一种水产品中抗菌药的快速定量检测试剂盒的制作方法

[0001]
本实用新型涉及食品安全检测技术领域，具体涉及一种水产品中抗菌药的快速定量检测试剂盒。


背景技术：

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目前国内对水产品中违禁抗菌药物残留的检测主要有：孔雀石绿、氯霉素、呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃它酮、呋喃妥因6个项目。而目前常用的快速检测方法主要是酶联免疫吸附法(elisa)和胶体金免疫层析法。这两种检测方法均需要对样本进行提取净化后才可进行检测，其中孔雀石绿需要将其代谢物隐形孔雀石绿氧化成显性孔雀石绿后再进行检测；硝基呋喃四种药物的检测对象是其代谢物，免疫学方法需要将硝基呋喃代谢物通过化学手段衍生后才可测试；而氯霉素是提取后可以直接进行检测。
[0003]
其中elisa法需要复杂的加样、洗板、显色、反应终止等专业操作步骤，所需要的检测时间非常长。而胶体金免疫层析法灵敏度普遍在1-2ug/kg左右，其灵敏度达不到一些检测单位的要求(0.2-0.5ug/kg)，而且无法准确定量，而且检测成本高，检测时间长。


技术实现要素：

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为了解决上述背景技术中存在的问题，本实用新型提供一种水产品中抗菌药的快速定量检测试剂盒，其操作简便，检测快速灵敏，检测成本低。
[0005]
为了实现上述目的，本实用新型采用以下技术方案：
[0006]
本实用新型提供一种水产品中抗菌药的快速定量检测试剂盒，包括铝箔袋，所述铝箔袋内盛装有微孔反应器、一次性吸管和免疫层析检测卡，所述免疫层析检测卡包括底板、壳体、样品垫、检测反应膜片和吸水纸，所述底板上端面沿长度方向依次贴合设置有样品垫、检测反应膜片和吸水纸，所述壳体固定设置在所述底板上端面边缘处，所述壳体上与所述样品垫相对应的位置处开设有加样孔，所述壳体上与所述检测反应膜片相对应的位置处设有透明观察窗，所述检测反应膜片上沿样品垫至吸水纸方向依次设置有检测线和质控线，所述检测线上包被有待检测药物的人工抗原，所述质控线上包被有羊抗兔igg，所述微孔反应器内盛放有抗体荧光标记物，所述微孔反应器顶部开口处密封设置有软膜。
[0007]
进一步地改进在于，所述铝箔袋上设置有热封条，所述热封条将所述铝箔袋内部密封空间划分为用于盛放所述微孔反应器和所述一次性吸管的第一容纳腔和用于盛放所述免疫层析检测卡的第二容纳腔。通过设置，可将微孔反应器、一次性吸管和免疫层析检测卡集成于一个铝箔袋内，并将免疫层析检测卡与微孔反应器分开存放，保证了免疫层析检测卡干燥保存。
[0008]
进一步地改进在于，所述铝箔袋一端设有易撕缺口。通过易撕缺口可方便将铝箔袋撕开，取出微孔反应器、一次性吸管和免疫层析检测卡进行检测。
[0009]
进一步地改进在于，所述软膜与所述微孔反应器顶部开口边缘处热压密封连接。通过设置，避免存放时微孔反应器内盛放的液体抗体荧光标记物外流，同时在进行检测试
验操作时，通过移液器吸头等尖头物可直接戳破软膜，然后向其中加入样本，操作简单，方便。
[0010]
进一步地改进在于，所述样品垫的材质为玻璃纤维。
[0011]
进一步地改进在于，所述检测反应膜片的材质为硝酸纤维素膜。
[0012]
进一步地改进在于，所述加样孔为内侧壁倾斜设置的圆孔，所述加样孔的内径由外侧至内侧逐渐收缩。通过设置，使得一次性吸管量取的待检测液能够完全通过加样孔流入至样品垫，不会发生外溅或停留在加样孔外侧，确保取用的待检测液的用量及检测的准确性。
[0013]
与现有技术相比，本实用新型具有如下有益效果：
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本实用新型中将微孔反应器、一次性吸管和免疫层析检测卡集成于铝箔袋中，方便对其进行保存及运输，微孔反应器内盛放有抗体荧光标记物，开口处密封设置有软膜，既能避免存放时微孔反应器内盛放的液体抗体荧光标记物外流，同时在进行检测试验操作时，通过移液器吸头等尖头物可直接戳破软膜，然后向其中加入经过处理后的待检测样本，待检测样本中的抗菌药与荧光标记抗体预先反应结合，避免了待检测样本中的抗菌药与检测线上的人工抗原同时竞争有限的荧光标记抗体，保证了检测的灵敏度，而且操作简单，方便；使用一次性吸管将微孔反应器内经过反应后的溶液定量滴加至免疫层析检测卡上的加样孔内，运用免疫层析方法、配合荧光定量分析仪可作定量检测，具有操作简便，检测周期短，检测成本低，且检测灵敏度高。
附图说明
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下面结合附图与具体实施例对本实用新型作进一步详细说明。
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图1为本实用新型中铝箔袋的结构示意图；
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图2为本实用新型中微孔反应器的结构示意图；
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图3为本实用新型中免疫层析检测卡的结构示意图；
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图4为本实用新型中免疫层析检测卡的内部结构示意图；
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其中，具体附图标记为：铝箔袋1，热封条2，第一容纳腔3，第二容纳腔4，易撕缺口5，微孔反应器6，软膜7，免疫层析检测卡8，底板9，壳体10，加样孔11，透明观察窗12，样品垫13，检测反应膜片14，检测线15，质控线16，吸水纸17。
具体实施方式
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本实用新型的实施例公开了一种水产品中抗菌药的快速定量检测试剂盒，包括铝箔袋1，铝箔袋1内盛装有微孔反应器6、一次性吸管和免疫层析检测卡8，如图3和图4所示，免疫层析检测卡8包括底板9、壳体10、样品垫13、检测反应膜片14和吸水纸17，底板9上端面沿长度方向依次贴合设置有样品垫13、检测反应膜片14和吸水纸17，壳体10固定设置在底板9上端面边缘处，壳体10上与样品垫13相对应的位置处开设有加样孔11，壳体10上与检测反应膜片14相对应的位置处设有透明观察窗12，检测反应膜片14上沿样品垫13至吸水纸17方向依次设置有检测线15和质控线16，检测线15上包被有待检测药物的人工抗原，质控线16上包被有羊抗兔igg，其中，检测线15和质控线16上包被抗原的方法可参考现有技术中相应的包被技术，如图2所示，微孔反应器6内盛放有抗体荧光标记物，微孔反应器6顶部开口
处密封设置有软膜7，具体地，软膜7与微孔反应器6顶部开口边缘处热压密封连接，避免存放时微孔反应器6内盛放的液体抗体荧光标记物外流，同时在进行检测试验操作时，通过移液器吸头等尖头物可直接戳破软膜7，然后向其中加入样本，操作简单，方便。
[0022]
其中，如图1所示，铝箔袋1上设置有热封条2，热封条2将铝箔袋1内部密封空间划分为用于盛放微孔反应器6和一次性吸管的第一容纳腔3和用于盛放免疫层析检测卡8的第二容纳腔4，通过设置可将微孔反应器6、一次性吸管和免疫层析检测卡8集成于一个铝箔袋1内，并将免疫层析检测卡8与微孔反应器6分开存放，保证了免疫层析检测卡8干燥保存。
[0023]
其中，铝箔袋1一端设有易撕缺口5。通过易撕缺口5可方便将铝箔袋1撕开，取出微孔反应器6、一次性吸管和免疫层析检测卡8进行检测。
[0024]
其中，样品垫13的材质为玻璃纤维。
[0025]
其中，检测反应膜片14的材质为硝酸纤维素膜。
[0026]
其中，加样孔11为内侧壁倾斜设置的圆孔，加样孔11的内径由外侧至内侧逐渐收缩。通过设置，使得一次性吸管量取的待检测液能够完全通过加样孔11流入至样品垫13，不会发生外溅或停留在加样孔11外侧，确保取用的待检测液的用量及检测的准确性。
[0027]
使用时：
[0028]
本实施例中的快速定量检测试剂盒可分别对水产品中的6种抗菌药进行检测，检测项目主要是孔雀石的代谢物隐形孔雀石绿、氯霉素、硝基呋喃(呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林)代谢物。
[0029]
6种抗菌药测试用微孔反应器6的制备过程如下：采用荧光藻蓝蛋白作为荧光标记物，将荧光标记物分别与孔雀石绿鼠单抗、氯霉素鼠单抗、呋喃唑酮代谢物鼠单抗、呋喃它酮代谢物鼠单抗、呋喃妥因代谢物鼠单抗、呋喃西林代谢物鼠单抗、羊抗兔igg二抗进行共价偶联，制备出荧光标记抗体；将荧光标记的孔雀石绿鼠单抗与荧光标记的羊抗兔igg二抗按一定比例混合后得到抗体荧光标记物，取50ul抗体荧光标记物加入至微孔反应器6内，微孔反应器6开口处热压密封软膜7，形成孔雀石绿微孔反应器；其它五种抗菌药测试用微孔反应器6的制备方法采用同样操作，形成氯霉素微孔反应器、呋喃唑酮代谢物微孔反应器、呋喃它酮代谢物微孔反应器、呋喃妥因代谢物微孔反应器、呋喃西林代谢物微孔反应器。
[0030]
6种抗菌药测试用免疫层析检测卡8：孔雀石绿免疫层析检测卡中检测线15上包被孔雀石绿人工抗原，氯霉素免疫层析检测卡中检测线15上包被氯霉素人工抗原，呋喃唑酮免疫层析检测卡中检测线15上包被呋喃唑酮代谢物人工抗原，呋喃它酮免疫层析检测卡中检测线15上包被呋喃它酮代谢物人工抗原，呋喃妥因免疫层析检测卡中检测线15上包被呋喃妥因代谢物人工抗原，呋喃西林免疫层析检测卡中检测线15上包被呋喃西林代谢物人工抗原，其质控线16上均包被羊抗兔igg。
[0031]
制备6种抗菌药检测试剂盒：将孔雀石绿微孔反应器6、孔雀石绿免疫层析检测卡8和一次性吸管封装至铝箔袋1内形成孔雀石绿检测试剂盒；将氯霉素微孔反应器6、氯霉素免疫层析检测卡8和一次性吸管封装至铝箔袋1内形成氯霉素检测试剂盒；呋喃唑酮代谢物微孔反应器6、呋喃唑酮免疫层析检测卡8和一次性吸管封装至铝箔袋1内形成呋喃唑酮检测试剂盒；将呋喃它酮代谢物微孔反应器6、呋喃它酮免疫层析检测卡8和一次性吸管封装至铝箔袋1内形成呋喃它酮检测试剂盒；将呋喃妥因代谢物测试用微孔反应器6、呋喃妥因免疫层析检测卡8和一次性吸管封装至铝箔袋1内形成呋喃妥因检测试剂盒；将呋喃西林代
谢物测试用微孔反应器6、呋喃西林免疫层析检测卡8和一次性吸管封装至铝箔袋1内形成呋喃西林检测试剂盒。
[0032]
使用时：
[0033]
样本处理：向样本中加入孔雀石绿氧化剂和硝基呋喃代谢物衍生试剂反应，使得样本中孔雀石绿的代谢物隐形孔雀石绿氧化成显性孔雀石绿，硝基呋喃类四种药物通过化学手段衍生后生成相应的代谢物，得到待检测样本；
[0034]
样本检测方法：
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通过易撕缺口5将铝箔袋1撕开，将微孔反应器6、一次性吸管和免疫层析检测卡8取出，通过移液器吸头等尖头物可直接戳破微孔反应器6上的软膜7，然后向其中加入50ul经过处理后的待检测样本，待检测样本中的抗菌药与微孔反应器6中荧光标记抗体预先反应结合，充分混合反应后，取80ul混合液滴加至免疫层析检测卡8上的加样孔11内，由于层析作用，混合液从样品垫13一端流向吸水纸17一端，并在检测线15和质控线16上发生特异性免疫学反应，层析过程中样本中的药物与检测线15包被的待检测药物的人工抗原竞争结合荧光标记抗体，当样本中所含待测抗菌药越多，检测线15上检测的荧光信号越弱,荧光信号与样本中待测药物的浓度呈负相关关系，混合液滴加至相应的免疫层析检测卡8上反应15分钟后，将检测卡插入荧光免疫分析仪，仪器会根据试剂盒同一批次的标准曲线和读取到的荧光信号值，自动换算出该样品的6种抗菌药物定量测试结果。
[0036]
以上应用了具体个例对本实用新型进行阐述，只是用于帮助理解本实用新型，并不用以限制本实用新型。对于本实用新型所属技术领域的技术人员，依据本实用新型的思想，还可以做出若干简单推演、变形或替换。