1.一种血浆阿莫西林浓度的hplc-ms/ms检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(a)储备液的制备:
a1:取阿莫西林溶解于(50±5)%乙腈中,制得阿莫西林储备溶液;
a2:取维拉帕米溶解于乙腈中,制得维拉帕米储备溶液;
(b)工作溶液的制备:
b1:用(50±5)%乙腈稀释阿莫西林储备溶液,制得混合标准曲线样本工作溶液和混合质控样本工作溶液;
b2:用(50±5)%乙腈稀释维拉帕米储备溶液,制得混合标准曲线样本工作溶液和混合质控样本工作溶液;
(c)标准曲线样本和质控样本的制备:
向空白血浆中加入混合标准曲线工作溶液混合均匀,制备阿莫西林标准曲线样本和阿莫西林质控样本;
(d)样本前处理:取血浆样本,加入维拉帕米储备溶液,混匀;加入乙腈,混匀;离心,取上清液;加入甲酸水溶液,混匀,得到待测样品溶液;
(e)液相色谱分离:将待测样品溶液进行液相色谱分离;
(f)进行质谱分析:将液相色谱分离后的样品进行质谱检测。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(d)中,所述乙腈与血浆样本的体积比为:4-5:1;所述甲酸水溶液的浓度为(0.1±0.02)%。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(d)中,所述离心的温度为2-8℃;所述离心的转速为2500-3500rpm;所述离心的时间为5min-15min。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(e)中,所述液相色谱分离条件为:
流动相:流动相a为(0.1±0.02)%甲酸水溶液;流动相b为乙腈;采用梯度洗脱;
所述梯度洗脱过程为:0~1.3分钟,(50±5)%流动相a-流动相b;1.3~1.5分钟,(50±5)%流动相a-流动相b;1.5~2.3分钟,(5±2)%流动相a-流动相b;2.3~2.4分钟,(5±2)%流动相a-%流动相b;2.4~3分钟,(50±5)%流动相a-流动相b;
流速为0.4ml/min-0.8ml/min;进样体积为2μl.00-4.00μl;柱温设置为25-35℃;自动进样器温度为2-6℃;洗针液:(50±5)%乙腈片;洗冲速度:30-40μl/sec;洗针液体积:400-600μl。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤(e)中,所述流动相a为0.1%甲酸水溶液;所述梯度洗脱过程为:0~1.3分钟,50%流动相a-流动相b;1.3~1.5分钟,50%流动相a-流动相b;1.5~2.3分钟,5%流动相a-流动相b;2.3~2.4分钟,5%流动相a-%流动相b;2.4~3分钟,50%流动相a-流动相b;
流速0.6ml/min;进样体积为3.00μl;柱温设置为30℃;自动进样器温度为4℃;洗针液:50%乙腈;洗冲速度:35μl/sec;洗针液体积:500μl。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(f)中,所述质谱分析条件为:
质谱检测条件:离子化模式:电喷雾离子源;正离子模式;多反应监测;
离子源参数:气帘气:25psi;离子源气体1:50psi;离子源气体2:50psi;离子源喷雾电压:5500v;离子源温度:550℃;分辨率q1/q3:unit/unit;碰撞气:medium;暂停时间:20msec;质谱采集时间为3.00min;
监测离子对四极杆参数:阿莫西林:离子对:366.2→208.1;去簇电压:30.0v;入口电压:10.00v;出口电压:25.00v;碰撞能量:14.00ev;停留时间:200.0msec;维拉帕米:离子对:455.2→165.1;去簇电压:30.0v;入口电压:10.00v;出口电压:25.00v;碰撞能量:36.00ev;停留时间:200.0msec。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤b1中,所述混合标准曲线样本工作溶液中,阿莫西林的浓度分别为:300ng/ml、600ng/ml、2000ng/ml、10000ng/ml、50000ng/ml、100000ng/ml、250000ng/ml和300000ng/ml;和/或
步骤b2中,所述混合质控样本工作溶液中,阿莫西林的浓度分别为:定量下限质控300ng/ml、低浓度质控800ng/ml、几何平均值中浓度质控15000ng/ml、算术平均值中浓度质控150000ng/ml、高浓度质控225000ng/ml。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,步骤(c)中,所述标准曲线样本中,阿莫西林的浓度分别为:15.0ng/ml、30.0ng/ml、100ng/ml、500ng/ml、2500ng/ml、5000ng/ml、12500ng/ml和15000ng/ml;和/或
所述质控样本中,阿莫西林的浓度分别为:定量下限质控15ng/ml、低浓度质控40.0ng/ml、几何平均值中浓度质控750ng/ml、算术平均值中浓度质控7500ng/ml、高浓度质控11250ng/ml。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法,其特征在于,步骤(e)中,所采用的液相色谱质谱联用仪的型号为shimadzulc30ad液相色谱仪联合sciexqtrap5500质谱仪,所采用的操作系统为analyst1.6.3;所采用的色谱柱为:nacalai的cosmosil5c18-paq。
10.根据权利要求1-8任一项所述的方法,其特征在于,所述血浆来自于人或动物。