技术特征：
1.一种同时定量大鼠血浆中丹七通脉片中所含的15种人参皂苷类成分的分析方法，所述15种人参皂苷类成分分别为：rk3、20(s)-rh1、20(r)-rh1、nr2、rg2、rg3、rg1、nr1、rd、nk、re、20-o-glc-rf、rb3、rb1、nr4，所述方法包括以下步骤：(1)标准曲线工作溶液的配制采用甲醇将15种人参皂苷rk3、20(s)-rh1、20(r)-rh1、nr2、rg2、rg3、rg1、nr1、rd、nk、re、20-o-glc-rf、rb3、rb1、nr4配制成梯度浓度范围在0.04-40μg/ml内的标准曲线工作溶液；(2)内标(is)工作溶液的配制采用甲醇将地高辛配制成1μg/ml的内标工作溶液；(3)标准血浆样品制备取190μl大鼠空白血浆样品，加入内标工作溶液10μl，然后分别加入不同浓度的标准曲线工作溶液10μl，再加入正丁醇1ml，涡旋，离心，取上清，氮气吹干；残留物用100μl 20％乙腈水复溶，涡旋离心，取上清转移至液相小瓶中；(4)待测血浆样品制备取200μl待测大鼠血浆样品，加入内标工作溶液10μl，再加入正丁醇1ml，涡旋，离心，取上清，氮气吹干；残留物用100μl 20％乙腈水复溶，涡旋离心，取上清转移至液相小瓶中；(5)样品检测检测体系使用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱仪进行检测，色谱柱为beh c18柱，规格为2.1
×
100mm，1.8μm，流动相为0.1％甲酸水溶液(a)和0.1％甲酸的乙腈溶液(b)，梯度洗脱程序如下：0
–
6min,5
–
20％(b)；6
–
11min,20
–
20％(b)；11
–
12min,20
–
21％(b)；12
–
12.1min,21
–
27％(b)；12.1
–
13min,27
–
30％(b)；13
–
20min,30
–
33％(b)；20
–
27min,33
–
55％(b)；27-28min,55-95％(b)；28
–
31min,95-95％(b)；31-32min,95-5％(b)；32
–
35min,5-5％(b)，采用电喷雾离子源在负离子模式下使用scheduled mrm进行检测；标准曲线的建立采用所述检测体系对标准血浆样品进行检测，以血浆中各待测人参皂苷对照品的浓度为横坐标，待测人参皂苷对照品峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，采用1/x2加权最小二乘法进行线性回归，建立各待测人参皂苷的标准曲线；待测物含量的确定采用所述检测体系对待测血浆样品进行检测，将各待测物与内标的峰面积比值代入所述的标准曲线中，计算得到血浆中各个待测物的含量。2.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述超高效液相色谱的柱温为25℃、30℃、35℃或40℃。3.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述超高效液相色谱的柱温为30℃。4.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述超高效液相色谱的流动相流速为0.2ml/min、0.3ml/min或0.4ml/min。5.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述超高效液相色谱的流动相流速为0.3ml/min。6.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述超高效液相色谱的样品的进样量为2μl、
5μl或10μl。7.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述超高效液相色谱的样品的进样量为10μl。8.根据权利要求1所述的分析方法，其中，mrm参数设置如下表中所示：方法，其中，mrm参数设置如下表中所示：9.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所采用的电喷雾离子源参数如下：毛细管电压为-4.5kv，温度为550℃，curtain gas为25psi，gs1为55psi，gs2为55psi，interface heater为on。10.根据权利要求1至9中任一项所述的分析方法，其中，所述方法包括以下步骤：(1)标准曲线工作溶液的配制分别精密称取人参皂苷rk3、20(s)-rh1、20(r)-rh1、nr2、rg2、rg3、rg1、nr1、rd、nk、re、20-o-glc-rf、rb3、rb1、nr4各5mg，分别置于5ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，分别制成
浓度为1mg/ml的单一对照品储备液；分别吸取适量体积的上述单一对照品储备液于5ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，制成各对照品浓度为40μg/ml的混合对照品储备液；吸取适量体积的上述混合标准品储备液，分别加入甲醇逐级梯度稀释，得到浓度分别为0.04、0.1、0.2、0.4、1、2、4、10、20、40μg/ml的标准曲线工作溶液；(2)内标(is)工作溶液的配制精密称取地高辛5mg于5ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，制成浓度为1mg/ml的内标储备液；吸取适量体积的上述内标储备液，加入甲醇稀释，得到浓度为1μg/ml的内标工作溶液；(3)标准血浆样品制备取190μl大鼠空白血浆样品，加入内标工作溶液10μl，然后分别加入不同浓度的标准曲线工作溶液10μl，再加入正丁醇1ml，涡旋3min，4℃4000rpm离心10min，取上清900μl，40℃氮气吹干；残留物用100μl 20％乙腈水复溶，涡旋3min，4℃14000rpm离心10min，取上清90μl转移至液相小瓶中；(4)待测血浆样品制备取200μl待测大鼠血浆样品，加入内标工作溶液10μl，再加入正丁醇1ml，涡旋3min，4℃4000rpm离心10min，取上清900μl，40℃氮气吹干；残留物用100μl 20％乙腈水复溶，涡旋3min，4℃14000rpm离心10min，取上清90μl转移至液相小瓶中；(5)样品检测标准曲线的建立采用所述检测体系对标准血浆样品进行检测，以血浆中各待测人参皂苷对照品的浓度为横坐标，待测人参皂苷对照品峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，采用1/x2加权最小二乘法进行线性回归，建立各待测人参皂苷的标准曲线；待测物含量的确定采用所述检测体系对待测血浆样品进行检测，将各待测物与内标的峰面积比值代入所述的标准曲线中，计算得到血浆中各个待测物的含量。
技术总结
本发明公开了一种同时定量大鼠血浆中丹七通脉片15种人参皂苷类成分的分析方法。本发明以含0.1％甲酸的水溶液-含0.1％甲酸的乙腈溶液为流动相，使用BEH C18色谱柱进行目标化合物分离，采用电喷雾电离三重四级杆质谱在scheduled MRM模式下进行含量测定。15种人参皂苷类成分的线性范围为2-2000ng/mL，该方法灵敏度高，专属性强，重现性好，实现了对大鼠血浆中15种人参皂苷类成分的同时定量分析。浆中15种人参皂苷类成分的同时定量分析。浆中15种人参皂苷类成分的同时定量分析。
技术研发人员：果德安 魏文龙 李振伟 姚长良 毕启瑞 张建青 屈华
受保护的技术使用者：中国科学院上海药物研究所
技术研发日：2020.12.18
技术公布日：2022/6/21