一种抗肾小球基底膜抗体的测试装置及其制备方法与流程

本发明涉及一种抗体检测装置，尤其涉及一种抗肾小球基底膜抗体的测试装置及其制备方法。
背景技术：
：抗肾小球基底膜(gbm)抗体相关疾病是一组自身免疫性疾病，该病的致病因素为血浆存在抗gbm抗体。由于肺和肾小球的基底膜具有共同的抗原，因此主要的受累脏器是肺和肾脏。肾脏受累多为新月体性肾炎，肾功能损害进展迅速；少数为轻度系膜增生性肾炎，可保持肾功能正常。肺受累表现为肺出血，大咯血可引起窒息而危及生命。提供一种方便有效的检测手段是现有技术中急需解决的技术问题。同时现有技术中的检测方法过于繁琐，往往需要专业人员操作；由于现有技术中的检测装置长期放置可能存在检测效果降低的问题。技术实现要素：针对上述问题，本发明提供一种抗肾小球基底膜抗体的测试装置及其制备方法，以解决现有技术中存在的技术问题。为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：一种抗肾小球基底膜抗体的测试装置，包括支撑层，所述支撑层中部铺设有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上分别设置有检测线和质控线，所述硝酸纤维素膜上靠近检测线一端处贴合有结合垫，所述结合垫上远离所述检测线端贴合有样品垫，所述硝酸纤维素膜上靠近控制线一端处贴合有吸水垫；所述结合垫上包被有金标抗体，所述硝酸纤维素膜上的检测线上包被有与抗肾小球基底膜抗体特异性结合的检测抗原，所述控制线上包被有控制抗原。优选的，包被用的包被液中加入辅助剂。优选的，所述辅助溶剂由以下按重量份数配比组成：氯化钠0.1-0.3份、庆大霉素0.05-0.07份、叠氮钠0.01-0.03份、甘油2-6份、tween200.02-0.05份、牛血清白蛋白3-8份、氨基苯磺酰胺6-15份、胱氨酸2-8份。优选的，所述金标抗体中的抗体选自羊抗人igg、葡萄球菌a蛋白和鼠抗人igg。优选的，所述抗原可以是纯化的天然抗原、重组抗原或人工合成多肽。本发明还提供一种制备抗肾小球基底膜抗体的测试装置的方法，所述方法包括以下步骤：a)制备辅助溶质：将制备好的辅助溶剂和包被液按1：5-15的比例混合均匀后放置在适宜温度下放置过夜；b)处理结合垫：将制备好的金标抗体用步骤a中制得的包被液包被到结合垫上；c)处理硝酸纤维素膜：将与抗肾小球基底膜抗体特异性结合的检测抗原和控制线上上的控制抗原分别用步骤a中制得的包被液包被到检测线和控制线上；d)装置的组装。本发明的有益效果是：本发明提供的检测装置能大大缩短检测的时间，不需要对检测人员进行专门的培训。由于包被液中加入了辅助溶剂能进一步提升装置的稳定性，同时能有效避免因冷藏后暴露在空气中致使检测准确度降低的问题。附图说明图1是本发明的结构示意图；附图的标记含义如下：1：支撑板；2：硝酸纤维素膜；3：检测线；4：质控线；5：结合垫；6：样品垫；7：吸水垫。具体实施方式下面结合附图和具体的实施例对本发明技术方案作进一步的详细描述，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。实施例1本发明提供的一种抗肾小球基底膜抗体的测试装置，包括支撑层，所述支撑层中部铺设有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上分别设置有检测线和质控线，所述硝酸纤维素膜上靠近检测线一端处贴合有结合垫，所述结合垫上远离所述检测线端贴合有样品垫，所述硝酸纤维素膜上靠近控制线一端处贴合有吸水垫；所述结合垫上包被有金标羊抗人igg，所述硝酸纤维素膜上的检测线上包被有抗肾小球基底膜抗原，所述控制线上包被有羊抗兔igg。包被缓冲液的配置：用na2co31.59g、nahco32.63g、10g蔗糖、0.5gedta加蒸馏水至1l，配置成包被液备用。作为改进本发明在在制备包被液时在包被用的包被液中加入辅助剂。所述辅助溶剂由以下按重量份数配比组成：氯化钠0.3份、庆大霉素0.06份、叠氮钠0.01份、甘油4份、tween200.03份、牛血清白蛋白5份、氨基苯磺酰胺8份、胱氨酸6份。辅助溶剂的配置方法如下：1)将氯化钠加入在37度下以180rpm的搅拌速度搅拌的去离子水中，然后一次加入庆大霉素和叠氮钠，以120rpm的搅拌速度搅拌2小时；2)向步骤1制得的溶液加入牛血清白蛋白，搅拌至溶解后，用tris-hcl缓冲液调节ph＝6.3，调节搅拌速度为130rpm，然后在37度下搅拌1小时；3)向步骤2中制得的溶液中依次加入甘油、tween20、氨基苯磺酰胺、胱氨酸至完全溶解，再以60rpm的搅拌速度搅拌2小时；4)然后将步骤3中制得的溶液以0.45μm滤膜过滤，得到辅助溶剂。胶体金溶液的制备：将0.01-0,。05％的haucl4溶液加热至沸腾后，每100mlhaucl4溶液加入1ml-2ml1-3％柠檬酸三钠溶液，待出现红色后，煮沸7-分钟出现透明的橙红色。再用0.45μm的超滤膜过滤金标羊抗人igg制备：用0.1m碳酸钠调节胶体金ph＝7.1-7.5，按每毫升胶体金溶液缓慢加入8-20μg羊抗人igg后混合均匀，静置10分钟后，然后加入bsa至终浓度1％，混合均匀后静置10分钟，然后在5000rpm离心6分钟，去除沉淀物质，将上层溶液溶液转移至新的离心管中，在10000rpm离心30分钟，取上清液后加入重悬液至原量；将溶液放入新管中，再在10000rpm离心30分钟，然后加入用十分之一初始体积的保存液将沉淀重悬，放置在4摄氏度的环境中备用。检测线的制备：将纯化的抗肾小球基底膜抗体与ph＝7-8的10mmpb缓冲溶液混合配置成为浓度为0.5mg/ml的混合溶液，喷在硝酸纤维膜上，涂布量为1.2ul/cm。质控线的制备：将羊抗兔igg与ph＝7-8的10mmpb缓冲溶液混合配置成为浓度为0.5mg/ml的混合溶液，喷在硝酸纤维膜上，涂布量为1.2ul/cm。实施例2制备抗肾小球基底膜抗体的测试装置的方法，所述方法包括以下步骤：制备辅助溶质：将实施例1中制备好的辅助溶剂和包被液按1：6的比例混合均匀后放置在适宜温度下放置过夜；材料准备：将支撑板、纤维素硝酸膜、结合垫、样品垫和吸水纸裁剪成合适的尺寸备用；处理结合垫：将制备好的金标抗体用制得的包被液包被到结合垫上；处理硝酸纤维素膜：将与抗肾小球基底膜抗体特异性结合的检测抗原和控制线上的控制抗原分别用制得的包被液包被到检测线和控制线上；装置的组装。实施例3稳定性实验：将装置至于4摄氏度的环境中，分别用在15天、1个月、3个月、5个月、7个月、9个月、12个月、16个月的保存装置对临床确证的病人进行检测。检测结果如下：时间/月样本数阴性阳性检测灵敏度0.52606219876％12606519575％32606519575％52606719374％72606419675％92606719374％122606419675％162607418672％以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或者等效流程变换，或者直接或间接运用在其他相关的
技术领域：
，均同理包括在本发明的专利保护范围内。当前第1页12