一种细胞固定液及细胞醛化方法与流程

本发明属于尿液有形成分分析领域，尤其涉及一种细胞固定液及细胞醛化方法。

背景技术：

1、尿有形成分分析是对尿有形成分进行检查，是临床体检中最常见的“三大常规”项目之一，其通过识别尿液中细胞、结晶、管型、细菌、寄生虫等各种病理成分，能够辅助泌尿系统疾病的诊断、定位、鉴别诊断及判断预后。

2、尿液有形成分检测中出现红细胞和白细胞是常见的临床表现，多由泌尿系统疾病引起，也可是全身或泌尿系统邻近器官病变所至引起。因此，尿液有形成分红细胞和白细胞的检测，对疾病的诊断及疗效的观察具有重要的临床意义。在尿液有形成分检测分析过程中，尿液有形成分红细胞和白细胞质控物对检测系统的质量控制和检测结果的准确性，则起着至关重要的作用。其中出现红细胞是常见的临床表现，常见于急性肾小球肾炎、狼疮性肾炎、肾结石、肾结核、尿路感染、血友病等。出现白细胞多由泌尿系统疾病引起，也可是全身或泌尿系统邻近器官病变所至引起，尿有形成分分析多依靠显微镜或专用设备进行观察，因此在尿有形成分分析时细胞的校准液、质控液、聚焦液对仪器的质量控制显得异常重要，而这些都需要人细胞模拟物进行配制。

3、目前市场上尿有形成分用的红细胞模拟物和白细胞模拟物相对较少，有的动物细胞或非细胞物质与人细胞形态、大小差异较大，易造成仪器分类不准确；有的用临床样本，保存时间较短、成分复杂、容易造成批间差。现有动物细胞模拟物的制备方法大多较为复杂，且存在细胞形态不均一、保存时间短等现象，特别是白细胞含量相对于红细胞更少，因此，在做白细胞模拟物之前需要提纯白细胞，更加增加了操作的难度，因此发明一种制备简单、稳定性好、细胞形态均一的细胞模拟物非常重要。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种细胞固定液及细胞醛化方法，本发明所述的细胞固定液成分简单，细胞醛化方法简单，利用简单的成分和操作方法实现了稳定的细胞固定，制造的细胞模拟物细胞形态好、批间差小，可以被广泛的应用。

2、为达上述目的，本发明采用如下的技术方案：

3、一种细胞固定液，所述细胞固定液为10-200mm的缓冲液与0.5％-10％的醛类物质的混合物，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或nacl缓冲，所述醛类物质选自甲醛、乙醛、戊二醛或丙酮醛。

4、优选的，所述细胞固定液为10-200mm的柠檬酸钠缓冲液和0.5％-10％戊二醛的混合物。

5、另一方面，本发明提供了一种尿有形成分分析用试剂，所述试剂包含上述细胞固定液。

6、优选的，所述细胞固定液渗透浓度为200-400mm。

7、可选的，所述尿有形成分分析用试剂，还包括细胞抗凝液、细胞洗涤液和细胞保存液，所述细胞抗凝液选自0.1％-20％的柠檬酸钠、肝素钠、草酸钠、edta-2na、edta-2k或edta-3k，所述细胞洗涤液和细胞保存液选自10-200mm的阿氏液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、nacl缓冲液或tris缓冲液。

8、可选的，所述细胞洗涤液为10-200mm的缓冲液、1-5mm的edta和0.01％-5％的表面活性剂，所述表面活性剂选自吐温20、吐温40、吐温80或泊洛沙姆，所述缓冲液选自：阿氏液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、nacl缓冲液或tris缓冲液，更优选的，所述表面活性剂选自0.1-1％的吐温20。

9、优选的，所述细胞洗涤液和细胞保存液渗透浓度为200-400mm。

10、优选的，所述缓冲液的ph＝7.0-7.4。

11、优选的，所述细胞抗凝液为1-5％的柠檬酸钠缓冲液，所述细胞洗涤液包括10-50mm的磷酸盐缓冲液，所述细胞保存液为阿氏液。

12、可选的，所述尿有形成分分析用试剂，还包括白细胞提取液，所述白细胞提取液为1-5％的明胶溶液。

13、常规白细胞提取不含有明胶初提的过程，通常直接静置或者离心，白细胞会在血清和血浆的中间层，然后把中间层吸取出来加裂解液对红细胞进行裂解，裂解完离心沉淀就是白细胞。但一般要重复2～3次，白细胞的纯度才比较好。

14、本发明所述明胶溶液为粘度为25泊以上明胶溶于生理盐水后经沸水浴加热溶解制成。

15、可选的，所述尿有形成分分析用试剂，还包括红细胞裂解液，所述红细胞裂解液包括氯化铵、碳酸氢钾。

16、优选的的所述氯化铵浓度为100-200mm，所述碳酸氢钾浓度为5-50mm。

17、所述细胞为红细胞或白细胞，所述细胞来源选自猪血、兔血、狗血、鸡血、鸭血、牛血、鼠血或猴血，优选兔血和牛血。

18、另一方面，本发明提供了一种红细胞醛化方法，所述方法包括以下步骤：

19、(1)混合样本与所述细胞抗凝液，离心，取底层红细胞；

20、(2)将步骤(1)中取得的红细胞中加入所述细胞固定液，常温静置；

21、(3)再加入所述细胞固定液在步骤(2)中静置后的红细胞中，并旋转固定。

22、(4)将步骤(3)中固定后的红细胞，离心，弃上清，用细胞洗涤液离心清洗；

23、(5)清洗完成后的红细胞转移到细胞保存液中保存。

24、另一方面，本发明提供一种白细胞醛化的方法，所述方法包括以下步骤：

25、(1)混合样本与所述细胞抗凝液并加入所述白细胞提取液后，静置取上清；

26、(2)将步骤(1)中上清离心，加入所述细胞洗涤液，进行清洗，取沉淀；

27、(3)取步骤(2)中沉淀，加入红细胞裂解液，进行红细胞裂解，取沉淀；

28、(4)加入所述细胞洗涤液于步骤(3)中沉淀，离心进行清洗，取沉淀并重悬于细胞洗涤液中，制成白细胞悬浮液，静置；

29、(5)在步骤(4)静置后的白细胞悬浮液中加入所述细胞固定液，旋转固定；

30、(6)加入所述细胞洗涤液在步骤(5)中固定后的白细胞悬液中，离心清洗，清洗完成后加入细胞保存液中保存。

31、有益效果：

32、与现有技术相比，本发明的细胞固定液成分简单，利用合适的缓冲液和醛类物质巧妙的配合，不仅能够实现细胞简单且稳定的固定，还利用一种细胞固定液实现对红细胞和白细胞的固定，大大的简化了试剂配方和操作过程。

33、本发明同时还公开了醛化细胞的工艺，实现了红细胞和白细胞的简单高效醛化，醛化细胞制备的时间短、物料简单易得、成本低、稳定性好、细胞形态均一。

34、白细胞醛化易于操作、细胞纯度高、对细胞损伤少，白细胞利用静置处理，明胶初提，避免多次裂解，细胞损伤较少，物料简单易得、成本低、稳定性好、细胞形态清晰、易于仪器识别。

35、综上，本发明的细胞固定液与工艺的搭配，实现了优良的细胞醛化，为尿有形成分分析提供了便利。

技术特征：

1.一种细胞固定液，所述细胞固定液为10-200mm的缓冲液与0.5％-10％的醛类物质的混合物，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或nacl缓冲，所述醛类物质选自甲醛、乙醛、戊二醛或丙酮醛。

2.如权利要求1所述的细胞固定液，其特征在于，所述细胞固定液为10-200mm的柠檬酸钠缓冲液和0.5％-10％戊二醛的混合物，优选的，所述细胞固定液的渗透浓度为200-400mmol/l。

3.如权利要求1或2所述的细胞固定液，其特征在于，所述细胞固定液固定的细胞为红细胞或白细胞，所述细胞来源于猪血、兔血、狗血、鸡血、鸭血、牛血、鼠血或猴血，优选兔血和牛血。

4.一种尿有形成分分析用试剂，所述试剂包含权利要求1或2所述的细胞固定液。

5.如权利要求4所述的尿有形成分分析用试剂，其特征在于，所述尿有形成分分析用试剂还包括细胞抗凝液、细胞洗涤液和细胞保存液，所述细胞抗凝液选自0.1％-20％的柠檬酸钠、肝素钠、草酸钠、edta-2na、edta-2k或edta-3k，所述细胞洗涤液和细胞保存液选自10-200mm的阿氏液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、nacl缓冲液或tris缓冲液，优选的，所述细胞洗涤液还包括1-5mm的edta和0.01％-5％的表面活性剂，所述表面活性剂选自吐温20、吐温40、吐温80或泊洛沙姆，更优选的，所述表面活性剂选自0.1-1％的吐温20。

6.如权利要求5所述的尿有形成分分析用试剂，其特征在于，所述细胞抗凝液为1-5％的柠檬酸钠缓冲液，所述细胞洗涤液包括10-50mm的磷酸盐缓冲液，所述细胞保存液为阿氏液。

7.如权利要求4-6任意一项所述的尿有形成分分析用试剂，其特征在于，还包括白细胞提取液，所述白细胞提取液为1-5％的明胶溶液。

8.如权利要求7所述的尿有形成分分析用试剂，其特征在于，还包括红细胞裂解液，所述红细胞裂解液包括100-200mm氯化铵、5-50mm碳酸氢钾。

9.一种红细胞醛化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

10.一种白细胞醛化的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

技术总结
本发明属于尿液有形成分分析领域，具体公开了一种细胞固定液及细胞醛化方法，本发明公开的细胞固定液成分简单，利用合适的缓冲液和醛类物质巧妙的配合，实现了红细胞和白细胞的简单高效固定。同时还公开了醛化细胞的工艺，实现了红细胞和白细胞的简单高效醛化，醛化细胞制备时间短、物料简单易得、成本低、稳定性好、细胞形态均一，对于尿有形分析具有重大意义。

技术研发人员：赵威,张洋洋
受保护的技术使用者：重庆艾生斯生物工程有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/4