一种多通道检测试纸盒及其应用

发明领域

本发明属于医疗技术领域，具体涉及一种多通道检测试纸盒及其应用。

背景技术：

目前，市面上的检测试纸盒是采用与抗体偶联的胶体金为指示标记的双抗体夹心一步法检测样品中的待检标志物。这一类检测试纸在检测时，当被检样品通过胶体金偶联的抗体时，形成待检标志物-抗体胶体金复合物，复合物继续扩散，到达检测线(包被有待检标志物相对应的单克隆抗体)时，形成双抗体夹心胶体金复合物，在检测线处呈现色带，过量的胶体金抗体继续爬行，和质控线抗体(用于检测抗体是否失活)形成胶体金免疫复合物，呈现色带。但由于检测灵敏度的限制，只有在样品中待检标志物达到一定含量时，才可以得到较为准确的检测结果。如果样品中含有的待检标志物较少，那么就不能得到准确的检测结果。

技术实现要素：

针对现有技术的不足，本发明提供了一种多通道检测试纸盒及其应用，解决了样品中含有少量标志物时检测结果不准确、检测不出、仅能检测一种标志物的技术问题。

本发明的技术方案具体是这样实现的：

一种多通道检测试纸盒，包括外壳底座和放置试纸条的存储盒，所述存储盒包括试纸卡座和试纸卡座上盖，所述存储盒设置在外壳底座上，所述的试纸卡座滑动设置在外壳底座上，所述试纸卡座上盖设置有滴样口，所述试纸条末端设置有至少一个分支，试纸条末端伸出存储盒，试纸条末端伸出存储盒的部分上设置有吸水纸固定架a，吸水纸固定架a的底部粘贴有吸水纸；

所述外壳底座上设置有孔洞和至少一个微池，所述孔洞中设置有可向下移动的按压杆，按压杆上设置有与微池一一对应吸水纸固定架b，所述吸水纸固定架b底部设置有部分粘贴的吸水纸b，吸水纸b与吸水纸固定架b未粘贴的部分位于相应的微池的上方。

所述吸水纸固定架a的底部粘贴有吸水纸，用以吸收滴加样品后未与质控线/检测线结合的银纳米颗粒-抗体，同时促进样品和待检标志物-抗体-银纳米颗粒复合物向前流动的作用。

所述按压杆和吸水纸固定架b组成按压装置。将含有试纸条的存储盒沿微池方向推动，将试纸条末端分支移动至吸水纸固定架b底部部分粘贴的吸水纸b的下方、相应微池的上方，所述试纸条末端分支与上方的吸水纸固定架b底部部分粘贴的吸水纸b、下方的相应微池均有一定的距离，这样设置是为了避免含有试纸条的存储盒推动时，由于摩擦而对试纸条造成损坏，除此之外，通过按压也是为了让试纸条末端与吸水纸更加紧密。

所述吸水纸固定架b底部设置有部分粘贴的吸水纸b，吸水纸b与吸水纸固定架b未粘贴的部分位于相应的微池的上方，这样按下按压杆，使得吸水纸固定架b底部部分粘贴的吸水纸b与试纸条的末端贴合，当吸水纸浸湿的情况下，未粘贴部分的吸水纸由于重力的作用而自然弯曲，将液体引流至微池。

所述试纸卡座上设置有至少一个卡槽b，所述卡槽b与所述试纸条的分支一一卡合连接。其目的是为了更好的固定试纸条。

所述外壳底座的两侧均设置有挡板，两侧挡板上设置有卡槽a，所述卡槽a卡合连接吸水纸固定架a。所述吸水纸固定架a底部粘贴有吸水纸，与所述试纸条末端伸出存储盒的部分相贴合，之所以这样设置，是因为试纸条末端伸出存储盒的部分含有检测线或/和质检线，吸水纸固定架a底部粘贴的吸水纸将多余液体除去后，需要移除吸水纸固定架a，这样才能推动存储盒。

所述外壳底座上设置有滑轨，所述试纸卡座底部设置有凹槽a，凹槽a滑动卡接在滑轨上。这样设置可以保证存储盒内试纸条的稳定，使得试纸条末端分支正好移动至吸水纸固定架b底部部分粘贴的吸水纸b的下方、相应微池的上方。

所述试纸卡座上盖设置有推动杆，以方便推动存储盒，带动存储盒内的试纸条往微池方向移动。

所述孔洞内设置有柔性限位夹，按压杆设置在柔性限位夹内，柔性限位夹上设有凸起，按压杆上设置多个上下排列的且与所述凸起相匹配的凹槽b，在按压杆在向下移动过程中，所述凸起具有进入任一凹槽b的状态。

所述多通道检测试纸盒的应用，是在检测癌症、病毒方面的应用。

所述多通道检测试纸盒的具体应用方法如下：

在滴样口滴加样品后，样品经过试纸条中含银纳米颗粒-抗体的银标垫，随扩散作用将银纳米颗粒-抗体带到试纸条的末端，吸水纸固定架a吸湿后，将吸水纸固定架a从卡槽a内移除；

往微池方向推动存储盒，带动存储盒内的试纸条移动，将试纸条的末端移动至吸水纸固定架b底部部分粘贴的吸水纸b的下方、相应微池的上方，按下按压杆，使得吸水纸固定架b底部部分粘贴的吸水纸b与试纸条的末端贴合；

在滴样口滴加双氧水，吸水纸固定架b底部未粘贴部分的吸水纸b变湿，由于重力作用弯曲进入微池，将液体引流至微池，然后在微池里滴加胶体金溶液，观察颜色有无变化。

所述微池包括一个质控池和至少一个检测池，所述试纸条末端设置的分支包括一个带有质控线的质控端和至少一个带有检测线的检测端，所述按压杆上设置有至少两个吸水纸固定架b，所述吸水纸固定架b、试纸条末端设置的分支和微池在检测时从上到下一一对应。

若样品中含有待检标志物，则检测池中溶液颜色由红色变为蓝色；若样品中不含有待检标志物，则检测池中溶液颜色无变化为红色；若试纸条失效，则质控池中溶液颜色无变化为红色；若试纸条有效，则质控池中溶液颜色由红色变为蓝色。

所述试纸条包括样品垫、银标垫、nc膜和塑料胶板，所述试纸条末端至少一个分支，当有一个分支时，所述试纸条末端为带有检测线的检测端；优选地，所述试纸条末端设置有至少两个分支，所述至少两个分支包括一个带有质控线的质控端和至少一个带有检测线的检测端。所述带有检测线的检测端用来检测样品中是否含有待检标志物，所述带有质控线的质控端用来检测试纸条中是否含有银纳米颗粒-抗体或者银纳米颗粒-抗体是否失效。这样在检测待检标志物的同时可以检测试纸条是否失效，避免检测和质控分别进行，节省了检测时间。当试纸条末端设置有两个以上分支时，可以在质检的同时检测多种标志物。

所述待检标志物可以是用于癌症检测的癌症肿瘤标志物，用于病毒检测的病毒本身、病毒所携带的抗原或是人体在感染病毒后产生的抗体。即：所述检测线上可以包被待检标志物相对应的单克隆抗体，但当检测病毒时，实质上是通过检测抗病毒的抗体得方式来进行检测，因此在检测病毒时，检测线上除了包被抗体(抗病毒抗体的抗体)以外，也可以包被所检测抗体相对应的抗原。另外，病毒本身也可以作为抗原，与银标垫中的抗体和检测线上的抗体结合，形成双抗体夹心结构。关于质控线，如果银纳米颗粒—抗体复合物上使用的是鼠抗，则质控线上使用羊抗鼠抗体；如果银纳米颗粒—抗体复合物上使用的是兔抗，则质控线上使用羊抗兔抗体。

本发明所述多通道检测试纸盒及其应用，能够对样品的多种标志物同时检测，同时也能对试纸条是否有效进行检测，并且能够在样品中待测标志物含量较少的情况下进行准确检测，检测灵敏度极高，易于在医务工作或居家检测中推广使用。

附图说明

图1是所述多通道检测试纸盒的爆炸图；

图2是未使用时所述多通道检测试纸盒的结构示意图；

图3是检测和质控时所述检测试纸盒的使用状态图；

图4是所述试纸条的结构示意图；

图5是所述试纸卡座的结构示意图；

图6是所述试纸卡座上盖的结构示意图；

图7是所述外壳底座的结构示意图；

图8是试纸条未使用时所述按压装置的结构示意图；

图9是试纸条使用浸湿后所述按压装置的结构示意图；

图10是所述孔洞的局部放大图。

图中1是外壳底座，2是试纸条，3是试纸卡座，4是试纸卡座上盖，5是滴样口，6是吸水纸固定架a，7是孔洞，8是微池，9是按压杆，10是吸水纸固定架b，11是吸水纸b，12是卡槽b，13是挡板，14是卡槽a，15是滑轨，16是凹槽a，17是柔性限位夹，18是凸起，19是凹槽b，20是银标垫，21是样品垫，22是nc膜，23是塑料胶板，24是推动杆。

具体实施方式

本发明所述产品除特别说明外，均为市售产品。

1.所述末端炔基化修饰的金纳米颗粒溶液得制备

(1)金纳米颗粒的制备

在100ml圆底烧瓶中，将50ml0.01wt％的氯金酸加热至滚沸，剧烈搅拌回流，加入5ml38.8mmol/l柠檬酸钠，溶液颜色由淡黄色变为红色，继续加热15分钟，搅拌15分钟，将得到的溶液冷却至室温，用紫外-可见分光光度计进行表征，将合成的金纳米颗粒以4℃储存在离心管中，备用。

(2)5-(1,2-dithiolan-3-yl)-n-(prop-2-ynyl)pentanamide(cas号：1304779-08-5)的合成

在二氯甲烷中丙炔胺(100μl，1.56mmol)的冰水溶液中，滴加n-硫氧基琥珀酰亚胺(0.5g，1.56mmol)在10ml二氯甲烷中，将混合物在室温下搅拌，然后用30mlch2cl2和饱和na2co3溶液稀释，有机层用饱和盐水洗涤，用无水na2so4干燥，溶剂真空蒸发，残渣用硅胶柱层析纯化，得到5-(1,2-dithiolan-3-yl)-n-(prop-2-ynyl)pentanamide(cas号：1304779-08-5)，其结构式如下：

(3)所述末端炔基化修饰的金纳米颗粒溶液的制备

将200μl的5-(1,2-dithiolan-3-yl)-n-(prop-2-ynyl)pentanamide溶液(溶解于乙醇中)滴加到10ml金纳米颗粒溶液中，用氢氧化钠将溶液的ph值调至9，将得到的溶液在室温下搅拌，然后9000rpm离心20分钟，去除多余的化合物，将得到的炔基功能化金纳米颗粒用水洗涤三次，再分散于蒸馏水中，备用。

2.银标垫的制备

(1)银纳米颗粒的制备

18mgagno3溶于100毫升蒸馏水中，加热至沸腾，剧烈搅拌，在沸腾溶液中加入1％柠檬酸钠2ml，继续加热30min；冷却至室温后，得到银纳米颗粒，遮光瓶中保存备用。

(2)将银纳米颗粒结合到抗体上

将步骤(1)得到的银纳米颗粒离心浓缩，分散于10mmol/l(或更低)的pbs(ph7.4，避免氯离子)中，快速加入1ml抗体；将混合溶液用500μl1％bsa振荡12h，再用500μl1％bsa封闭12h；然后离心，去除多余的抗体和银纳米颗粒，得到银纳米颗粒-抗体。

(3)银标垫的制备

将步骤(2)制备的银纳米颗粒-抗体喷射于玻璃纤维上，制成银标垫。

3.质控线和检测线按照现有技术采用划膜机分别划在所述试纸条末端的分支上。

实施例1

一种多通道检测试纸盒，包括外壳底座1和放置试纸条2的存储盒，所述存储盒包括试纸卡座3和试纸卡座上盖4，所述存储盒设置在外壳底座1上，所述的试纸卡座3滑动设置在外壳底座1上，所述试纸卡座上盖4设置有滴样口5，所述试纸条2末端设置有六个分支，试纸条2末端伸出存储盒，试纸条2末端伸出存储盒的部分上设置有吸水纸固定架a6，吸水纸固定架a6的底部粘贴有吸水纸；

所述外壳底座1上设置有孔洞7和六个微池8，所述孔洞7中设置有可向下移动的按压杆9，按压杆9上设置有与六个微池8一一对应吸水纸固定架b10，所述吸水纸固定架b10底部设置有部分粘贴的吸水纸b11，吸水纸b11与吸水纸固定架b10未粘贴的部分位于相应的微池8的上方。

所述的多通道检测试纸盒，所述试纸卡座3上设置有六个卡槽b12，所述卡槽b12与所述试纸条2的分支一一卡合连接。

所述外壳底座1的两侧均设置有挡板13，两侧挡板13上设置有卡槽a14，所述卡槽a14卡合连接吸水纸固定架a6。

所述外壳底座1上设置有滑轨15，所述试纸卡座3底部设置有凹槽a16，凹槽a16滑动卡接在滑轨15上。

所述试纸卡座上盖4设置有推动杆24。

所述孔洞7内设置有柔性限位夹17，按压杆9设置在柔性限位夹17内，柔性限位夹17上设有凸起18，按压杆9上设置多个上下排列的且与所述凸起18相匹配的凹槽b19，在按压杆9在向下移动过程中，所述凸起18具有进入任一凹槽b19的状态。

所述多通道检测试纸盒的应用方法如下：

在滴样口5滴加样品后，样品经过试纸条2中含银纳米颗粒-抗体的银标垫20，随扩散作用将银纳米颗粒-抗体带到试纸条2的末端，吸水纸固定架a6吸湿后，将吸水纸固定架a6从卡槽a14内移除；

往微池8方向推动存储盒，带动存储盒内的试纸条2移动，将试纸条2的末端移动至吸水纸固定架b10底部部分粘贴的吸水纸b11的下方、相应微池8的上方，按下按压杆9，使得吸水纸固定架b10底部部分粘贴的吸水纸b11与试纸条2的末端贴合；

在滴样口5滴加双氧水，吸水纸固定架b10底部未粘贴部分的吸水纸b11变湿，由于重力作用弯曲进入微池8，将液体引流至微池8，然后在微池8里滴加胶体金溶液，观察颜色有无变化。

所述微池8包括一个质控池和五个检测池，所述试纸条2末端设置的分支包括一个带有质控线的质控端和五个带有检测线的检测端，所述按压杆9上设置有六个吸水纸固定架b10，所述六个吸水纸固定架b10、试纸条2末端设置的六个分支、一个质控池和五个检测池在检测时从上到下一一对应；

若样品中含有待检标志物，则检测池中溶液颜色由红色变为蓝色；若样品中不含有待检标志物，则检测池中溶液颜色无变化为红色；若试纸条失效，则质控池中溶液颜色无变化为红色；若试纸条有效，则质控池中溶液颜色由红色变为蓝色。

将所述多通道检测试纸盒用来检测癌症，所述试纸条2末端设置的六个分支，一个是带有质控线的质控端和五个带有检测线的检测端，分别用来质控、同时检测乳腺癌(肿瘤标志物：血清癌抗原15-3，检测线处抗体：抗血清癌抗原15-3抗体)、肺癌(肿瘤标志物：细胞角蛋白19片段抗原，检测线处抗体：抗细胞角蛋白19片段抗原抗体)、结直肠癌(肿瘤标志物：ca242，检测线处抗体：抗ca242抗体)、前列腺癌(肿瘤标志物：前列腺酸性磷酸酶，检测线处抗体：抗前列腺酸性磷酸酶抗体)、胰腺癌(肿瘤标志物：ca199，检测线处抗体：抗ca199抗体)。银标垫上是银纳米颗粒—抗体复合物，这里的抗体包括抗血清癌抗原15-3抗体、抗细胞角蛋白19片段抗原抗体、抗ca242抗体、抗前列腺酸性磷酸酶抗体、抗ca199抗体。

实施例2

一种多通道检测试纸盒，包括外壳底座1和放置试纸条2的存储盒，所述存储盒包括试纸卡座3和试纸卡座上盖4，所述存储盒设置在外壳底座1上，所述的试纸卡座3滑动设置在外壳底座1上，所述试纸卡座上盖4设置有滴样口5，所述试纸条2末端设置有四个分支，试纸条2末端伸出存储盒，试纸条2末端伸出存储盒的部分上设置有吸水纸固定架a6，吸水纸固定架a6的底部粘贴有吸水纸；

所述外壳底座1上设置有孔洞7和四个微池8，所述孔洞7中设置有可向下移动的按压杆9，按压杆9上设置有与四个微池8一一对应吸水纸固定架b10，所述吸水纸固定架b10底部设置有部分粘贴的吸水纸b11，吸水纸b11与吸水纸固定架b10未粘贴的部分位于相应的微池8的上方。

所述的多通道检测试纸盒，所述试纸卡座3上设置有四个卡槽b12，所述卡槽b12与所述试纸条2的分支一一卡合连接。

所述外壳底座1的两侧均设置有挡板13，两侧挡板13上设置有卡槽a14，所述卡槽a14卡合连接吸水纸固定架a6。

所述外壳底座1上设置有滑轨15，所述试纸卡座3底部设置有凹槽a16，凹槽a16滑动卡接在滑轨15上。

所述试纸卡座上盖4设置有推动杆24。

所述孔洞7内设置有柔性限位夹17，按压杆9设置在柔性限位夹17内，柔性限位夹17上设有凸起18，按压杆9上设置多个上下排列的且与所述凸起18相匹配的凹槽b19，在按压杆9在向下移动过程中，所述凸起18具有进入任一凹槽b19的状态。

所述多通道检测试纸盒的应用方法如下：

在滴样口5滴加样品后，样品经过试纸条2中含银纳米颗粒-抗体的银标垫20，随扩散作用将银纳米颗粒-抗体带到试纸条2的末端，吸水纸固定架a6吸湿后，将吸水纸固定架a6从卡槽a14内移除；

往微池8方向推动存储盒，带动存储盒内的试纸条2移动，将试纸条2的末端移动至吸水纸固定架b10底部部分粘贴的吸水纸b11的下方、相应微池8的上方，按下按压杆9，使得吸水纸固定架b10底部部分粘贴的吸水纸b11与试纸条2的末端贴合；

在滴样口5滴加双氧水，吸水纸固定架b10底部未粘贴部分的吸水纸b11变湿，由于重力作用弯曲进入微池8，将液体引流至微池8，然后在微池8里滴加胶体金溶液，观察颜色有无变化。

所述微池8包括一个质控池和三个检测池，所述试纸条2末端设置的分支包括一个带有质控线的质控端和三个带有检测线的检测端，所述按压杆9上设置有四个吸水纸固定架b10，所述四个吸水纸固定架b10、试纸条2末端设置的四个分支、一个质控池和三个检测池在检测时从上到下一一对应；

若样品中含有待检标志物，则检测池中溶液颜色由红色变为蓝色；若样品中不含有待检标志物，则检测池中溶液颜色无变化为红色；若试纸条失效，则质控池中溶液颜色无变化为红色；若试纸条有效，则质控池中溶液颜色由红色变为蓝色。

将所述多通道检测试纸盒用来检测病毒，所述试纸条2末端设置的四个分支，一个是带有质控线的质控端和三个带有检测线的检测端，分别用来质控、同时检测乙型肝炎病毒(标志物：抗hbsag抗体，检测线处抗原：hbsag)、诺如病毒(标志物：抗vp1蛋白抗体，检测线处抗原：vp1蛋白)、新冠病毒(标志物：抗np蛋白抗体，检测线处抗原：np蛋白)。银标垫上是银纳米颗粒—抗体复合物，这里的抗体包括抗hbsag抗体的二抗、抗vp1蛋白抗体的二抗、抗np蛋白抗体的二抗。

试验例

将所述检测试纸盒用来检测癌症、病毒，分别取含有上述两种待检标志物的样品，经检测，试验结果如下：