一种卡巴他赛有关物质的检测方法与流程

本发明属于药物分析
技术领域：
，具体涉及一种卡巴他赛有关物质的测定方法。
背景技术：
：卡巴他赛(二甲氧基多西紫杉醇)是一种化学半合成紫杉烷类小分子化合物，其关键原料主要是从红豆杉针叶中提取的10-dab。专利us005847170a中描述采用分步保护7位和13位羟基后，经过6步反应制备二甲氧基多西紫杉醇(。专利201110162562.2、201110293499.6、201110298014.2等公开了几种二甲氧基多西紫杉醇的制备方法，具体合成路线如下：1)合成路线一(us005847170a)2)合成路线二(201110339593.0)3)合成路线三(201110318046.4)4)合成路线四(201110298014.2、201210587487.9)通过对上述合成路线的分析结合对合成路线的重复及制剂工艺的研究，卡巴他赛原料药及其制剂中可能含有的(合成路线不同，产生的杂质也可能不同)杂质(有关物质)如下：在药物的制备和贮存过程中，对合成方法可能产生的杂质进行监测，对于原料药及其制剂的质量控制非常重要。本发明公开了一种卡巴他赛有关物质的测定方法，从而快速准确地测定卡巴他赛及其中间体杂质和起始原料，从而实现了卡巴他赛中间体杂质的控制，保证了卡巴他赛及其制剂的质量可控。技术实现要素：本发明的目的是提供一种卡巴他赛及其有关物质的检测方法，可用于卡巴他赛的合成过程、终产品及制剂的质量控制。本发明的卡巴他赛及其有关物质的检测方法，是采用高效液相色谱法实现，选用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；以水相和有机相混合物为流动相a，水相和有机相混合物为流动相b；检测波长为220nm～240nm，按照下述梯度洗脱程序操作，时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)07525157525302575502575517525607525在本发明的一些实施方案中，所述流动相a为水相:有机相＝65:35，所述流动相b为水相:有机相＝25:75。在本发明的一些实施方案中，所述水相选自水、磷酸水溶液(取1％(v/v)的磷酸溶液0.9ml混匀于1000ml水中)、ph4.0的醋酸水溶液、ph4.0的甲酸水溶液的任意一种，所述有机相选自乙腈。在本发明的一些实施方案中，所述检测波长为230nm。在本发明的一些实施方案中，所述检测方法的流速为0.9～1.1ml/min，优选1.0ml/min。在本发明的一些实施方案中，所述十八烷基键合硅胶色谱柱填料粒径为3-5μm，优选5μm。在本发明的一些实施方案中，所述柱温为30℃～45℃，优选35℃。在本发明中，所“流速”±0.1ml/min、柱温±5℃、“流动相比例”±2％、“检测波长”±2nm对本发明的实施无影响，且均落入本发明的保护范围内。本发明中，术语“卡巴他赛”在没有明确区分的情况下，可以是卡巴他赛的纯品、原料药、合成品、制剂等以卡巴他赛作为主成分的产品。本发明的测定方法均适用于上述产品的质量控制，并且这些产品的有关物质的测定方法也保护在本发明的保护范围内。本发明中，术语“有关物质”是指在药物制备和贮存过程中，对合成方法可能产生的杂质(包括中间体、副产物等有机杂质)。本发明的方法具有空白基线平稳、专属性强、分离度好、灵敏度高(lod数量级为0.01ng、loq数量级为0.1ng)、准确度高(回收率在98％～100％)、精密度良好、线性范围宽(0.040～1990.573μg/ml)等特点，其适用于卡巴他赛及其中间体杂质的检测，亦可用于卡巴他赛及其中间体的定性和定量分析，或进一步用于监测卡巴他赛合成反应工艺、终产品或原料药及制剂的质量。附图说明图1为实施例的空白溶液的色谱图；图2为实施例的卡巴他赛混合对照品的色谱图；图3为实施例的卡巴他赛样品的色谱图；图4为对比例的卡巴他赛样品的色谱图。具体实施方案下面用具体实施例来进一步解释和说明本发明，但并不以任何方式限制本发明的范围。本发明所使用的试剂均可以从市场上购得。实施例1(1)检测条件仪器：thermou3000高效液相色谱仪，waters2695高效液相色谱仪，检测器：紫外检测器，检测波长：230nm；色谱柱：菲罗门geminic18柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：酸性水(取1％(v/v)的磷酸溶液0.9ml混匀于1000ml水中):乙腈＝(65:35)为流动相a；以酸性水:乙腈＝(25:75)为流动相b；柱温：35℃；流速：1ml/min；进样量：10μl。按下表的条件进行线性梯度洗脱程序：(2)检测方法定性对照溶液的配制：杂质a定位溶液：取杂质a对照品约5mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇，超声溶解，并用甲醇稀释至刻度，即得；杂质b定位溶液：取杂质b对照品约5mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇，超声溶解，并用甲醇稀释至刻度，即得；杂质c定位溶液：取杂质c对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加乙腈，超声溶解，并加乙腈稀释至刻度，即得；杂质d定位溶液：取杂质d对照品约20mg，精密称定，置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得；杂质e定位溶液：取杂质e对照品约10mg，精密称定，置20ml量瓶中，加乙腈：甲醇(1:2)，超声溶解，并用甲醇稀释至刻度，即得；杂质f定位溶液：取杂质f对照品约20mg，精密称定，置20ml量瓶中，加乙腈超声溶解，并用甲醇稀释至刻度，即得；杂质g定位溶液：取杂质g对照品约20mg，精密称定，置20ml量瓶中，加甲醇超声溶解，并用甲醇稀释至刻度，即得。混合对照品溶液的配制：取卡巴他赛对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，再分别精密量取各杂质定位溶液0.5ml于同一量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合溶液。供试品溶液的配制：取卡巴他赛原料约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。空白溶液：乙腈。分别取空白溶液、混合对照品溶液和供试品溶液，按照上述条件进行hplc分析并记录色谱图，见图1、图2和图3。结果表明，该方法可实现卡巴他赛及其杂质的完全分离，且空白基线平稳，灵敏度高。实施例2采用与实施例1类似的检测条件和检测方法进行试验，其中流动相替代为以水:乙腈＝(65:35)为流动相a；以水:乙腈＝(25:75)为流动相b，进行梯度洗脱。hplc色谱图见图4。结果表明，该方法可实现卡巴他赛及其杂质的完全分离，且基线平稳，灵敏度高。实施例3采用与实施例1类似的检测条件和检测方法进行试验，其中流动相替代为以ph4.0醋酸水溶液:乙腈＝(65:35)为流动相a；以ph4.0醋酸水溶液:乙腈＝(25:75)为流动相b，进行梯度洗脱。结果表明，该方法可实现卡巴他赛及其杂质的完全分离，且基线平稳，灵敏度高。实施例4采用与实施例1类似的检测条件和检测方法进行试验，其中流动相替代为以ph4.0甲酸水溶液:乙腈＝(65:35)为流动相a；以ph4.0甲酸水溶液:乙腈＝(25:75)为流动相b，进行梯度洗脱。结果表明，该方法可实现卡巴他赛及其杂质的完全分离，且基线平稳，灵敏度高。实施例5采用与实施例1相同的检测条件和检测方法进行试验。其中在进样后2h、4h、6h、8h、10h、12h时分别进样，记录各杂质以及主峰的峰面积变化情况。测定结果见下表：(注：uk代表未知杂质)结果表明，卡巴他赛样品溶液在4℃下，12h内，各杂质及主峰没有明显变化。实施例6采用与实施例1相同的检测条件和检测方法进行试验。不同试验人员在不同液相系统上各测定一次。测定结果见下表：结果表明，在两台仪器上测定同一样品，所得的杂质含量结果较平行，说明本方法精密度良好。实施例7采用与实施例1相同的检测条件和检测方法进行试验。检测3批卡巴他赛原料(批号20140307、20140318、20140329)和3批卡巴他赛制剂(批号20140509-1、20140509-2、20140510)。结果表明，卡巴他赛原料和制剂有关物质符合质量标准要求，可用于卡巴他赛原料及制剂的有关物质检测。当前第1页12