一种水产品四溴双酚A和六溴环十二烷联合检测方法与流程

本发明属于环境污染检测领域，更具体地，涉及一种水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法。
背景技术：
：四溴双酚a(tetrabromobisphenola,tbbpa)和六溴环十二烷(hexabromocyclododecane,hbcd)作为添加型阻燃剂，广泛应用于电子产品、塑料、纺织品和建筑材料等。目前，越来越多的环境介质和生物样本中都发现了tbbpa和hbcd的存在。tbbpa和hbcd作为溴代阻燃剂的添加剂，通常同时存在，并且分析检测方法相近，因此，可将这两类物质进行同时分析。施致雄等采用索氏提取法建立了一套同时测定动物源性食品中tbbpa和hbcd的超高效液相色谱-质谱的测定方法，其中前处理方法采取自动gpc结合浓硫酸除脂的净化方法，洗脱溶剂选用正己烷：二氯甲烷(1:1，v：v)。然而这种方法仅适合干样样品，因此提取前大都对生物组织湿样或半固体样品进行冷冻干燥处理，存在耗时较长、溶剂消耗较大等缺点，尤其是对于水产品，检出限较高。schecter等对美国市场310份食品中hbcd进行了调查，结果显示，hbcd的含量范围为23～593pg/g。shi等研究了中国16个省份母乳中tbbpa和hbcd，结果显示，母乳中tbbpa和hbcd的平均含量分别为7.58ng/g(脂重)和10.1ng/g(脂重)。为了对tbbpa和hbcd的环境风险进行评估，欧洲食品安全局(efsa)呼吁各成员国提供食品中tbbpa和hbcd的研究数据。然而提供的652份样品中tbbpa的分析结果大都低于检出限，并且未检出的样品类型主要是鱼类和其他水产品(n＝465)。因此，迫切需要建立更为准确、灵敏可靠、方便快捷的水产品中tbbpa和hbcd的分析方法。技术实现要素：针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，其目的在于通过快速且有效的样品前处理步骤，提取待检测样品提取液，保证四溴双酚a和六溴环十二烷的有效提取，并采用超高液相色谱和串联质谱，从而快速灵敏的检测四溴双酚a和六溴环十二烷含量，由此解决现有的四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测耗时过长、检出限较高或者不适合水产品的技术问题。为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，包括以下步骤：(1)样品前处理：将单位水产品样品和内标物采用固相分散提取上清液，并将所述上清液采用填料净化，获得待检测样品提取液；(2)将步骤(1)中获得的待检测样品提取液采用超高效液相色谱-串联质谱法获得所述待测样品的四溴双酚a和六溴环十二烷相关峰的质谱；(3)根据内标法计算样品中四溴双酚a和六溴环十二烷含量。优选地，所述水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，其步骤(1)所述将单位水产品样品和内标物采用固相分散提取上清液具体为：(1-1)将单位水产品样品粉碎，与内标物一起加入乙腈和饱和氯化钠提取分离，获得萃取液；(1-2)将步骤(1-1)中获得的萃取液氮吹浓缩，获得粗提物；(1-3)将步骤(1-2)中获得的粗提物，采用无水硫酸镁除去水分并c18填料净化，取上清液过滤获得待检测样品提取液。优选地，所述水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，其步骤(1-1)中对于每克水产品样品加入20ng至50ng13c-tbbpa和d18-hbcd混合内标物。优选地，所述水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，其步骤(1-1)中提取分离具体为：重复萃取2次或以上。优选地，所述水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，其所述步骤(1-1)中每次萃取，对于每克水产品样品加入4ml至6ml乙腈和2ml至4ml饱和氯化钠。优选地，所述水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，其步骤(1-2)中对于每克水产品样品氮吹浓缩至0.5至1ml。优选地，所述水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，其所述步骤(2)超高效液相色谱条件如下：色谱柱：c18型色谱柱，长100mm,内径4.6mm,填料粒径2.7μm；流动相包括：a相为甲醇；b相为超纯水；梯度洗脱程序：0～4.5min,90％a；4.5～5.5min,90～100％a；5.5～6.5min,100％a；6.5～10min,100～90％a。流速：0.7ml/min；柱温：40℃；进样量：10μl。优选地，所述水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，其步骤(2)质谱仪器条件如下：电离方式：电喷雾离子源，负离子模式(esi-)；三重四级杆质谱检测；喷雾电压：-4500v；质谱扫描方式：多反应离子监测(mrm)；入口电压：-10v；碰撞室出口电压：-15v。优选地，所述水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，其步骤(3)质谱内标法采用的被检测物离子条件如下：tbbpa：母离子542.8，子离子417.9，去簇电压-130v，碰撞电压-55；α-hbcd、β-hbcd以及γ-hbcd：母离子640.6，子离子79.0，去簇电压-80v，碰撞电压-31；13c-tbbpa：母离子554.9，子离子429.0，去簇电压-110v，碰撞电压-67；d-18-α-hbcd,d18-β-hbcd以及d18-γ-hbcd：母离子657.9，子离子78.8，去簇电压-77v，碰撞电压-31。优选地，所述水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，其步骤(3)采用基质匹配的标准曲线标定四溴双酚a和六溴环十二烷含量。总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有益效果：本发明提供了一种快速样品前处理的高效液相色谱-串联质谱法应用于快速分析水产品中tbbpa和hbcd的分析，简便、快速、灵敏度高，方法检出限为0.14～0.16μg/kg，定量下限为0.12～0.55μg/kg，实际样品的加标回收率为74.0％～121％，整个检测过程耗时约30分钟，相对于现有的检测方法(耗时约20小时至48小时)大幅缩短，可满足批量水产品中tbbpa和hbcd的分析和定量。附图说明图1是实施例5不同萃取次数对tbbpa和hbcd提取效果的比较；图2是实施例5本发明和ase方法对tbbpa和hbcd提取效果比较；图3是实施例6不同净化填料对tbbpa和hbcd回收率的影响；图4是实施例6不同c18含量对净化回收率的影响；图5是实施例6本发明和gpc方法对净化回收率比较；图6是实施例7tbbpa和hbcd单体的总离子谱图；图7是实施例9tbbpa和hbcd各单体基质和无基质匹配标准曲线，其中：(a)tbbpa；(b)α-hbcd；(c)β-hbcd；(d)γ-hbcd。具体实施方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。本发明提供的水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，包括以下步骤：(1)样品前处理：将单位水产品样品和内标物采用固相分散提取上清液，并将所述上清液采用填料净化，获得待检测样品提取液；步骤(1)所述将单位水产品样品和内标物采用固相分散提取上清液具体为：(1-1)将单位水产品样品粉碎，与内标物一起加入乙腈和饱和氯化钠提取分离，获得萃取液；对于每克水产品样品加入20μl2.5μg/ml13c-tbbpa和d18-hbcd混合内标物；提取分离优选重复萃取2次；每次萃取，对于每克水产品样品加入4ml乙腈和2ml饱和氯化钠。(1-2)将步骤(1-1)中获得的萃取液氮吹浓缩，获得粗提物；对于每克水产品样品氮吹浓缩至1ml；(1-3)将步骤(1-2)中获得的粗提物，采用无水硫酸镁除去水分并c18填料净化，取上清液过滤获得待检测样品提取液。对于每克样品，添加无水硫酸镁50mg以及c18填料50mg至100mg。样品前处理步骤固相分散法提取，相对于ase方法，选用正己烷/二氯甲烷(1:9，v：v)作为提取溶剂，萃取温度为90℃，静态提取时间为4min，循环3次。结果表明，ase方法提取的tbbpa含量略高于固相分散法两次萃取的含量，但并不存在显著的差异(p>0.05)。考虑到萃取条件温和、萃取时间短，本发明采用固相分散法进行提取，更加适合水产品大量、快速检测。净化填料选择，要配合检测对象以及内标物，检测对象即四溴双酚a和六溴环十二烷，内标物采用13c-tbbpa和d18-hbcd混合内标物时，c18填料相对于其他填料及填料组合其回收率显著提高，均达到80％以上，由于c18填料四溴双酚a和六溴环十二烷及特定内标物在回收率方面的良好性能，四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测的敏感性才能得到保证，做到联合检测、准确、可靠。(2)将步骤(1)中获得的待检测样品提取液采用超高效液相色谱-串联质谱法获得所述待测样品的四溴双酚a和六溴环十二烷相关峰的质谱；所述超高效液相色谱条件如下：色谱柱：c18型色谱柱，4.6×100mm，2.7μm。即色谱柱规格：长100mm,内径4.6mm,填料粒径2.7μm流动相：a相：甲醇；b相：超纯水洗脱程序：见下表。流速：0.7ml/min柱温：40℃进样量：10μl0～4.5min,90％a；4.5～5.5min,90～100％a；5.5～6.5min,100％a；6.5～10min,100～90％a，如下表：表液相色谱梯度洗脱程序时间(min)流速(ml/min)甲醇(％)超纯水(％)00.790104.50.790105.50.710006.50.71000100.79010步骤(2)质谱条件如下：电离方式：电喷雾离子源，负离子模式(esi-)；三重四级杆质谱检测；喷雾电压：-4500v；质谱扫描方式：多反应离子监测(mrm)；入口电压：-10v；碰撞室出口电压：-15v(3)根据内标法计算样品中四溴双酚a和六溴环十二烷含量。本发明提供的样品前处理方法，经过机制效应评测，相对于空白水产品表现出弱到中的基质抑制效应。步骤(3)宜采用基质匹配的标准曲线标定四溴双酚a和六溴环十二烷含量。tbbpa和hbcd异构体优化的质谱条件如下：tbbpa和hbcd异构体优化的质谱条件以下为实施例：实施例1一种水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，包括以下步骤：(1)样品前处理：将单位水产品样品和内标物采用固相分散提取上清液，并将所述上清液采用填料净化，获得待检测样品提取液；步骤(1)所述将单位水产品样品和内标物采用固相分散提取上清液具体为：(1-1)准确称取1g鲤鱼样品粉碎至15ml离心管中，加入30ng13c-tbbpa和d18-hbcd混合内标物、加入2ml饱和氯化钠和4ml乙腈，涡旋振荡10min，7500r/min离心5min，转移上清液至15ml离心管中，重复萃取2次，合并上清液。(1-2)将步骤(1-1)中获得的萃取液氮吹浓缩，获得粗提物；对于所述萃取液氮吹浓缩至1ml；(1-3)将步骤(1-2)中获得的粗提物，采用无水硫酸镁除去水分并c18填料净化，取上清液过滤获得待检测样品提取液。具体地，将所述粗提物转移至2ml预先添加有无水硫酸镁50mg以及c18填料50mg。(2)将步骤(1)中获得的待检测样品提取液采用超高效液相色谱-串联质谱法获得所述待测样品的四溴双酚a和六溴环十二烷相关峰的质谱；所述超高效液相色谱条件如下：色谱柱：c18型色谱柱，4.6×100mm，2.7μm。即色谱柱规格：长100mm,内径4.6mm,填料粒径2.7μm流动相：a相：甲醇；b相：超纯水洗脱程序：见下表。流速：0.7ml/min柱温：40℃进样量：10μl0～4.5min,90％a；4.5～5.5min,90～100％a；5.5～6.5min,100％a；6.5～10min,100～90％a，如下表：表液相色谱梯度洗脱程序时间(min)流速(ml/min)甲醇(％)超纯水(％)00.790104.50.790105.50.710006.50.71000100.79010步骤(2)质谱条件如下：电离方式：电喷雾离子源，负离子模式(esi-)；三重四级杆质谱检测；喷雾电压：-4500v；质谱扫描方式：多反应离子监测(mrm)；入口电压：-10v；碰撞室出口电压：-15v(3)根据内标法计算样品中四溴双酚a和六溴环十二烷含量。采用基质匹配的标准曲线标定四溴双酚a和六溴环十二烷含量。tbbpa和hbcd异构体优化的质谱条件如下：tbbpa和hbcd异构体优化的质谱条件实施例2一种水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，包括以下步骤：(1)样品前处理：将单位水产品样品和内标物采用固相分散提取上清液，并将所述上清液采用填料净化，获得待检测样品提取液；步骤(1)所述将单位水产品样品和内标物采用固相分散提取上清液具体为：(1-1)准确称取1g日本沼虾样品粉碎至15ml离心管中，加入20ng13c-tbbpa和d18-hbcd混合内标物、加入1ml饱和氯化钠和4ml乙腈，涡旋振荡10min，7500r/min离心5min，转移上清液至15ml离心管中，重复萃取2次，合并上清液。(1-2)将步骤(1-1)中获得的萃取液氮吹浓缩，获得粗提物；对于所述萃取液氮吹浓缩至0.5ml；(1-3)将步骤(1-2)中获得的粗提物，采用无水硫酸镁除去水分并c18填料净化，取上清液过滤获得待检测样品提取液。具体地，将所述粗提物转移至2ml预先添加有无水硫酸镁75mg以及c18填料75mg。(2)将步骤(1)中获得的待检测样品提取液采用超高效液相色谱-串联质谱法获得所述待测样品的四溴双酚a和六溴环十二烷相关峰的质谱；所述超高效液相色谱条件如下：色谱柱：c18型色谱柱，4.6×100mm，2.7μm。即色谱柱规格：长100mm,内径4.6mm,填料粒径2.7μm流动相：a相：甲醇；b相：超纯水洗脱程序：见下表。流速：0.7ml/min柱温：40℃进样量：10μl0～4.5min,90％a；4.5～5.5min,90～100％a；5.5～6.5min,100％a；6.5～10min,100～90％a，如下表：表液相色谱梯度洗脱程序时间(min)流速(ml/min)甲醇(％)超纯水(％)00.790104.50.790105.50.710006.50.71000100.79010步骤(2)质谱条件如下：电离方式：电喷雾离子源，负离子模式(esi-)；三重四级杆质谱检测；喷雾电压：-4500v；质谱扫描方式：多反应离子监测(mrm)；入口电压：-10v；碰撞室出口电压：-15v(3)根据内标法计算样品中四溴双酚a和六溴环十二烷含量。采用基质匹配的标准曲线标定四溴双酚a和六溴环十二烷含量。tbbpa和hbcd异构体优化的质谱条件如下：tbbpa和hbcd异构体优化的质谱条件实施例3一种水产品四溴双酚a和六溴环十二烷联合检测方法，包括以下步骤：(1)样品前处理：将单位水产品样品和内标物采用固相分散提取上清液，并将所述上清液采用填料净化，获得待检测样品提取液；步骤(1)所述将单位水产品样品和内标物采用固相分散提取上清液具体为：(1-1)准确称取1g田螺样品粉碎至15ml离心管中，加入50ng13c-tbbpa和d18-hbcd混合内标物、加入3ml饱和氯化钠和6ml乙腈，涡旋振荡10min，7500r/min离心5min，转移上清液至15ml离心管中，重复萃取2次，合并上清液。(1-2)将步骤(1-1)中获得的萃取液氮吹浓缩，获得粗提物；对于所述萃取液氮吹浓缩至1ml；(1-3)将步骤(1-2)中获得的粗提物，采用无水硫酸镁除去水分并c18填料净化，取上清液过滤获得待检测样品提取液。具体地，将所述粗提物转移至2ml预先添加有无水硫酸镁150mg以及c18填料100mg。(2)将步骤(1)中获得的待检测样品提取液采用超高效液相色谱-串联质谱法获得所述待测样品的四溴双酚a和六溴环十二烷相关峰的质谱；所述超高效液相色谱条件如下：色谱柱：c18型色谱柱，4.6×100mm，2.7μm。即色谱柱规格：长100mm,内径4.6mm,填料粒径2.7μm流动相：a相：甲醇；b相：超纯水洗脱程序：见下表。流速：0.7ml/min柱温：40℃进样量：10μl0～4.5min,90％a；4.5～5.5min,90～100％a；5.5～6.5min,100％a；6.5～10min,100～90％a，如下表：表液相色谱梯度洗脱程序时间(min)流速(ml/min)甲醇(％)超纯水(％)00.790104.50.790105.50.710006.50.71000100.79010步骤(2)质谱条件如下：电离方式：电喷雾离子源，负离子模式(esi-)；三重四级杆质谱检测；喷雾电压：-4500v；质谱扫描方式：多反应离子监测(mrm)；入口电压：-10v；碰撞室出口电压：-15v(3)根据内标法计算样品中四溴双酚a和六溴环十二烷含量。采用基质匹配的标准曲线标定四溴双酚a和六溴环十二烷含量。tbbpa和hbcd异构体优化的质谱条件如下：tbbpa和hbcd异构体优化的质谱条件实施例1至3的检测结果如下：表1清远3种淡水生物中tbbpa和hbcd分析结果(ng/g干重)结果表明，生物样品中tbbpa的含量范围为26.0～370ng/g(干重，下同)，生物体中α-、β-和γ-hbcd的含量范围分别为8.64～38.3ng/g、2.01～22.9ng/g和14.4～77.4ng/g。实施例4线性范围、检出限、定量下限、回收率及精密度在优化实验条件下，用空白鱼肉样品提取液配成0.5、1、5、25、50、100、200、300和500ug/l系列的基质匹配标准溶液。以目标物的质量浓度(x，μg/l)为横坐标，相应的峰面积与对应内标峰面积的比值(y)为纵坐标绘制基质标准曲线。结果显示，tbbpa和hbcd各单体在0.5～500μg/l范围内线性相关性良好(r＞0.998)。分别以目标物母离子的3倍信噪比(s/n＝3)和10倍信噪比(s/n＝10)确定tbbpa和hbcd各单体的方法检出限(levelofdetection,lod)和定量下限(levelofquantification,loq)。结果显示，tbbpa和α-、β-、γ-hbcd的检出限分别为0.08、0.07、0.04和0.16μg/kg；定量下限分别为0.25、0.25、0.12和0.55μg/kg。本研究选用鱼、虾和贝肉3种空白样品，对tbbpa和hbcd进行加标回收试验，添加水平为5、20和50ug/kg，每个添加水平重复测定6次，内标法定量。结果表明，tbbpa和hbcd的回收率为74.0％～121％，相对标准偏差为0.170％～23.1％(表2)。表2不同加标量回收率及相对标准偏差(n＝6,％)实施例5步骤(1)前处理条件影响萃取次数的影响选用本发明步骤(1-1)的样品提取方法，比较了不同萃取次数对tbbpa和hbcd各单体的提取效果(图1)。萃取所用的生物样品选用1ug/lhbcd和0.5ug/ltbbpa暴露7天后的河蚌组织匀浆样品。结果表明，样品萃取1、2和3次时，tbbpa的含量分别为1984±119、2833±291和3097±259ng/g(干重)，其中萃取2次和3次提取出tbbpa的含量显著高于萃取1次(p<0.05)，而萃取2次和3次提取的含量不存在显著差异(p>0.05)。与tbbpa类似，萃取2次和3次提取出hbcd各单体的含量显著高于萃取1次(p<0.05)，萃取2次和3次提取出的hbcd各单体均不存在显著差异(p>0.05)。因此，本研究quechers方法的萃取次数确定为2次。与加速溶剂萃取方法比较采用本发明步骤(1-1)方法和加速溶剂萃取法(acceleratedsolventextractio,ase)比较了其对生物体中tbbpa和hbcd的提取效率(图2)。ase方法参考harrad等[19]方法参数，选用正己烷/二氯甲烷(1:9，v：v)作为提取溶剂，萃取温度为90℃，静态提取时间为4min，循环3次。结果表明，ase方法(2919±146ng/g)提取的tbbpa含量略高于本发明步骤(1-1)的方法(2833±291ng/g)，但并不存在显著的差异(p>0.05)。对于hbcd各单体来说，ase方法提取的目标物含量略高于本发明步骤(1-1)的方法，也不存在显著的差异(p>0.05)。实施例6净化条件影响步骤(1-3)中净化填料对回收率的影响本实施例比较了单一psa和c18以及psa-c18混合对tbbpa和hbcd净化回收率的影响(图3)。结果表明，单一psa和psa-c18混合均能完全吸附tbbpa，单一c18对tbbpa的回收率为86.6±7.2％。对于hbcd，使用单一psa时，α-hbcd、β-hbcd和γ-hbcd的回收率分别为84.9±2.8％、79.0±2.84％和78.4±0.83％；使用psa-c18组合时，各单体的回收率均略高于单一psa，α-hbcd、β-hbcd和γ-hbcd的回收率分别为88.3±4.9％、79.8±2.6％和84.1±2.8％；使用单一c18时，各hbcd单体的回收率可达到80％～100％。单一c18净化对tbbpa、α-hbcd、γ-hbcd的回收率显著高于psa(p<0.5，图3)。因此，本发明选用c18作为净化剂。c18含量对净化回收率的影响根据提取液中脂肪含量的不同，研究了25mg、50mg和100mgc18的净化效果(图4)。结果显示，25mg、50mg和100mgc18对tbbpa和hbcd各单体净化的回收率可达到81％～116％；其中选用50mg和100mg的c18对β-hbcd净化的回收率显著高于25mg(p<0.05)，而tbbpa、α-hbcd和γ-hbcd对不同c18含量的净化回收率没有显著差异(p>0.05)。进一步增加c18时对净化效果并无明显改善，因此，本发明优选采用50至100mgc18进行净化。本发明步骤(1-3)的净化方法与gpc净化方法比较采用本发明实施例(1-3)的净化方法和凝胶渗透色谱法(gel-permeationchromatography，gpc)，比较了其对生物体中tbbpa和hbcd的净化效果(图5)。gpc净化方法参考peng等和shi等方法并做了优化，先将gpc柱中溶剂放出至填料露出液面，上样后用70ml正己烷/二氯甲烷(1:1，v:v)进行淋洗，最后用50ml正己烷/二氯甲烷(1:1，v:v)进行洗脱。结果表明，采用gpc方法净化对tbbpa的回收率为110±11.2％，quechers方法净化的回收率为118±7.5％，两种方法在回收率上不存在显著的差异(p>0.05)。对于hbcd各单体，本发明步骤(1-3)的方法净化的回收率范围为102±1.6％～120±2.3％，gpc方法净化的回收率为113±10.6％～123±12.5％，两种方法在回收率上也不存在显著差异(p>0.05)。由于gpc净化过程中涉及样品转移、旋蒸浓缩、氮吹浓缩等多个步骤，过程相对繁琐，因此，本发明步骤(1-3)的净化方法能满足样品分析要求。实施例7超高效液相色谱条件影响本发明选用c18型色谱柱(4.6×100mm，2.7μm，美国waters公司)比较了乙腈—水和甲醇—水溶液作为流动相的分离效果。结果表明，乙腈—水和甲醇—水溶液均能达到很好的分离效果，但选用乙腈—水作流动相时目标峰的响应值较甲醇—水要低。因此，本研究选用甲醇—水为流动相。10μg/l加标试样中tbbpa和hbcd各单体的总离子流色谱峰见图6。实施例8串联质谱条件的影响采用针泵进样的方式，将500μg/ltbbpa和hbcd各单标溶液以20μl/min的流速连续注入esi源中，在负离子监测模式下分别进行q1和q3扫描确定母离子和子离子对，然后优化各化合物的去簇电压和碰撞能量等质谱参数(表3)。表3tbbpa和hbcd异构体优化的质谱条件实施例9基质效应评价基质效应(matrixeffect，me)可通过(基质标准溶液所作曲线的斜率/无基质标准溶液所作曲线的斜率－1)×100％进行评价，负值表示基质抑制效应，正值表示基质增强效应，绝对值越大则基质效应越强[17,18,21,25]。通常情况下，当|me|<20％时，为弱基质效应，可忽略；当20％≤|me|≤50％时，为中等程度基质效应；|me|>50％时，为强基质效应，需采取方法补偿基质效应[26]。本研究采用空白鱼肉样品制备的空白萃取液配制基质匹配校准曲线，浓度分别为0.5、1、5、25、50、100、200、300和500ug/l。结果显示，基质抑制效应由强到弱依次为α-hbcd、γ-hbcd、β-hbcd和tbbpa(数值分别为-34.5％、-7.37％、-2.17％、-0.30％)，表现为弱到中等的基质抑制效应(图7)。因此，本发明步骤(3)采用基质匹配的标准曲线，以降低基质效应的影响。本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12