一种判定蛋白质能否发生液-液相分离的方法

文档序号:24634973发布日期:2021-04-09 20:45阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种判定蛋白质能否发生液-液相分离的方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)构建待测蛋白质的体外转录元件,所述体外转录元件是由体外转录启动子,待测定蛋白质的基因序列与编码荧光蛋白基因相连接所形成的融合基因;

(2)体外转录获得融合基因的mrna;

(3)将步骤(2)所获得的mrna注射到受精卵中;

(4)对注射后的受精卵进行培养,培养15-20小时,通过荧光信号判定待测定蛋白质是否发生液-液相分离。

2.根据权利要求1所述的判定蛋白质能否发生液-液相分离的方法,其特征在于,步骤(1)所述的体外转录启动子是t7启动子,序列如seqidno.2所示。

3.根据权利要求1所述的判定蛋白质能否发生液-液相分离的方法,其特征在于,步骤(3)所述的mrna注射到受精卵中是注射到受精卵的细胞质或细胞核中。

4.根据权利要求1所述的判定蛋白质能否发生液-液相分离的方法,其特征在于,步骤(3)所述的mrna注射浓度是50-300ng/μl。

5.根据权利要求1所述的判定蛋白质能否发生液-液相分离的方法,其特征在于,步骤(3)所述的mrna注射浓度是150ng/μl。

6.根据权利要求1所述的判定蛋白质能否发生液-液相分离的方法,其特征在于,步骤(3)所述的mrna注射参数是注射压力为80-200hpa,注射时长0.1s,补偿压力100-300hpa。

7.根据权利要求1所述的判定蛋白质能否发生液-液相分离的方法,其特征在于,步骤(3)所述的受精卵为鼠受精卵。

8.根据权利要求7所述的判定蛋白质能否发生液-液相分离的方法,其特征在于,步骤(1)所述受精卵培养条件是37℃,co2的浓度是5%。

9.根据权利要求1所述的判定蛋白质能否发生液-液相分离的方法,其特征在于,步骤(4)所述的判定待测定蛋白质是否发生液-液相分离是通过荧光显微镜观察,形成的荧光信号是圆形,则发生液-液相分离,呈现弥散性分布则未发生液-液相分离。


技术总结
一种判定蛋白质能否发生液‑液相分离的方法,属于基因工程技术领域。为了解决目前研究蛋白能否发生“液‑液相分离”所用方法步骤繁琐,费时费力,原核表达易形成包涵体的问题,本发明提供了一种判定蛋白质能否发生液‑液相分离的方法。本发明所述的方法具体包括如下步骤:构建含有体外转录启动子、待测蛋白以及标记蛋白基因的载体,以此载体为模板,PCR扩增后进行体外转录,获得融合基因的mRNA,将mRNA注射到受精卵中,培养15‑20小时之后通过荧光显微镜观察是否发生“液‑液相分离”。本发明以受精卵为载体,通过注射的方式使体外转录的mRNA在受精卵中进行表达,操作非常简单,结果清晰,并且能在短时间内获得结果。

技术研发人员:王加强;王乐韵
受保护的技术使用者:东北农业大学
技术研发日:2019.10.10
技术公布日:2021.04.09
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