一种测定坎地沙坦乙酯中2-氰基-4’-溴甲基联苯含量的方法与流程

本发明属于药物检测
技术领域：
，本发明涉及一种测定坎地沙坦乙酯中2-氰基-4’-溴甲基联苯含量的方法。
背景技术：
：2-氰基-4’-溴甲基联苯是一种药物中间体，用于合成新型沙坦类抗高血压药，如洛沙坦、缬沙坦、伊普沙坦、伊贝沙坦等。2-氰基-4’-溴甲基联苯是坎地沙坦乙酯中的杂质，采用高效液相色谱法检测2-氰基-4’-溴甲基联苯的含量，灵敏度较低。因此，急需一种检测时间短，专属性强，准确度好，精密度高，重复性好的测定坎地沙坦乙酯中2-氰基-4’-溴甲基联苯含量的方法。技术实现要素：为了解决现有坎地沙坦乙酯中2-氰基-4’-溴甲基联苯含量测定的问题，本发明提供一种测定原料药中2-氰基-4’-溴甲基联苯含量的方法。本发明提供了如下的技术方案：一种测定坎地沙坦乙酯中2-氰基-4’-溴甲基联苯含量的方法，包括如下步骤：s1、取2-氰基-4’-溴甲基联苯对照品，以乙腈为溶剂，配制2-氰基-4’-溴甲基联苯对照品溶液；取原料药，以甲酸乙腈为溶剂，配制供试品溶液；s2、平行配制2份2-氰基-4’-溴甲基联苯对照品溶液，经lc-ms/ms法检测，分别获得2份对照品溶液中2-氰基-4’-溴甲基联苯的峰面积；s3、将2-氰基-4’-溴甲基联苯对照品溶液与供试品溶液混匀，作为混合溶液。s4、取混合溶液经lc-ms/ms法检测，获得混合溶液的峰面积，用外标法计算混合溶液中2-氰基-4’-溴甲基联苯的含量。优选的，所述s2步骤和所述s4步骤中lc-ms/ms法的色谱条件为：采用xselectcshc18色谱柱(2.1×100mm，2.5μm)，柱温为30℃；进样量3μl；检测器为质谱检测器，离子源为apci，正离子模式，离子对为274/193；以水为流动相a，乙腈为流动相b，流速为0.3ml/min；梯度洗脱程序为：0～1min，流动相b的体积百分数为60％；1～3min，流动相b的体积百分数由60％至90％；3～5min，流动相b的体积百分数为90％；5～5.1min，流动相b的体积百分数由90％至60％；5.1～7min，流动相b的体积百分数为60％。梯度洗脱程序t/min水乙腈040601406031090510905.1406074060本发明的有益效果是：2-氰基-4’-溴甲基联苯是坎地沙坦乙酯中的杂质，采用常规高效液相色谱法检测2-氰基-4’-溴甲基联苯，灵敏度较低，而lc-ms/ms法采用串联质谱，既能得到分子离子峰，又有碎片离子峰，可以用来进行定性和定量分析，其检测时间短，专属性强，准确度好，精密度高，重复性好，且采用标准加入法可以消除样品基质所带来的干扰。附图说明附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：图1是实施例1对照品溶液和混合溶液色谱图；图2是实施例2线性范围考察的2-氰基-4’-溴甲基联苯标准曲线图；图3是实施例5专属性试验的专属性图谱。具体实施方式实施例1一种测定坎地沙坦乙酯中2-氰基-4’-溴甲基联苯含量的方法，包括如下步骤：s1、取2-氰基-4’-溴甲基联苯对照品，以乙腈为溶剂，配制2-氰基-4’-溴甲基联苯对照品溶液；取原料药，以甲酸乙腈为溶剂，配制供试品溶液；s2、平行配制2份2-氰基-4’-溴甲基联苯对照品溶液，经lc-ms/ms法检测，分别获得2份对照品溶液中2-氰基-4’-溴甲基联苯的峰面积；s3、将2-氰基-4’-溴甲基联苯对照品溶液与供试品溶液混匀，作为混合溶液。s4、取混合溶液经lc-ms/ms法检测，获得混合溶液的峰面积，用外标法计算混合溶液中2-氰基-4’-溴甲基联苯的含量。具体的，所述s2步骤和所述s4步骤中lc-ms/ms法的色谱条件为：采用xselectcshc18色谱柱(2.1×100mm，2.5μm)，柱温为30℃；进样量3μl；检测器为质谱检测器，离子源为apci，正离子模式，离子对为274/193；以水为流动相a，乙腈为流动相b，流速为0.3ml/min；梯度洗脱程序为：0～1min，流动相b的体积百分数为60％；1～3min，流动相b的体积百分数由60％至90％；3～5min，流动相b的体积百分数为90％；5～5.1min，流动相b的体积百分数由90％至60％；5.1～7min，流动相b的体积百分数为60％。梯度洗脱程序t/min水乙腈040601406031090510905.1406074060采用实施例1中提供的梯度洗脱程序，分别对对照品溶液和混合溶液进行lc-ms/ms分析，所得色谱图如图1所示，图中标号2是对照品溶液，标号4是混合溶液，显示2-氰基-4’-溴甲基联苯的保留时间为2.858min。实施例2实施例1提供的测定方法的线性范围考察取5.300mg2-氰基-4’-溴甲基联苯至25ml容量瓶中，加乙腈溶解后，定容至刻度，摇匀，作为2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液a；精密移取0.42ml2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液a到10ml容量瓶，加乙腈稀释并定容，摇匀，作为2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液b；l200(1.7630μg/ml)：预先称量48.94mg原料药至5ml容量瓶，以0.6ml甲酸溶解，向其中加入2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液b1.0ml，乙腈定容，摇匀；l150(1.3223μg/ml)：预先称量50.93mg原料药至5ml容量瓶，以0.6ml甲酸溶解，向其中加入2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液b0.75ml，乙腈定容，摇匀；l120(1.0578μg/ml)：预先称量49.02mg原料药至5ml容量瓶，以0.6ml甲酸溶解，向其中加入2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液b0.6ml，乙腈定容，摇匀；l100(0.8815μg/ml)：预先称量52.10mg原料药至5ml容量瓶，以0.6ml甲酸溶解，向其中加入2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液b0.5ml，乙腈定容，摇匀；l50(0.4408μg/ml)：预先称量49.78mg原料药至5ml容量瓶，以0.6ml甲酸溶解，向其中加入2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液b0.25ml，乙腈定容，摇匀；l20(0.1763μg/ml)：预先称量49.01mg原料药至5ml容量瓶，以0.6ml甲酸溶解，向其中加入2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液b0.1ml，乙腈定容，摇匀；l-blank：预先称量49.15mg原料药至5ml容量瓶，以0.6ml甲酸溶解，乙腈稀释并定容，摇匀。按实施例1提供的测定方法，依次进样测定，以峰面积为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标(μg/ml)绘制标准曲线，其结果见表2，绘制的2-氰基-4’-溴甲基联苯标准曲线如图2所示。表22-氰基-4’-溴甲基联苯标准曲线实施例3实施例1提供的测定方法的加样回收试验通过加样回收的方法，对实施1提供的测定方法的准确度进行分析，取原料药50mg，精密称定，置于5ml容量瓶中，平行11份，取其中2份，测定样品中的2-氰基-4’-溴甲基联苯含量；取其中3份，分别加0.6ml甲酸溶解后加0.25ml2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液b，加乙腈定容和混匀，作为50％加标回收率溶液；取其中3份，分别加0.6ml甲酸溶解后加0.5ml2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液b，加乙腈定容和混匀，作为100％加标回收率溶液；取其中3份，分别加0.6ml甲酸溶解后加0.75ml2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液b，加乙腈定容和混匀，作为150％加标回收率溶液，按实施例1的lc-ms/ms法测定，结果见表3，结果显示，2-氰基-4’-溴甲基联苯回收率为87.64％～96％，9针的回收率rsd为3％，表明实施例1提供的测定方法具有良好的准确度。表32-氰基-4’-溴甲基联苯回收率结果实施例4实施例1提供的测定方法的精密度试验通过100％加样回收的方法，对实施例1提供的测定方法的精密度进行分析，取原料药50mg，精密称定，平行8份，取其中2份，分别加0.6ml甲酸溶解后加0.5ml2-氰基-4’-溴甲基联苯贮备液b，加乙腈定容和混匀，作为100％加标回收率溶液，按实施例1的lc-ms/ms法测定，结果见表4，结果显示，2-氰基-4’-溴甲基联苯回收率为112～122％，6针回收率rsd为4％，表明实施例1提供的测定方法具有良好的重复性。表4重复性结果实施例5实施例1提供的测定方法的专属性试验取甲酸：乙腈＝3:22(v/v)空白溶剂，实施例1中对照品溶液和混合溶液各3μl，分别注入lc-ms/ms，按本实施例1的lc-ms/ms法测定，记录色谱图，结果见图3，图中标号1位空白溶剂，标号4为实施例1中的混合溶液，标号2为实施例1中的对照品溶液，结果表明，空白溶剂和混合溶液对2-氰基-4’-溴甲基联苯的测定无干扰。实施例6实施例1提供的测定方法的稳定性试验。取实施例1中的对照品溶液，在室温下放置，考察溶液稳定性，按实施例1的lc-ms/ms法，分别进样，记录2-氰基-4’-溴甲基联苯的峰面积，记算对照品溶液峰面积rsd，结果见表5，结果表明8h内，对照品溶液的峰面积rsd为2％，说明实施例1提供的测定方法具有良好的稳定性。表5稳定性结果以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12