技术特征：
1.骨髓涂片小巨核细胞染色试剂盒，其特征在于，包括：一抗试剂、二抗试剂和染色剂；所述一抗试剂包括抗体和抗体稀释剂，所述抗体选自cd41单克隆抗体、cd42b单克隆抗体或cd61单克隆抗体中至少一种；所述二抗试剂包括碱性磷酸酶标记的二抗聚合物；所述染色剂包括快红染色试剂和苏木素复染试剂。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体稀释剂包含水、tris-hcl、牛血清白蛋白、氯化钠、tween-20、果绿色素和proclin 950。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体稀释剂由水和6g/l tris-hcl、15g/l牛血清白蛋白、8.5g/l氯化钠、0.1vol％的tween-20、0.01wt％的果绿色素和0.15wt％proclin 950组成，所述抗体稀释剂的ph为7.60
±
0.05。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述二抗试剂包含水、碱性磷酸酶标记的二抗聚合物、tris、牛血清白蛋白、氯化钠、tween-20、proclin 950、酶保护剂和甘油，所述酶保护剂为金属离子，所述酶保护剂包括锌离子、镁离子、钙离子中的一种或多种混合物。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述二抗试剂由水和8～12μg/ml碱性磷酸酶标记的抗兔聚合物、6g/l tris、10g/l牛血清白蛋白、8.5g/l氯化钠、3g/l tween-20、0.1wt％的proclin 950、0.1～1mm酶保护剂和40vol％的甘油，所述酶保护剂为金属离子，所述酶保护剂包括锌离子、镁离子、钙离子中的一种或多种混合物，所述二抗试剂的ph为7.20
±
0.05。6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述快红染色试剂包括：快红显色剂、快红活化剂和快红缓冲液；所述快红显色剂包括芳伯胺类化合物和无机强酸，所述芳伯胺类化合物为碱性品红、新品红、3-氨基-4-甲氧基苯甲酰胺中的任意一种，所述无机强酸为盐酸、氢溴酸、氟硼酸、硫酸、硝酸中的任意一种；所述快红活化剂为亚硝酸钠溶液；所述快红缓冲液包括萘酚磷酸盐、tris、氯化钠、mgcl2·
6h2o、盐酸左旋咪唑、tween-20、proclin 950，所述萘酚磷酸盐为萘酚as-tr磷酸酯、萘酚as-tr磷酸二钠盐、萘酚as-bi磷酸盐二钠盐水合物中的任意一种。7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述快红染色试剂包括：快红显色剂、快红活化剂和快红缓冲液；所述快红显色剂包括20.0～40.0g/l芳伯胺类化合物和0.5～1m无机强酸，所述芳伯胺类化合物为碱性品红、新品红、3-氨基-4-甲氧基苯甲酰胺中的任意一种，所述无机强酸为盐酸、氢溴酸、氟硼酸、硫酸、硝酸中的任意一种；所述快红活化剂包括8.28～16.56g/l亚硝酸钠溶液；所述快红缓冲液包括2～3m萘酚磷酸盐、12.1g/l tris、5.85g/l氯化钠、2.03g/l mgcl2·
6h2o、0.24g/l盐酸左旋咪唑、0.3vol％的tween-20、0.5wt％的proclin 950，所述萘酚磷酸盐为萘酚as-tr磷酸酯、萘酚as-tr磷酸二钠盐、萘酚as-bi磷酸盐二钠盐水合物中的任意一种；所述快红染色试剂中，所述快红显色剂、快红活化剂和快红缓冲液的体积比为1:1:20。8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述苏木素复染试剂包括5g/l苏木精、
50g/l硫酸铝钾、0.5g/l碘酸钠和5vol％的甘油。9.骨髓涂片小巨核细胞染色方法，其特征在于，采用权利要求1～8中任一项所述的试剂盒对细胞进行染色。10.如权利要求9所述的染色方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、制备骨髓血涂片并固定；步骤2、采用所述一抗试剂孵育；步骤3、采用所述二抗试剂孵育；步骤4、采用所述快红染色试剂染色；步骤5、采用所述苏木素复染试剂复染。
技术总结
本发明涉及骨髓涂片染色技术领域，具体涉及骨髓涂片小巨核细胞染色试剂盒、染色方法及应用。本发明提供的骨髓涂片小巨核细胞染色试剂盒包括一抗试剂、二抗试剂和染色剂，一抗试剂中包括CD41单克隆抗体、CD42b单克隆抗体或CD61单克隆抗体中至少一种，二抗试剂包括碱性磷酸酶标记的二抗聚合物，染色剂包括快红染色试剂和苏木素复染试剂。采用该试剂盒对骨髓细胞进行染色，染色结果表明，本发明提供的试剂盒染色特异性强，信号表达准确且清晰，无背景非特异染色问题，染色方法方便快捷。染色方法方便快捷。
技术研发人员：邢雅南 李三华 米贯勋 张林姿 牛银银 齐华
受保护的技术使用者：河南赛诺特生物技术有限公司
技术研发日：2022.10.17
技术公布日：2023/1/17