阈值范围的待测样品数据判定为合格；否则，待测样品的数据质量判定为不合格。
可选地，所述方法为基于内标法的生物样本液质联用仪负离子模式数据质量评价的方法，采用了预定浓度的内标物和用于溶解所述组合物的溶剂。
可选地，上述任一项所述的内标物、上述任一项所述的生物样本数据质量评价用内标液中的至少一种用于液相色谱仪和/或质谱仪。
本申请的另一方面，提供了上述任一项所述的生物样本数据质量评价用内标物和/或上述任一项所述的生物样本数据质量评价用内标液和/或上述任一项所述的生物样本数据质量评价的方法用于基于内标法的生物样本液质联用仪负离子模式数据质量评价。
本申请的再一方面，提供了一种试剂盒，其特征在于，包含内标物和溶剂；
其中，所述内标物包含5-氟尿嘧啶、没食子酸、原儿茶酸、间硝基苯酚、4-叔丁基苯酚、2,4-二叔丁基苯酚中的至少一种；
所述溶剂包含乙腈、甲醇、乙醇、水中的至少一种。
可选地，所述溶剂包含乙腈和水的混合物。
可选地，所述内标物包含5-氟尿嘧啶，没食子酸，原儿茶酸，间硝基苯酚，4-叔丁基苯酚和2,4-二叔丁基苯酚。
可选地，所述溶剂选自乙腈、甲醇、乙醇、水中的至少一种。
可选地，上述任一项所述的试剂盒用于生物样本数据质量评价。
可选地，所述试剂盒为基于内标法的生物样本液质联用仪负离子模式数据质量评价的试剂盒。
作为其中一种具体的实施方式，所述基于内标法的生物样本液质联用仪负离子模式数据质量评价的试剂盒，包括预定浓度的内标物和用于溶解所述内标物的溶剂。
本发明提供了基于内标法的生物样本液质联用仪负离子模式数据质量评价的内标液、方法和试剂盒，其包括预定浓度的内标物和用于溶解所述内标物的溶剂，所述内标物包含5-氟尿嘧啶、没食子酸、原儿茶酸、间硝基苯酚、4-叔丁基苯酚、2,4-二叔丁基苯酚。所述内标物用于生物样品的负离子化模式中，并且其可以用于但不局限于用于电喷雾质谱仪。所述内标物可以包括一种使得能够在宽保留时间范围内进行液质联用仪负离子模式数据质量评价的混合物。
本申请中，“液质联用”，是指液相色谱-质谱联用技术，它以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。
本申请能产生的有益效果包括：
(1)本申请中提供了用于液质联用仪负离子模式数据质量评价的试剂盒，可商业化。
(2)本申请所述试剂盒绿色环保，安全实用，配置简单，保存容易，能有效进行生物样本液质联用仪负离子模式数据质量评价。
(3)本申请所述数据质量评价方法操作过程、简单易控，保留时间均匀分布。
具体实施方式
下面结合实施例详述本申请，但本申请并不局限于这些实施例。
如无特别说明，本申请的实施例中的原料均通过商业途径购买。其中，5-氟尿嘧啶，没食子酸，原儿茶酸，间硝基苯酚，4-叔丁基苯酚，2,4-二叔丁基苯酚对照品的购买来源为：北京万佳首化生物科技有限公司。
根据本申请的一种实施方式，所述基于内标法的生物样本液质联用仪负离子模式数据质量评价的组合物，其包含：预定浓度的内标物；和用于溶解所述内标物的溶剂。
可选地，所述内标物用于液相色谱仪。
可选地，所述内标物用于质谱仪。
可选地，所述内标物用于负离子化模式中。
可选地，所述内标物用于但不局限于电喷雾质谱仪。
可选地，所述内标物包含5-氟尿嘧啶，没食子酸，原儿茶酸，间硝基苯酚，4-叔丁基苯酚，2,4-二叔丁基苯酚。
可选地，所述溶解内标物的溶剂包含乙腈和水的混合物。
可选地，所述生物样本包括但不局限于血浆，血清，脑脊液，尿液，中药原药材、饮片、粉末、制剂(中药颗粒、中药注射液等)，同时也包含但不局限于中药的不同部位以及它们的各种加工品等等。
根据本申请的一种实施方式，所述基于内标法的生物样本液质联用仪负离子模式数据质量评价的方法，采用了上述任一权利要求所述的组合物，具体包括：
⑴按一定制备方法制备得到待分析样本
⑵将一定体积的内标物加入待分析样本中，充分混合，得到待测样品。所述内标物含有多种已知化合物和用于溶解所述内标物的溶剂；
⑶将待测样品注入液质联用仪中，经色谱柱分离，获得待测样品的液质联用色谱图；
⑷提取待测样品m/z＝129.0110,169.0126,153.0191,138.0186,149.0963,205.1593的eic色谱图，测定各内标物的保留时间和峰高(或峰面积)；
⑸以第一个进样待测样品的内标物保留时间为基准，计算第2个样本～第n个样本内标物与基准样本保留时间差的绝对值。各内标物绝对值均小于等于阈值的待测样品的数据质量判定为合格；否则，待测样品的数据质量判定为不合格；
⑹以第一个进样待测样品的内标物峰高(或峰面积)为基准，计算第2个样本～第n个样本内标物与基准样本峰高(或峰面积)的比值。各比值范围均小于等于阈值范围的待测样品数据判定为合格；否则，待测样品的数据质量判定为不合格。
可选地，所述内标物用于液相色谱仪。
可选地，所述内标物用于质谱仪。
可选地，所述内标物用于负离子化模式中。
可选地，所述内标物用于但不局限于电喷雾质谱仪。
可选地，所述内标物包含5-氟尿嘧啶，没食子酸，原儿茶酸，间硝基苯酚，4-叔丁基苯酚，2,4-二叔丁基苯酚。
可选地，所述溶解内标物的溶剂包含乙腈和水的混合物。
可选地，所述生物样本包括但不局限于血浆，血清，脑脊液，尿液，中药原药材、饮片、粉末、制剂(中药颗粒、中药注射液等)，同时也包含但不局限于中药的不同部位以及它们的各种加工品等等。
可选地，所述保留时间差的绝对值阈值根据色谱柱规格和数据用途确定。
可选地，所述峰面积/峰高的比值范围阈值根据数据用途确定。
本申请的一种实施方式，所述基于内标法的生物样本液质联用仪负离子模式数据质量评价的试剂盒，其包含：预定浓度的内标物；和用于溶解所述内标物的溶剂。
可选地，所述内标物用于液相色谱仪。
可选地，所述内标物用于质谱仪。
可选地，所述内标物用于负离子化模式中。
可选地，所述内标物用于但不局限于电喷雾质谱仪。
可选地，所述内标物包含5-氟尿嘧啶，没食子酸，原儿茶酸，间硝基苯酚，4-叔丁基苯酚，2,4-二叔丁基苯酚。
可选地，所述溶解内标物的溶剂包含乙腈和水的混合物。
可选地，所述生物样本包括但不局限于血浆，血清，脑脊液，尿液，中药原药材、饮片、粉末、制剂(中药颗粒、中药注射液等)，同时也包含但不局限于中药的不同部位以及它们的各种加工品等等。
实施例1伞形科中药联用仪负离子模式数据质量评价
本实施例中对伞形科中药进行数据质量评价，具体如下。
1、待分析样本的准备。
本实施例采用来自于市售的伞形科中药样本川芎(1；样本数n＝23)，防风(2；样本数n＝24)，柴胡(3；样本数n＝22)，羌活(4；样本数n＝21)，蛇床子(5；样本数n＝21)，当归(6；样本数n＝21)，白芷(7；样本数n＝22)，藁本(8；样本数n＝22)，小茴香(9；样本数n＝22)，取每种中药样本粉末各100mg，分别加入体积浓度50％甲醇0.5ml，超声提取10min，15000转/分钟高速离心10min取上清液，滤渣再次加入0.5ml体积浓度50％甲醇超声提取10min，15000转/分钟高速离心10min取上清液。合并两次得到上清的提取液。
2.将10ul内标液加入到40ul待分析样本中，充分混合，得到待测样品；
其中，10ul内标液的具体组成为：称取适量5-氟尿嘧啶，没食子酸，原儿茶酸，间硝基苯酚，4-叔丁基苯酚，2,4-二叔丁基苯酚对照品，加入乙腈-水混合溶液(乙腈和水的体积比为70:30)制得质量浓度分别为10mg/ml、1mg/ml、1mg/ml、0.3mg/ml、50mg/ml、33.33mg/ml的内标储备液。分别取上述内标母液各100ul，配制成混合内标溶液。
3.待测样品液质联用仪负离子模式数据的获取
本实施例中采用agilent1290超高效液相色谱系统(agilent，waldbronn，germany)串联6520q-tof-ms(agilentcorp，usa)。
(1)色谱方法
本实施例中采用agilent公司zorbaxeclipseplusc18色谱柱(3.0*150mm,1.8um)，流动相a相为水(0.2％甲酸)，b相为乙腈，梯度洗脱：0-15min，b相5％-100％，流速为0.4ml/min。柱温为60℃，进样量为5ul。
其中，上述物质的百分数均为体积百分数。
(2)质谱方法
本实施例中质谱采用esi离子源，负离子模式采集数据。数据采集范围m/z100-3200。温度为350℃，干燥器流速8l/min，雾化气压力40psi，毛细管电压3500v，碎裂电压175v，锥孔电压65v。
4.提取待测样品m/z＝129.0110，169.0126，153.0191，138.0186，149.0963，205.1593的eic色谱图，测定各内标物的保留时间和峰高，见表1和表2。所述内标物含有5-氟尿嘧啶，没食子酸，原儿茶酸，间硝基苯酚，4-叔丁基苯酚，2,4-二叔丁基苯酚和用于溶解所述内标物的溶剂；
其中，表1为伞形科中药内标保留时间原始数据表
表2为伞形科中药内标峰高原始数据表
5.以第一个进样待测样品um-1-001的内标物保留时间为基准，计算第2个样本～第198个样本内标物与基准样本保留时间差的绝对值。根据本实验目的，设置保留时间差的绝对值阈值为0.2min。各内标物绝对值均小于等于0.2min的待测样品的数据质量判定为合格；否则，待测样品的数据质量判定为不合格，包括：um-4-008，um-4-009，um-4-012，um-4-013，um-4-021，um-7-015，详见表3；
其中，表3为伞形科中药内标保留时间计算结果表
6.以第一个进样待测样品um-1-001的内标物峰高为基准，计算第2个样本～第198个样本内标物与基准样本峰高的比值。根据本实验目的，设置峰高的比值的绝对值阈值为2。各比值范围均小于等于2的待测样品数据判定为合格；否则，待测样品的数据质量判定为不合格，包括um-4-009，um-4-013，um-4-021，um-9-012，详见表4。
其中，表4为伞形科中药内标峰高计算结果表
从上述可以看出，该批数据整体质量良好，个别数据不合格，该方法有效发现问题样本，保证数据质量的可靠性。
表1至表4中“-”代表未检出。
本申请中所述的其他生物样本采用上述方法均可获得数据质量评价结果。
表1
表2
表3
表4
以上所述，仅是本申请的几个实施例，并非对本申请做任何形式的限制，虽然本申请以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限制本申请，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本申请技术方案的范围内，利用上述揭示的技术内容做出些许的变动或修饰均等同于等效实施案例，均属于技术方案范围内。