一种色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒的制作方法

本实用新型属于分析化学领域，更具体地，涉及一种色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒。

背景技术：

色谱质谱被广泛用于生物样本的靶向精准定量检测，而胆汁酸(或胆酸盐)是肝脏中胆固醇从头合成的代谢产物，然后分泌进入胆汁。它们的主要功能是促进食物中脂肪的代谢和脂溶性维生素和胆固醇的吸收。定量精准检测生物样本中的胆汁酸具有非常重要的意义，科研院所对该项检测的需求也非常迫切。原始的生物样本不能直接进行色谱质谱定量检测胆汁酸，需要加入混合内标甲醇溶液并进行提取，混合内标甲醇溶液一般由实验人员提前使用多个化学试剂共同制备，再逐一加到单个试剂管中，然后再从试剂瓶中取出化学试剂加入到试剂管中，并进行离心分离等一系列操作，最后放入仪器进行色谱质谱检测，得到相关结果。由于色谱质谱灵敏度非常高，在操作过程中化学试剂保存不当、不精准移取，以及化学试剂在移取过程中的挥发和污染，都会很大程度影响检测结果的准确性。而市面上无该细分领域的商用试剂盒，极大地限制了生物样本的高通量、高准确性定量检测胆汁酸。

技术实现要素：

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本实用新型提供了一种色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，其目的在于快速准确的实现所述定量加样方法，由此解决现有技术依赖操作人员经验、所涉及化学试剂较多、需要移取步骤较多、易导致检测结果不准确的技术问题。

为实现上述目的，按照本实用新型的一个方面，提供了一种色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，其特征在于，包括试剂管1和试剂瓶2；所述试剂管1内装有氘代胆酸、氘代石胆酸、氘代脱氧胆酸、氘代鹅脱氧胆酸的混合甲醇溶液，所述试剂瓶2内装有甲醇溶液；其中：所述试剂瓶2包括瓶体21、瓶盖22、和设置于所述瓶体21瓶口处的韧性密封膜23；所述密封膜23与所述瓶口经固定点26固定连接，并与所述瓶口具有相亲和的凝胶圈24，所述密封膜23沿所述瓶口外沿还具有用于启封的凸起25。

优选地，所述的色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，其试剂盒包括20支试剂管1和1支试剂瓶2。

优选地，所述的色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，其试剂管1为1.5mL或2mL的离心管。

优选地，所述的色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，其试剂管1为锥型离心管。

优选地，所述的色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，其试剂瓶2为5mL的样品瓶。

优选地，所述的色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，其凸起25为舌型或者环形。

优选地，所述的色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，其密封膜23材质为塑料。

优选地，所述的色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，其还包括衬垫3，所述衬垫3设有小孔，所述试剂管1和试剂瓶2嵌插在所述衬垫3的小孔内。

总体而言，通过本实用新型所构思的以上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有益效果：

(1)本实用新型的试剂盒按照批量加样的方法设计，通过在所述试剂瓶瓶口处增加韧性密封膜，且所述密封膜与所述瓶口经固定点固定连接，并与所述瓶口具有相亲和的凝胶圈，以密封保存所述试剂瓶中的化学试剂；所述密封膜沿所述瓶口外沿还具有用于启封的凸起，用于开启所述密封膜以取用所述试剂瓶中化学试剂，其合理独立密封试剂，使其方便携带、保存及运输，不易受污染；

(2)试剂管和试剂瓶内所有试剂均可直接使用，无需稀释或调节pH值，有效节约使用人员的时间，提高样品配置效率和均一性；

(3)混合内标甲醇溶液在统一制备后，直接提前批量加入到单个试剂管中，不需要操作人员再额外制备，避免涉及化学试剂较多导致的误操作，也避免了多次移取混合内标甲醇溶液导致的人工误差。

附图说明

图1是本实用新型的试剂盒结构示意图；

图2是本实用新型的试剂瓶密封膜的俯视图；

图3是本实用新型实施例1提供的用于色谱质谱胆汁酸检测的血液样本配制的流程图；

图4是使用本实用新型的试剂盒定量检测某血样各种胆汁酸的试验结果；

在所有附图中，相同的附图标记用来表示相同的元件或结构，其中：1-试剂管，2-试剂瓶，21-瓶体，22-瓶盖，23-密封膜，24-凝胶圈，25-凸起，26-固定点，3-衬垫。

具体实施方式

为了使本实用新型的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本实用新型进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。此外，下面所描述的本实用新型各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

本实用新型提供了一种色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，如图1所示：包括试剂管1和试剂瓶2；所述试剂管1内装有氘代胆酸、氘代石胆酸、氘代脱氧胆酸、氘代鹅脱氧胆酸的混合甲醇溶液，所述试剂瓶2内装有甲醇溶液，其中：

所述试剂瓶2包括瓶体21、瓶盖22、和设置于所述瓶体21瓶口处的韧性密封膜23，如图2所示：所述密封膜23与所述瓶口经固定点26固定连接，并与所述瓶口具有相亲和的凝胶圈24，以密封保存所述试剂瓶2中的化学试剂；所述密封膜23沿所述瓶口外沿还具有用于启封的凸起25，用于开启所述密封膜23以取用所述试剂瓶2中化学试剂。

由于目前常用的试剂瓶主要有两种：一类是利用手指上推或下盖来进行开启或关闭试剂瓶；另一类是利用手指顺或逆时针进行螺旋拧紧或拧开试剂瓶；然后这两种试剂瓶的设计，在色谱质谱检测胆汁酸样本过程，都存在同样的问题——在移取化学试剂时，每次都需要手动打开盖子，才能取用化学试剂，取用完成后，也需要手动的盖上盖子，避免化学试剂的挥发和污染，而色谱质谱检测胆汁酸样本，需要移取步骤较多，现有技术试剂瓶的设计一方面增加了操作步骤，降低了试验效率，极大地限制了生物样本的高通量、高准确性定量检测胆汁酸；另一方面在化学试剂移取过程中，需要每次移取都开合盖子，极易造成化学试剂的挥发和污染，从而影响实验结果。

而本实用新型通过对现有试剂瓶结构进行改进，在试剂瓶口增加了韧性密封膜23，所述密封膜23与所述瓶口经固定点26固定连接，并与所述瓶口具有相亲和的凝胶圈24，所述密封膜23沿所述瓶口外沿还具有用于启封的凸起25：因此，当试验人员在试验过程中需要多次移取所述试剂瓶中的化学试剂时，只需要打开一次瓶盖，然后通过所述凸起25开启所述密封膜23，即可移取其中试剂，由于所述密封膜23与所述瓶口经固定点26固定连接，所以在移取过程中，所述密封膜23并不会与所述试剂瓶2的瓶口完全分离，从而引起错位变形等问题；而移取完毕后，当移液枪离开所述试剂瓶时，所述密封膜23与所述瓶口经固定点26固定连接的位置不变，且所述密封膜23和所述瓶口其他对应位置通过所述凝胶圈24的亲和性，自动亲和封闭以形成密封环境，从而保护所述试剂瓶2中的化学试剂，使其不易挥发和污染，以保证下次取用时试剂的稳定性，进而保证试验结果的准确性，后续移取过程中，均只需要打开所述密封膜23即可，并且不需要手动盖合，从而减少操作步骤，提高效率，同时，利用所述凝胶圈24的自动亲和性进行封闭，也避免了化学试剂的挥发和污染，保证下次取用时试剂的稳定性，进而保证试验结果的准确性。

所述试剂盒包括20支试剂管1和1支试剂瓶2，使其能在满足样品配置的前提下，包装运输成本较低。

所述试剂管1为1.5mL或2mL的离心管，可直接离心操作，更加方便样品配置流程；优选地，所述试剂管1为锥型离心管，更易于附着沉淀物。

所述试剂瓶2，装有甲醇溶液，所述甲醇溶液为本领域常规的色谱纯甲醇，优选地，甲醇溶液为3mL，所述试剂瓶2为5mL样品瓶。

所述凸起25为舌型或者环形：进一步地，当所述凸起25为舌型时，优选其位置与所述固定点位置相对；当所述凸起25为环形时，优选其位置与所述瓶口外沿相对应并凸出所述瓶口外沿，以便于开启所述密封膜23以取用所述试剂瓶2中化学试剂。

所述固定点26设置在所述试剂瓶2的瓶口位置，用于固定连接所述密封膜23与所述试剂瓶2的瓶口：进一步地，当所述试剂瓶2为压盖式试剂瓶时，所述固定点26优选为与所述瓶盖22和所述瓶体21固定连接位置相同，以方便操作；当所述试剂瓶2为螺旋盖试剂瓶时，所述固定点26为所述试剂瓶2的瓶口任意位置。

所述密封膜23材质为塑料，其材料具有韧性且密封性好，以保证在多次开合过程中，保持形状，进而保证密封效果。

所述的色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，还包括衬垫3，所述衬垫3设置在试剂盒外盒底部，所述衬垫3设有小孔，所述试剂管1和试剂瓶2嵌插在所述衬垫3的小孔内，从而固定，使其方便携带、保存及运输，不易损坏。

本实用新型提供的色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，按照如下方法使用：

(1)将血液样本加入试剂管1中；

(2)从试剂瓶2中取出甲醇溶液加入试剂管1振荡混匀，沉淀蛋白；

(3)离心取上清液加入干净试剂管后挥干。

试剂配比按照Elizabeth J.Want等，Analytical Chemistry,2010,82(12),5282-5289文中所述方法进行配置。

以下结合具体实施例做进一步说明：

以下为实施例：

实施例1

一种色谱质谱检测胆汁酸样本配置试剂盒，如图1所示，包括试剂盒外盒、试剂管1和试剂瓶2和具有小孔的衬垫3；所述试剂管1和试剂瓶2嵌插在衬垫3小孔上，从而固定，所述衬垫3设置在试剂盒外盒底部；其中：

所述试剂管1，装有氘代胆酸、氘代石胆酸、氘代脱氧胆酸、氘代鹅脱氧胆酸的混合甲醇溶液，氘代胆酸的浓度为9327nmol/L，氘代石胆酸的浓度为10112nmol/L，氘代脱氧胆酸的浓度为9606nmol/L，氘代鹅脱氧胆酸的浓度为8485nmol/L，混合甲醇溶液的体积为10μL；所述试剂管1为1.5ml的锥型离心管。

所述试剂瓶2为螺旋盖试剂瓶，其规格为5mL样品瓶，其中装有色谱纯甲醇3mL。

所述试剂瓶2包括瓶体21、瓶盖22、和设置于所述瓶体21瓶口处的韧性密封膜23，如图2所示：优选地，所述密封膜23材质为塑料，以保证在多次开合过程中，保持形状，进而保证密封效果；所述密封膜23与所述瓶口经固定点26固定连接，并与所述瓶口具有相亲和的凝胶圈24，以自动亲和封闭形成密封环境，从而保护所述试剂瓶2中的化学试剂；优选地，所述固定点26设置在所述试剂瓶2瓶口的任意位置，用于固定连接所述密封膜23与所述试剂瓶2的瓶口；所述密封膜23沿所述瓶口外沿还具有用于启封的凸起25，优选地，所述凸起25为舌型，其位置与所述固定点位置相对，以便于开启所述密封膜23以取用所述试剂瓶2中化学试剂。

所述试剂管1和试剂瓶2数量比值为20：1，优选包含20支试剂管1和1支试剂瓶2，使其能在满足样品配置的前提下，包装运输成本较低。

应用本实施例提供的试剂盒，配置人类血液样本方法如图3所示：

(1)取50μL血样加入试剂管1中；

(2)从试剂瓶2中取出预冷的甲醇溶液150μL加入试剂管1振荡混匀30秒，-20度静置20分钟沉淀蛋白；

(3)离心(4℃，16089g，10分钟)取上清液加入干净试剂管后挥干，重新溶解于210μL甲醇水(甲醇:水＝2:1含0.005％甲酸)中，用0.22μm滤膜过滤后收集在色谱样品瓶中使用色谱质谱检测。

色谱质谱检测过程如下：使用前检查仪器状态是否正常，将色谱样品瓶放置于仪器自动进样口，设置柱温为45℃，流动相A为含0.005％甲酸的超纯水，流动相B为含0.005％甲酸的色谱纯乙腈溶液。洗脱梯度(B％)：0-2min：23％-33％，2-6min：33％-34％，6-11min：34％-70％，11-11.01min：70％-95％，11.01-15min：95％。进样量为1μL。色谱柱优选采用Core-Shell C18column(100×2.1mm,2.6μm,Phenomenex,USA)。

ESI-QqQ-MS采用负离子模式的多反应监测方法，离子源条件：干燥气流量10L/min，干燥气温度350℃，雾化器压力20psi,鞘气温度350℃，鞘气流量10L/min，喷嘴电压500V，毛细管电压3500V。

结果判读依据：可一次性精准定量检出血样中的28种不同胆汁酸，如图4所示，使用本实用新型实施例的试剂盒配置的血样样本检测重复性好，结果更可靠。

本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。