本发明属于生物技术领域，涉及一种测定羟乙基淀粉浓度的方法。
背景技术：
羟乙基淀粉是从玉米中提取的高分子物质，是一种50多年来广泛用于重症科、麻醉科的临床常用药。羟乙基淀粉根据相对分子质量和取代级的不同可划分成许多类型:第3代为中相对分子质量低取代级的，即2005年推出的hes溶液(130/0.4)，万汶就是(130/0.4)，与hes(200/0.5)比较，万汶的分子分布更加集中,取代级从0.5降低到0.4,而且取代方式从5:1增至9:1，取代级越高，扩容效果越好，对肝肾功能影响越小。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种测定羟乙基淀粉浓度的方法，本发明的有益效果是精密度高，操作简单。
本发明所采用的技术方案是按照以下步骤进行：
步骤1)取蒽酮用浓硫酸溶解，稀释万汶，取不同量万汶用蒸馏水补足到1ml,置于有塞10ml试管中，将全部试管放于冰水中,各加入蒽酮显色剂摇匀，再将试管放入沸水浴中煮,取出后立即放入冰水中，室温平衡，以蒸馏水按同法作空白，比色杯比色，测得吸收度a，以对照品溶液浓度c对应吸光度a进行回归计算，得出回归方程；
步骤2)静脉血放入干燥刻度离心管中室温下自然凝血,离心，吸取上层血清冷冻备用，测定时准确吸取血清或者尿液，加蒸馏水及氢氧化钡溶液混匀，再加硫酸锌溶液，混匀后离心，得到去蛋白血清滤液，然后取去蛋白血清与蒽酮试剂混合，加热，迅速置于冰水中，室温平衡，以蒸馏水按同法作空白用比色杯比色，紫外线分光光度仪器测吸光度。
进一步，步骤1)中，取蒽酮1g用浓硫酸500ml溶解，稀释万汶浓度为0.1mg/ml，分别取0.1mg/ml万汶0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8ml用蒸馏水补足到1ml,置于有塞10ml试管中，将全部试管放于冰水中,各加入蒽酮显色剂4m摇匀，再将试管放入沸水浴中煮10min,取出后立即放入冰水中5min，室温平衡10min，以蒸馏水按同法作空白，0.5cm比色杯，620nm波长比色，测得吸收度a，以对照品溶液浓度c对应吸光度a进行回归计算，得出回归方程。
进一步，回归方程:a＝0.021+9.89c,r＝0.999。
进一步，步骤2)中静脉血3ml,放入5ml干燥刻度离心管中室温下自然凝血,2h后离心15min，吸取上层血清冷冻于-20℃冰箱中备用。测定时准确吸取血清或者尿液0.5ml，加蒸馏水2.5ml及氢氧化钡溶液1ml混匀，再加硫酸锌溶液1ml，混匀后离心10min，得到去蛋白血清滤液，然后取0.1ml去蛋白血清与4ml蒽酮试剂混合，100℃加热10min，迅速置于冰水中5min，室温平衡10min，以蒸馏水按同法作空白用0.5cm比色杯，620nm波长比色，uv2100紫外线分光光度仪器测吸光度。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
标准曲线的制备
取蒽酮1g用浓硫酸500ml溶解，稀释万汶浓度为0.1mg/ml，分别取0.1mg/ml万汶0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8ml用蒸馏水补足到1ml,置于有塞10ml试管中，将全部试管放于冰水中,各加入蒽酮显色剂4m摇匀，再将试管放入沸水浴中煮10min,取出后立即放入冰水中5min，室温平衡10min，以蒸馏水按同法作空白，0.5cm比色杯，620nm波长比色，测得吸收度a，以对照品溶液浓度c对应吸光度a进行回归计算，得出回归方程。回归方程:a＝0.021+9.89c,r＝0.999。
测定方法
静脉血3ml,放入5ml干燥刻度离心管中室温下自然凝血,2h后离心15min，吸取上层血清冷冻于-20℃冰箱中备用。测定时准确吸取血清(或者尿液)0.5ml，加蒸馏水2.5ml及氢氧化钡溶液1ml混匀，再加硫酸锌溶液1ml，混匀后离心10min，得到去蛋白血清滤液，然后取0.1ml去蛋白血清与4ml蒽酮试剂混合，100℃加热10min，迅速置于冰水中5min，室温平衡10min，以蒸馏水按同法作空白用0.5cm比色杯，620nm波长比色，uv2100紫外线分光光度仪器测吸光度。
本发明测定方法精密度高，操作简单。多糖类成分在硫酸的作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与蒽酮试剂缩合成翠绿色溶液，此溶液颜色稳定，且对照品和供试品溶液在波长620nm处有特征吸收。用蒽酮的方法能测量出多糖浓度的下限50μg/ml,变异系数为2.9％。
以上所述仅是对本发明的较佳实施方式而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。