血液中半挥发性有机物的检测方法与流程

[0001]
本发明属于复杂基质生物样品中有机污染物监测领域，更具体地，涉及一种血液中半挥发性有机物的检测方法，适用于对103种半挥发性有机物的检测。


背景技术：

[0002]
半挥发性有机物是一类沸点在170-350℃之间，蒸汽压在1.3*10-2
～10-8
kpa之间的有机物，包括农药、多环芳烃、邻苯二甲酸酯、阻燃剂、多氯联苯和多溴联苯类等化合物(environ res.2017；158:649-659)。半挥发性有机物广泛存在于塑料制品、装修材料及家用日化品中，人类活动是环境中半挥发性有机物的主要来源。半挥发性有机物可以凭借其独特的物理特性，从源头游离出来，在接触载体表面反复解吸-吸附，空间多介质持久迁移，大气、水体、土壤中无处不在，经过机体呼吸道、皮肤黏膜以及食物链等途径进入体内(environ int.2019；127:653-663)。比如邻苯二甲酸酯，也是持久性有机污染物的一种，作为增塑剂，它被普遍应用到食品医用品包装、玩具、清洁剂、个人护理用品、地板和壁纸等日常产品中，甚至有不法商家将其添加到加工食品中。邻苯二甲酸酯类物质以非共价键形式与产品结合，较容易从这些产品中游离释放出来，通过环境介质传播，以直接接触或间接摄入的方式进入人体(sci total environ.2018；645:1400-1409)。而环境中的半挥发性有机物大多以多种物质多种途径同时暴露形式进入人体，建立一种血液中同步检测多类半挥发性有机物的简便前处理与分析方法，不仅可以缩短前处理和分析时间，降低实验人员劳动强度，提高成本效益，对环境污染物人体暴露水平监测也有重要意义。
[0003]
由于半挥发性有机物种类多，物理化学性质各有不相同，以往研究一般根据化合物极性、挥发性及稳定性等差异，对不同种类化合物使用不同的前处理及分析方法，分批次检测。样本基质也是重要的影响因素。血液样本成分复杂，蛋白质和磷脂含量较高，对化合物检测干扰较大，所以目前针对血液样本中半挥发性有机物的分析方法主要通过加入甲酸、乙酸、尿素等物质使蛋白质失活，用正己烷、丙酮、二氯甲烷和甲基叔丁基醚等有机溶剂通过液液萃取或者固相萃取的方式，提取目标化合物。但大多数文献都是对样本中某类单一化合物进行提取检测，不能同步分析多类化合物复合暴露水平。或者分馏提取样本中多类化合物，通过多种仪器分批次检测分析。前处理过程复杂，试剂人力消耗大，仪器需求大，分析时间长。


技术实现要素：

[0004]
针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明的目的在于提供一种血液中半挥发性有机物的检测方法，其中通过对方法整体工艺流程设计进行改进，先对待测样品采用特定的前处理，再对前处理后的样品采用气相色谱质谱联用仪多反应监测模式进行检测，并可进一步对气相色谱质谱联用仪的检测条件进行优化，尤其可对血液中具有代表性的邻苯二甲酸酯、多环芳烃、多氯联苯和农药等半挥发性有机物进行浓度检测，有效解决目前方法未同时包含邻苯二甲酸酯、多环芳烃、多氯联苯、多溴二苯醚、农药类物质的样品前处理和
检测的难题，本发明能够对至少2种半挥发性有机物同时进行检测，并且检测方法具有检测限低、回收率好、分析效率高等优点。
[0005]
为实现上述目的，按照本发明，提供了一种血液中半挥发性有机物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0006]
(1)多级萃取：
[0007]
将0.1-2ml的待检测的血清或血浆样品，加入超纯水稀释1-3倍，加入0.5-2ml乙腈，密闭超声5-30分钟后，加入1-5ml第一溶剂，振动萃取5分钟以上，离心后取上清液，记为第一上清液；所述第一溶剂包括但不限于正己烷、环己烷、异辛烷中的任意一种；
[0008]
接着，向处理后的血清或血浆样品中再次加入0.1-1ml第二溶剂，振动萃取5分钟以上，离心后取上清液，记为第二上清液；所述第二溶剂包括但不限于二氯甲烷、甲基叔丁基醚、氯仿、乙酸乙酯、甲苯中的任意一种；
[0009]
将所述第一上清液和所述第二上清液合并，用氮气吹干，接着再用至少100μl第三溶剂复溶，得到复溶样本，待上样；所述第三溶剂包括但不限于正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、异辛烷中的任意一种；
[0010]
(2)固相萃取柱的去杂、活化：
[0011]
用1-5ml第四溶剂润洗固相萃取柱，滴干溶剂，弃去润洗液；然后，用1-5ml第五溶剂润洗固相萃取柱，滴干溶剂，弃去润洗液；其中，所述第四溶剂包括但不限于正己烷、或正己烷与二氯甲烷体积比大于等于8：2的正己烷/二氯甲烷混合溶液；所述第五溶剂包括但不限于二氯甲烷、或正己烷与二氯甲烷体积比小于等于1：1的正己烷/二氯甲烷混合溶液；
[0012]
(3)上样：
[0013]
将所述步骤(1)得到的所述复溶样本加入到经所述步骤(2)处理得到的所述固相萃取柱中，收集滴下溶液；
[0014]
(4)洗脱：
[0015]
待所述步骤(3)中再无溶液滴下后，向所述固相萃取柱中，加入1-3ml所述第四溶剂，滴干溶剂，再加入1-3ml第六溶剂，滴干溶剂，再加入1-3ml所述第五溶剂，滴干溶剂，收集洗脱液；其中，所述第六溶剂包括但不限于体积比为8:2的正己烷/丙酮混合溶液、或体积比8:2的正己烷/乙酸乙酯混合溶液；
[0016]
(5)浓缩定容：
[0017]
将所述步骤(3)中收集得到的溶液与所述步骤(4)中收集的洗脱液两者合并，在氮气保护下吹干，然后用0.05-1ml所述第三溶剂复溶得到浓缩液，接着将所述浓缩液转移至样品瓶中，待上机分析；
[0018]
(6)对所述步骤(5)得到的样品瓶中的浓缩液进行气相色谱质谱联用仪分析，所述气相色谱质谱联用仪的色谱条件和质谱条件预先经过多反应监测模式检测下的优化处理；所述多反应监测模式检测下的优化处理是根据预先选定的待测目标半挥发性有机物的种类，基于各个待测目标半挥发性有机物的单标准品溶液，通过优化色谱和质谱检测过程中各个待测目标半挥发性有机物的检测灵敏度实现的；
[0019]
(7)利用所述步骤(6)得到的分析结果，计算所述待检测的血清或血浆样品中各个待测目标半挥发性有机物的浓度；
[0020]
其中，所述预先选定的待测目标半挥发性有机物为至少2种半挥发性有机物，选
自：邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二正丁酯、邻苯二甲酸丁苄酯、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯、邻苯二甲酸二正辛酯、pcb-28、pcb-52、pcb-101、pcb-118、pcb-138、pcb-153、pcb-180、萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并(a)蒽、苯并(b)荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并(a)芘、茚并[1,2,3-cd]芘、二苯蒽、苯并(g,h,i)苝、pbde-28、pbde-47、pbde-99、pbde-100、pbde-153、敌敌畏、速灭磷、苯胺灵、灭克磷、氟乐灵、甲拌磷、α-六六六、六氯苯、阿特拉津、苯嗪草酮、β-六六六、五氯硝基苯、γ-六六六、戊炔草胺、二嗪农、乙嘧硫磷、δ-六六六、解草酮、乙草胺、甲基毒死蜱、甲基对硫磷、七氯、莠灭净、扑草净、甲基嘧啶磷、杀螟松、马拉硫磷、异丙甲草胺、艾氏剂、草净津、嘧啶磷、异柳磷、杀螟威、稻丰散、喹硫磷、杀扑磷、o,p'-滴滴伊、杀虫畏、多效唑、丁草胺、α-硫丹、苯线磷、敌草胺、丙溴磷、p,p'-滴滴伊、恶草酮、狄氏剂、o,p'-滴滴滴、乙氧氟草醚、除草醚、异狄氏剂、吡氟禾草灵、β-硫丹、乙硫磷、p,p'-滴滴滴、o,p'-滴滴涕、p,p'-滴滴涕、哒嗪硫磷、联苯菊酯、甲氰菊酯、伏杀硫磷、氯氟氰菊酯、氯菊酯、蝇毒磷、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯。
[0021]
作为本发明的进一步优选，所述预先选定的待测目标半挥发性有机物同时包括邻苯二甲酸酯类、多氯联苯类、多环芳烃类、多溴二苯醚类、农药类中的至少2类半挥发性有机物。
[0022]
作为本发明的进一步优选，所述预先选定的待测目标半挥发性有机物为103种半挥发性有机物，其中涉及邻苯二甲酸酯类7种、多氯联苯类7种、多环芳烃类16种、多溴二苯醚类5种、农药类68种，具体如下：
[0023]
邻苯二甲酸酯类，包括：邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二正丁酯、邻苯二甲酸丁苄酯、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯、邻苯二甲酸二正辛酯；
[0024]
多氯联苯类，包括：pcb-28、pcb-52、pcb-101、pcb-118、pcb-138、pcb-153、pcb-180；
[0025]
多环芳烃类，包括：萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并(a)蒽、苯并(b)荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并(a)芘、茚并[1,2,3-cd]芘、二苯蒽、苯并(g,h,i)苝；
[0026]
多溴二苯醚类，包括：pbde-28、pbde-47、pbde-99、pbde-100、pbde-153；
[0027]
农药类，包括：敌敌畏、速灭磷、苯胺灵、灭克磷、氟乐灵、甲拌磷、α-六六六、六氯苯、阿特拉津、苯嗪草酮、β-六六六、五氯硝基苯、γ-六六六、戊炔草胺、二嗪农、乙嘧硫磷、δ-六六六、解草酮、乙草胺、甲基毒死蜱、甲基对硫磷、七氯、莠灭净、扑草净、甲基嘧啶磷、杀螟松、马拉硫磷、异丙甲草胺、艾氏剂、草净津、嘧啶磷、异柳磷、杀螟威、稻丰散、喹硫磷、杀扑磷、o,p'-滴滴伊、杀虫畏、多效唑、丁草胺、α-硫丹、苯线磷、敌草胺、丙溴磷、p,p'-滴滴伊、恶草酮、狄氏剂、o,p'-滴滴滴、乙氧氟草醚、除草醚、异狄氏剂、吡氟禾草灵、β-硫丹、乙硫磷、p,p'-滴滴滴、o,p'-滴滴涕、p,p'-滴滴涕、哒嗪硫磷、联苯菊酯、甲氰菊酯、伏杀硫磷、氯氟氰菊酯、氯菊酯、蝇毒磷、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯。
[0028]
作为本发明的进一步优选，所述步骤(6)中，所述气相色谱质谱联用仪的色谱条件和质谱条件如下：
[0029]
(i)色谱条件：
[0030]
进样口温度300℃，氦气为载气，载气流量为1ml/min，不分流进样，进样量为1μl；色谱柱为db-5ms，长度为30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.25μm；采用程序升温方式，升温程
序：在45℃保持1min，然后以30℃/min的升温速率升温至130℃，保持3min，再以12℃/min的升温速率升温至180℃，再以7℃/min的升温速率升温至240℃，并保持5min，最后以12℃/min的升温速率升温至325℃，保持5min；
[0031]
(ii)质谱条件：
[0032]
离子源ei，离子源温度280～300℃，传输线温度280～300℃，离子化能量70ev，检测模式为多反应监测模式。
[0033]
作为本发明的进一步优选，所述步骤(7)中，所述计算是按内标法峰面积实现定量计算的。
[0034]
作为本发明的进一步优选，所述步骤(1)中，所述待检测的血清或血浆样品是置于玻璃管中进行处理的；
[0035]
所述步骤(1)中，所述取上清液均是使用玻璃吸管进行的。
[0036]
作为本发明的进一步优选，所述玻璃管和所述玻璃吸管均是清洗后经过480℃烘烤5小时后得到的。
[0037]
作为本发明的进一步优选，所述步骤(5)中，所述样品瓶的瓶盖为聚四氟乙烯材质；
[0038]
所述步骤(5)具体是将所述浓缩液转移至2ml的样品瓶中，盖好瓶盖，于4℃冷藏保存，以待上机分析。
[0039]
作为本发明的进一步优选，使用的乙腈、正己烷及二氯甲烷均为农残级。
[0040]
通过本发明所构思的以上技术方案，与现有技术相比，本发明方法能够对多种半挥发性有机物同时进行定量检测，尤其可对典型的103种半挥发性有机物同时进行定量检测，得到它们的浓度。针对血液中的103种半挥发性有机物(含邻苯二甲酸酯7项，多氯联苯7项，多环芳烃16项，多溴二苯醚5项，农药68项)的物化性质，本发明的前处理方法是采用不同极性的混合溶液萃取和florisil固相萃取柱萃取相结合，降低杂质和基质干扰，处理后的样本可进行定性定量检测，成本效益高，适用血样复杂基质样本多类半挥发性有机物一步处理同时检测。由此建立起的气相色谱质谱联用仪检测分析方法，采用多反应监测模式，具有检测限低，灵敏度高，准确度好，分析效率高等优点，特别是解决了目前方法未同时包含邻苯二甲酸酯、多环芳烃、多氯联苯、多溴二苯醚、有机氯杀虫剂、有机磷杀虫剂、除草剂类和拟除虫菊酯类物质以及其它类农药的处理和检测的难题，本发明为血液中103种半挥发性有机物分析提供了一种简便、高效的检测方法。
[0041]
对于103种半挥发性有机物，本发明采用多反应监测模式，并通过对气相色谱质谱联用仪的检测条件进行优化，特征离子对定性、内标法积分定量时，方法的检出限范围为0.001-0.181μg ml-1
，平行样相对标准偏差为1.5-18.9％，采用二级质谱定性，准确度好，灵敏度高。
[0042]
利用本发明检测方法，能够判断待测样品中是否含有目标半挥发性有机物(目标半挥发性有机物的种类可预先选定)，以及样品中各个目标半挥发性有机物的浓度，可应用于收集地区环境大数据等场景，判断各种半挥发性有机物在人体血液内的暴露程度。
附图说明
[0043]
图1是本发明血液中半挥发性有机物检测方法的流程示意图，适用于对103种半挥
发性有机物的检测。
[0044]
图2是本发明血液中103种半挥发性有机物气相色谱质谱联用仪分析检测色谱图。其针对的检测样品是向某一血液样品中加入103种半挥发性有机物，每一种半挥发性有机物的加标浓度均控制为0.04mg/l；图中所示的标记1～103分别对应103种半挥发性有机物，这些标记所对应的具体半挥发性有机物种类与表2、表3中色谱图出峰编号相一致。
[0045]
图3是本发明血液中半挥发性有机物检测前处理过程以及仪器分析示意图。
具体实施方式
[0046]
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0047]
总的来说，本发明的前处理与分析方法流程是将样本经过极性由小到大的有机混合溶剂依次超声萃取和振动萃取后，富集上样，采用固相萃取小柱净化分离，再以极性由小到大的有机混合溶剂依次洗脱固相萃取小柱上富集的有机物，再用气相色谱质谱联用仪多反应监测模式进行检测。具体的，前处理时，先用超纯水稀释，再依次加入乙腈、正己烷和二氯甲烷萃取，收集并合并萃取液后氮气吹干，用正己烷复溶。采用固相萃取小柱进行固相萃取，接着依次用正己烷、正己烷/乙酸乙酯和正己烷/二氯甲烷的混合溶液洗脱目标物，收集洗脱液，氮气吹干后，用正己烷复溶进样检测目标物。检测分析采用气相色谱-质谱联用仪进行。
[0048]
检测方法可以按以下步骤进行：
[0049]
(1)多级萃取：
[0050]
将0.1-2ml的待检测的血清或血浆样品，加入超纯水稀释1-3倍，加入0.5-2ml乙腈，密闭超声5-30分钟后，加入1-5ml第一溶剂，第一溶剂包括但不限于正己烷、环己烷、异辛烷，振动萃取5分钟以上，离心后取上清液，记为第一上清液；
[0051]
接着，向处理后的血清或血浆样品中再次加入0.1-1ml第二溶剂，第二溶剂包括但不限于二氯甲烷、甲基叔丁基醚、氯仿、乙酸乙酯、甲苯，振动萃取5分钟以上，离心后取上清液，记为第二上清液；
[0052]
将所述第一上清液和所述第二上清液合并，用氮气吹干，接着再用至少100μl第三溶剂复溶，第三溶剂包括但不限于正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、异辛烷，得到复溶样本，待上样；
[0053]
(2)固相萃取柱的去杂、活化：
[0054]
用1-5ml第四溶剂，第四溶剂包括但不限于纯正己烷溶液、正己烷体积百分数不低于80％的正己烷/二氯甲烷混合溶液(如，体积比为9：1的正己烷/二氯甲烷混合溶液、体积比为8:2的正己烷/二氯甲烷混合溶液)，润洗固相萃取柱，滴干溶剂，弃去润洗液；然后，用1-5ml第五溶剂，第五溶剂包括但不限于纯二氯甲烷溶液、二氯甲烷体积百分数不低于50％的正己烷/二氯甲烷混合溶液(如，体积比为1:1的正己烷/二氯甲烷混合溶液、体积比为1：9的正己烷/二氯甲烷溶液)，润洗固相萃取柱，滴干溶剂，弃去润洗液；
[0055]
(3)上样：
[0056]
将所述步骤(1)得到的所述复溶样本加入到经所述步骤(2)处理得到的所述固相萃取柱中，收集滴下溶液；
[0057]
(4)洗脱：
[0058]
待所述步骤(3)中再无溶液滴下后，向所述固相萃取柱中，加入1-3ml第四溶剂，滴干溶剂，再加入1-3ml第六溶剂，第六溶剂包括但不限于体积比为8:2的正己烷/丙酮混合溶液、体积比8:2的正己烷/乙酸乙酯混合溶液，滴干溶剂，再加入1-3ml第五溶剂，滴干溶剂，收集洗脱液；
[0059]
(5)浓缩定容
[0060]
在纯净氮气保护下吹干样品，0.05-1ml第三溶剂(如0.1ml正己烷)复溶，将浓缩液转移到2ml样品瓶中，盖好瓶盖，于4℃冷藏保存待上机分析；
[0061]
步骤(1)中玻璃管和玻璃吸管为清洗后经过480℃烘烤5小时后的洁净玻璃管，瓶盖为聚四氟乙烯材质；步骤(1)和(5)中氮气纯度为99.9％以上；所有步骤中的有机溶剂都是农残级溶剂；
[0062]
(6)对待测样品溶液进行气相色谱质谱联用仪分析；该气相色谱质谱联用仪的色谱条件和质谱条件预先经过多反应监测模式检测下的优化处理；多反应监测模式检测下的优化处理是根据预先选定的待测目标半挥发性有机物的种类，基于各个待测目标半挥发性有机物的单标准品溶液，通过优化色谱和质谱检测过程中各个待测目标半挥发性有机物的检测灵敏度实现的；
[0063]
(7)目标化合物浓度计算(如，按内标法峰面积定量计算目标物浓度)。
[0064]
下面以检测预先选取的103种半挥发性有机物为例，对本发明方法进行详细介绍(这103种半挥发性有机物为：邻苯二甲酸酯7项，多氯联苯7项，多环芳烃16项，多溴二苯醚5项，农药68项)。
[0065]
实施例1
[0066]
(1)待测半挥发性有机物标准溶液的配制
[0067]
取高浓度各单标准溶液适量，用正己烷配置成浓度为10μg/ml的单标准溶液(邻苯二甲酸酯7项，多氯联苯7项，多环芳烃16项，多溴二苯醚5项)，用甲醇配置成浓度为10μg/ml的单标准溶液(农药68项)。
[0068]
(2)色谱/质谱条件的优化
[0069]
以使用色谱柱db-5ms(30*m*0.25mm*0.25μm)为例，将各个10μg/ml的单标准溶液直接进样，先进行全扫描，找到响应高特异性强的分子离子峰为母离子(也即，分子离子)，再根据预先选定的不同碰撞能量要求设置不同的碰撞能量对其进行轰击(碰撞能量要求预先选定，例如可参考现有技术文献jia,xiaoqian,et al.environmental pollution 251.aug.(2019):400-406.)，产生二次离子(即，子离子)，将分子离子与信号强度高特异性强的2～3个子离子组成监测离子对(极端情况下，也可以只取信号强度高特异性强的1个子离子，将分子离子与该子离子组成1个监测离子对)，选择能产生最高响应特征子离子的碰撞能量(响应特征最高，即，响应峰值最高)，使选定的母离子和子离子对有最佳灵敏度，对化合物进行定性定量(定性对应化合物种类的确定，定量对应该化合物含量的确定；定性、定量可以选择不同的特征峰；当然，极端情况下，也可以选同一特征峰)，从而完成多反应监测模式检测下对条件的优化。
[0070]
接着，再分别设置不同的进样口温度、离子源温度和传输线温度，以各类化合物综合响应最佳选定进样口温度、离子源温度和传输线温度(综合响应最佳可以是按103种化合物预先对应的权重，峰高最高即响应最佳)。设置不同的升温程序和载气流量，在103种半挥发性有机物分离响应效果最佳时选定升温程序和载气流量(此时考虑的同时包含响应效果与各化合物间的分离效果)。
[0071]
(3)色谱/质谱条件的设定
[0072]
可以使用三重四级杆气相色谱质谱联用仪(布鲁克gc-ms/ms)，各参数条件设置如下：
[0073]
离子源：电子轰击离子源ei；
[0074]
检测方式：多反应监测模式；
[0075]
离子化能量：70ev；
[0076]
色谱柱：db-5ms，30*m*0.25mm*0.25μm；
[0077]
进样口温度：300℃；
[0078]
离子源温度：280℃；
[0079]
传输线温度：280℃；
[0080]
载气流量：1ml/min；
[0081]
升温程序：在45℃保持1min，然后以30℃/min的升温速率升温至130℃，保持3min，再以12℃/min的升温速率升温至180℃，再以7℃/min的升温速率升温至240℃，保持5分钟，再以12℃/min的升温速率升温至325℃，保持5min；载气流量1ml/min；
[0082]
多反应监测(mrm)具体条件见表1。
[0083]
表1 103种半挥发性有机物的多离子反应检测条件
[0084]
[0085]
[0086]
[0087]
[0088]
[0089][0090]
(4)实验室检出限的确定
[0091]
与常规处理相似，可以以实验空白加标样品仪器响应是基线噪声比值的三倍时的加标浓度为检出限c为加标浓度，s为峰高，n为基线噪声。
[0092]
根据上述检测限计算方式可知，利用本发明方法检测103种半挥发性有机物的检出限范围为0.001-0.181μg l-1
。
[0093]
实施例2
[0094]
根据实施例1中确定的三重四级杆气相色谱质谱联用仪检测细节参数条件设定，采集志愿者全血，离心后得到血清；将血清均分成7等分作为平行样，进行实验。具体步骤如下：
[0095]
(1)多级液液萃取：
[0096]
将0.1ml的待检测的血清样品，加入超纯水稀释2倍，加入0.5ml乙腈，密闭超声5分钟后，加入1ml正己烷，振动萃取5分钟，离心后取上清液，记为第一上清液；
[0097]
接着，向上述处理后的血清样品中再次加入0.1ml的二氯甲烷，振动萃取5分钟，离
心后取上清液，记为第二上清液；
[0098]
将所述第一上清液和所述第二上清液合并，用纯度不低于99.9％的纯净氮气吹干，接着再用100μl正己烷复溶，得到复溶样本，待上样；
[0099]
(2)固相萃取小柱的去杂、活化：
[0100]
用1ml体积比为8:2的正己烷/二氯甲烷混合溶液润洗florisil固相萃取小柱，滴干溶剂，弃去润洗液；然后，用1ml体积比为1:1的正己烷/二氯甲烷混合溶液润洗florisil固相萃取小柱，滴干溶剂，弃去润洗液；
[0101]
(3)上样：
[0102]
将所述步骤(1)得到的所述复溶样本加入到经所述步骤(2)处理得到的所述固相萃取小柱中，用0.5ml正己烷润洗装过所述第一上清液和所述第二上清液的容器，一并加入所述固相萃取小柱中，收集滴下溶液；
[0103]
(4)洗脱：
[0104]
待所述步骤(3)中再无溶液滴下后，向所述固相萃取小柱中，加入1ml体积比为8:2的正己烷/二氯甲烷混合溶液，滴干溶剂，再加入1ml体积比8:2的正己烷/乙酸乙酯混合溶液，滴干溶剂，再加入1ml体积比为1:1的正己烷/二氯甲烷混合溶液，滴干溶剂，收集洗脱液；
[0105]
(5)浓缩定容：
[0106]
将所述步骤(3)中收集得到的溶液与所述步骤(4)中收集的洗脱液两者合并，在纯度不低于99.9％的纯净氮气保护下吹干，然后用0.1ml正己烷复溶得到浓缩液，接着将所述浓缩液转移至样品瓶中，待上机分析；
[0107]
(6)对所述步骤(5)得到的样品瓶中的浓缩液进行三重四级杆气相色谱质谱联用仪分析，所述三重四级杆气相色谱质谱联用仪的色谱条件和质谱条件预先经过多反应监测模式检测下的优化处理；所述多反应监测模式检测下的优化处理是根据预先选定的待测目标半挥发性有机物的种类，基于各个待测目标半挥发性有机物的单标准品溶液，通过优化色谱和质谱检测过程中各个待测目标半挥发性有机物的检测灵敏度实现的；
[0108]
(7)利用所述步骤(6)得到的分析结果，计算所述待检测的血清样品中各个待测目标半挥发性有机物的浓度；
[0109]
103种半挥发性有机物基体加标回收率情况详见表2，回收率范围在74.25％～111.87％之间。
[0110]
7组平行样双样测定相对标准偏差为3.95-16.97％。
[0111]
表2 103种半挥发性有机物基体加标回收率情况
[0112]
[0113]
[0114][0115]
实施例3
[0116]
根据实施例1中确定的三重四级杆气相色谱质谱联用仪检测细节参数条件设定，采集另一志愿者全血，离心后得到血清；将血清均分成7等分作为平行样，进行实验。具体步骤如下：
[0117]
(1)多级液液萃取：
[0118]
将2ml的待检测的血清样品，加入超纯水稀释3倍，加入2ml乙腈，密闭超声20分钟后，加入5ml正己烷，振动萃取5分钟，离心后取上清液，记为第一上清液；
[0119]
接着，向上述处理后的血清样品中再次加入1ml的二氯甲烷，振动萃取5分钟，离心后取上清液，记为第二上清液；
[0120]
将所述第一上清液和所述第二上清液合并，用纯度不低于99.9％的纯净氮气吹干，接着再用100μl正己烷复溶，得到复溶样本，待上样；
[0121]
(2)固相萃取小柱的去杂、活化：
[0122]
用5ml体积比为8:2的正己烷/二氯甲烷混合溶液润洗florisil固相萃取小柱，滴干溶剂，弃去润洗液；然后，用5ml体积比为1:1的正己烷/二氯甲烷混合溶液润洗florisil
固相萃取小柱，滴干溶剂，弃去润洗液；
[0123]
(3)上样：
[0124]
将所述步骤(1)得到的所述复溶样本加入到经所述步骤(2)处理得到的所述固相萃取小柱中，用2ml正己烷润洗装过所述第一上清液和所述第二上清液的容器，一并加入所述固相萃取小柱中，收集滴下溶液；
[0125]
(4)洗脱：
[0126]
待所述步骤(3)中再无溶液滴下后，向所述固相萃取小柱中，加入3ml体积比为8:2的正己烷/二氯甲烷混合溶液，滴干溶剂，再加入3ml体积比8:2的正己烷/乙酸乙酯混合溶液，滴干溶剂，再加入3ml体积比为1:1的正己烷/二氯甲烷混合溶液，滴干溶剂，收集洗脱液；
[0127]
(5)浓缩定容：
[0128]
将所述步骤(3)中收集得到的溶液与所述步骤(4)中收集的洗脱液两者合并，在纯度不低于99.9％的纯净氮气保护下吹干，然后用0.1ml正己烷复溶得到浓缩液，接着将所述浓缩液转移至样品瓶中，待上机分析；
[0129]
(6)对所述步骤(5)得到的样品瓶中的浓缩液进行三重四级杆气相色谱质谱联用仪分析，所述三重四级杆气相色谱质谱联用仪的色谱条件和质谱条件预先经过多反应监测模式检测下的优化处理；所述多反应监测模式检测下的优化处理是根据预先选定的待测目标半挥发性有机物的种类，基于各个待测目标半挥发性有机物的单标准品溶液，通过优化色谱和质谱检测过程中各个待测目标半挥发性有机物的检测灵敏度实现的；
[0130]
(7)利用所述步骤(6)得到的分析结果，计算所述待检测的血清样品中各个待测目标半挥发性有机物的浓度；
[0131]
103种半挥发性有机物基体加标回收率情况详见表3，回收率范围在75.24％～114.84％之间。
[0132]
7组平行样双样测定相对标准偏差为4.95～14.85％。
[0133]
表3 103种半挥发性有机物基体加标回收率情况
[0134]
[0135]
[0136][0137]
上述实施例中对血液中具有代表性的邻苯二甲酸酯、多环芳烃、多氯联苯和农药等103种半挥发性有机物的样本前处理及分析方法和结果进行了汇总和总结，可根据实际需求灵活调整。
[0138]
本发明中所使用的各种有机溶剂均为农残级溶剂，氮气和氦气的纯度均不低于99.9％。
[0139]
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。