一种非妇科液基标本的制片方法与流程

本发明涉及细胞学检测
技术领域：
，具体涉及一种非妇科液基标本的制片方法。
背景技术：
：非妇科标本(胸腹水、痰液等)可出现于许多良恶性疾病，如肺炎、肝硬化、腺癌等，可作为肿瘤的首发症状，明确诊断常需要做大量的辅助检查，耗时不经济，不利于患者治疗。正常人一般在胸膜腔内不存在大量积液，只有在病理情况下才会有胸腹腔积液发生。渗出液由于含有纤维蛋白原和组织，细胞破坏放出的凝血活酶，易凝结，可加少量抗凝剂静置后及时送检。痰标本是有效发现肿瘤细胞的常规方法，但长期以来敏感度不理想。传统涂片根据细胞形态、排列方式、背景等，比较容易诊断典型细胞，但存在制片质量差，容易丢失有效诊断细胞，涂片厚薄不一，易漏诊等问题。液基细胞学技术，对脱落细胞学制片最有效，在宫颈癌早期筛查中应用较广，而在基层医院用于非妇科标本的制备，尚在摸索起步阶段，在非妇科的应用其效果褒贬不一。与传统涂片相比，其优点为：(1)大大减少了传统涂片中的黏液、血液，背景较干净，涂片厚薄均匀，细胞平铺，易于观察；(2)液基为湿固定因而细胞保存完好，结构清晰，细胞退变较少；(3)易于重复制片，同时保存了细胞的抗原性，易于进行免疫组化的检测。其缺点主要表现为：(1)价格相对于传统涂片较昂贵；(2)有时会出现细胞量过少，宜造成阳性细胞丢失，细胞发生变小、溶解、皱缩等现象；(3)成团的癌细胞分散，失去了原有的排列方式，癌性背景消失，给诊断造成一定的困难。技术实现要素：针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种非妇科液基标本的制片方法。本发明的制片方法可以简化非妇科液基标本的制片流程，制片后的细胞涂层比较薄且集中，便于医生进行诊断。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种非妇科液基标本的制片方法，包括以下步骤：(1)将非妇科液基标本加入到细胞保存处理液中，充分震荡后，静置；(2)收集静置后出现的细胞沉淀层，加入清洗液，然后采用离心制片机进行制片；(3)将制片后的玻片进行固定、染色、封片。优选的，步骤(1)中，所述细胞保存处理液由如下重量份的原料组成：乙醇30-40份、柠檬酸钠2-4份、氯化钠4-6份、n-乙酰半胱氨酸6-8份、二硫代苏糖醇4-8份、脯氨酸2-4份。更优选的，所述细胞保存处理液由如下重量份的原料组成：乙醇35份、柠檬酸钠3份、氯化钠5份、n-乙酰半胱氨酸7份、二硫代苏糖醇6份、脯氨酸3份。本发明的细胞保存处理液能够清除非妇科液基标本中的红细胞，及时固定具有诊断价值的细胞的原始形态；对黏液和表皮组织进行软化和降解，使有效细胞从黏液中分离出来；细胞在本发明的细胞保存处理液中自然沉降，容易形成单层平铺细胞，利用本发明的细胞保存处理液制备的镜检片具有清晰的镜检视野和良好的细胞染色对比度。本发明的细胞保存处理液中，通过对上述各个组分和组分含量的合理选择及配比，使得本发明的细胞保存处理液具有保存细胞稳定性高、细胞固定良好和保留细胞形态更完整等优点；而且本发明的细胞保存处理液中的各个组分价格便宜，方便易得，无毒无害环保，具有良好的应用前景和经济效益。优选的，步骤(1)中，非妇科液基标本与细胞保存处理液加入的体积比为1：(2-4)。优选的，步骤(1)中，静置时间为2-4h。优选的，步骤(2)中，所述清洗液为体积分数60-80％的乙醇水溶液。采用体积分数为60-80％的乙醇水溶液作为清洗液，其不含对细胞的毒害成分，使用安全。通过加入清洗液，可以将分离细胞沉淀层时不可避免带入的杂质溶解。优选的，步骤(2)中，细胞沉淀层与清洗液加入的体积比为1：(1-2)。细胞沉淀层与清洗液加入量的比会影响制片后涂层的含水量。若含水量过少，涂层中的细胞容易发生皱缩；若含水量过多，在利用95％酒精固定时会造成细胞漂散甚至相互污染。经多次试验发现，细胞沉淀层与清洗液加入的体积比为1：(1-2)时，其涂片固定效果最优。优选的，步骤(2)中，采用离心制片机进行制片时，离心速度为800r/min，离心时间为6min。在上述离心条件下，可以均匀集中的收集非妇科液基标本中的有效成分，将细胞沉降在玻片上，便于固定。优选的，步骤(3)中，将制片后的玻片利用体积浓度为95％的酒精固定30min。优选的，步骤(3)中，所述染色为巴氏染色。本发明的有益效果：本发明提供了一种新的非妇科液基标本的制片方法，其简化了非妇科液基标本的制片流程，降低了非妇科液基标本的制作成本；而且制片后的细胞图层比较薄且集中，便于医生进行诊断。附图说明图1：实施例1制备的玻片。图2：实施例1制备的玻片的镜检图。图3：实施例2制备的玻片的镜检图。图4：实施例3制备的玻片的镜检图。图5：对比例1制备的玻片的镜检图。图6：对比例2制备的玻片的镜检图。图7：对比例3制备的玻片的镜检图。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
技术领域：
的普通技术人员通常理解的相同含义。正如
背景技术：
部分所介绍的，非妇科标本因血性、炎性及混杂黏液等多样性，传统制片较不稳定，灵敏度低，从而影响细胞病理学的诊断。采用液基细胞学制片技术制片质量高，采集和制片细胞量大，细胞分布均匀，便于观察诊断。但是，液基细胞学制片技术用于非妇科标本(胸腹水、痰液等)的制备，尚存在诸多的技术难点。由于非妇科液基标本中有血性、炎性及黏液的存在，检测细胞会发生重叠，使制片的背景杂乱，直接影响阅片。由此需要非妇科液基标本进行处理，但进口的细胞保存处理液价格昂贵，在低收入地区难以推广；自行设计的细胞保存液效果仍有待改进。基于此，本发明首先设计了一种新的细胞保存处理液，用于对非妇科液基标本进行处理。在本发明的一种实施方案中，给出了细胞保存处理液的组成，其由如下重量份的原料组成：乙醇30-40份、柠檬酸钠2-4份、氯化钠4-6份、n-乙酰半胱氨酸6-8份、二硫代苏糖醇4-8份、脯氨酸2-4份。本发明的细胞保存处理液中，各原料组分相辅相成，缺一不可，具有协同促进作用，是一个有机的整体，其能够及时固定非妇科液基标本中脱落细胞的形态，使细胞膜不至于破裂，防止细胞崩解；以及将非妇科液基标本中被黏液包裹的细胞成功分离出来，避免了阳性细胞堆积与丢失。上述细胞保存处理液中的各个原料组分和组分含量的配比合理，具有保存细胞稳定性高、细胞固定良好、细胞形态保留更完整等优点，其可以使非妇科液基标本中的黏液溶解，涂片背景干净，红细胞大多破坏消失，炎性细胞明显减少，异常细胞清楚可见，不易漏诊。显微镜下观察具有良好的细胞学形态，细胞无扭曲、无损坏，细胞分布均匀，细胞图像清晰，层次分明，有利于筛选检查。基于新设计的细胞保存处理液，在本发明的另一种实施方案中给出了一种非妇科液基标本的制片方法，包括以下步骤：(1)将非妇科液基标本加入到上述细胞保存处理液中，充分震荡后，静置2-4h；(2)收集静置后出现的细胞沉淀层，加入清洗液，然后采用离心制片机进行制片；(3)将制片后的玻片进行固定、染色、封片。上述制片方法简化了非妇科液基标本的制片流程，降低了非妇科液基标本的制作成本；而且制片后的细胞图层比较薄且集中，制片质量好，从而缩短了阅片时间，提高了工作效率，有效提升了细胞病理学的诊断价值。为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。实施例1：(1)采集胸腹水样本，将采集到的胸腹水样本加入到盛有细胞保存处理液的容器中，胸腹水样本与细胞保存处理液的体积比为1:3，充分震荡后，静置2h；其中：细胞保存处理液由如下重量份的原料组成：乙醇35份、柠檬酸钠3份、氯化钠5份、n-乙酰半胱氨酸7份、二硫代苏糖醇6份、脯氨酸3份。(2)收集静置后出现的细胞沉淀层，加入2倍体积的清洗液(75％的乙醇水溶液)，然后采用离心制片机进行制片，离心速度为800r/min，离心时间为6min。(3)将制片后的玻片用流动的清水冲洗后放置于染色架内，玻片图如图1所示，利用95％酒精固定30min，然后进行巴氏染色，染色后封片。将本实施例制备的玻片进行镜检，镜检图如图2所示，结果发现，镜检图像的背景干净、细胞量适宜、细胞保存状态良好。实施例2：(1)采集胸腹水样本，将采集到的胸腹水样本加入到盛有细胞保存处理液的容器中，胸腹水样本与细胞保存处理液的体积比为1:2，充分震荡后，静置4h；其中：细胞保存处理液由如下重量份的原料组成：乙醇30份、柠檬酸钠4份、氯化钠4份、n-乙酰半胱氨酸8份、二硫代苏糖醇4份、脯氨酸4份。(2)收集静置后出现的细胞沉淀层，加入2倍体积的清洗液(70％的乙醇水溶液)，然后采用离心制片机进行制片，离心速度为800r/min，离心时间为6min。(3)将制片后的玻片用流动的清水冲洗后放置于染色架内，利用95％酒精固定30min，然后进行巴氏染色，染色后封片。将本实施例制备的玻片进行镜检，镜检图如图3所示，结果发现，镜检图像的背景干净、细胞量适宜、细胞保存状态良好。实施例3：(1)采集胸腹水样本，将采集到的胸腹水样本加入到盛有细胞保存处理液的容器中，胸腹水样本与细胞保存处理液的体积比为1:4，充分震荡后，静置3h；其中：细胞保存处理液由如下重量份的原料组成：乙醇40份、柠檬酸钠2份、氯化钠6份、n-乙酰半胱氨酸6份、二硫代苏糖醇8份、脯氨酸2份。(2)收集静置后出现的细胞沉淀层，加入2倍体积的清洗液(70％的乙醇水溶液)，然后采用离心制片机进行制片，离心速度为800r/min，离心时间为6min。(3)将制片后的玻片用流动的清水冲洗后放置于染色架内，利用95％酒精固定30min，然后进行巴氏染色，染色后封片。将本实施例制备的玻片进行镜检，镜检图如图4所示，结果发现，镜检图像的背景干净、细胞量适宜、细胞保存状态良好。实施例4：(1)采集痰液样本，将采集到的痰液样本加入到盛有细胞保存处理液的容器中，痰液样本与细胞保存处理液的体积比为1:4，充分震荡后，静置3h；其中：细胞保存处理液由如下重量份的原料组成：乙醇35份、柠檬酸钠3份、氯化钠5份、n-乙酰半胱氨酸7份、二硫代苏糖醇6份、脯氨酸3份。(2)收集静置后出现的细胞沉淀层，加入2倍体积的清洗液(75％的乙醇水溶液)，然后采用离心制片机进行制片，离心速度为800r/min，离心时间为6min。(3)将制片后的玻片用流动的清水冲洗后放置于染色架内，利用95％酒精固定30min，然后进行巴氏染色，染色后封片。将本实施例制备的玻片进行镜检，结果发现：镜检图像的背景干净、细胞量适宜、细胞保存状态良好。对比例1：(1)采集胸腹水样本，将采集到的胸腹水样本加入到盛有细胞保存处理液的容器中，胸腹水样本与细胞保存处理液的体积比为1:3，充分震荡后，静置2h；其中：细胞保存处理液由如下重量份的原料组成：蒸馏水35份、柠檬酸钠3份、氯化钠5份、二硫代苏糖醇9份。(2)收集静置后出现的细胞沉淀层，加入2倍体积的清洗液(75％的乙醇水溶液)，然后采用离心制片机进行制片，离心速度为800r/min，离心时间为6min。(3)将制片后的玻片用流动的清水冲洗后放置于染色架内，利用95％酒精固定30min，然后进行巴氏染色，染色后封片。将本对比例制备的玻片进行镜检，镜检图如图5所示。对比例2：(1)采集胸腹水样本，将采集到的胸腹水样本加入到盛有细胞保存处理液的容器中，胸腹水样本与细胞保存处理液的体积比为1:3，充分震荡后，静置2h；其中：细胞保存处理液由如下重量份的原料组成：乙醇35份、氯化钠5份、n-乙酰半胱氨酸7份、脯氨酸3份。(2)收集静置后出现的细胞沉淀层，加入2倍体积的清洗液(75％的乙醇水溶液)，然后采用离心制片机进行制片，离心速度为800r/min，离心时间为6min。(3)将制片后的玻片用流动的清水冲洗后放置于染色架内，利用95％酒精固定30min，然后进行巴氏染色，染色后封片。将本对比例制备的玻片进行镜检，镜检图如图6所示。对比例3：(1)采集胸腹水样本，将采集到的胸腹水样本加入到盛有细胞保存处理液的容器中，胸腹水样本与细胞保存处理液的体积比为1:3，充分震荡后，静置2h；其中：细胞保存处理液由如下重量份的原料组成：乙醇35份、柠檬酸钠3份、n-乙酰半胱氨酸7份、二硫代苏糖醇6份。(2)收集静置后出现的细胞沉淀层，加入2倍体积的清洗液(75％的乙醇水溶液)，然后采用离心制片机进行制片，离心速度为800r/min，离心时间为6min。(3)将制片后的玻片用流动的清水冲洗后放置于染色架内，利用95％酒精固定30min，然后进行巴氏染色，染色后封片。将本对比例制备的玻片进行镜检，镜检图如图7所示。试验例：对实施例1、对比例1-3制备的玻片进行评估。诊断专家在只知道编号的情况下，对不同实施例和对比例的玻片进行评估，以达到公正客观的目的。评估指标和标准见表1。表1：评估指标和标准评估结果见表2。表2：评估结果组别总背景总体细胞量细胞种类形态微生物生长状态实施例1优优优-对比例1差一般差++对比例2一般差一般+对比例3差差一般+由表2可以看出，本发明实施例1制备的玻片的质量评估结果明显优于对比例1-对比例3制备的玻片质量。图1为本发明实施例1制备的玻片图；图2-图4为实施例1-实施例3制备的玻片的镜检图。图5-图7为对比例1-对比例3制备的玻片的镜检图。由图2可以看出，采用本发明方法制备的非妇科液基标本的玻片，其背景干净，总体细胞量适宜，细胞保存状态良好，达到检测满意的水平。由图5可以看出，镜检图中的血细胞较多；由图6可以看出，镜检图中的粘液较多；由图7可以看出，镜检图中的总体细胞量较少。这些都会影响诊断的阳性率和准确率。以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。当前第1页12