荧光生物传感器和用于检测细胞信号转导事件的方法

文档序号:35707190发布日期:2023-10-12 08:02阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种遗传编码的荧光指示剂(gefi),包含:

2.根据权利要求1所述的gefi,其中,与所述cpfp结合的所述抑制性分子是纳米抗体。

3.根据权利要求2所述的gefi,其中,所述纳米抗体包括nb39。

4.根据前述权利要求中任一项所述的gefi,其中,所述抑制性分子通过接头与所述cpfp结合。

5.根据权利要求4所述的gefi,其中,所述接头包括lkedi(seq id no:4)。

6.根据前述权利要求中任一项所述的gefi,其中,所述cpfp与蛋白质结合。

7.根据权利要求6所述的gefi,其中,所述cpfp与g蛋白偶联受体(gpcr)结合。

8.根据权利要求7所述的gefi,其中,所述cpfp与所述gpcr的c末端结构域结合。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的gefi,其中,所述gpcr是阿片受体。

10.根据权利要求9所述的gefi,其中,所述阿片受体是μ-阿片受体、κ-阿片受体或嵌合阿片受体。

11.根据权利要求10所述的gefi,其中,所述阿片受体是包括seq id no:7、seq id no:11或seq id no:12的氨基酸序列的κ-阿片受体。

12.根据权利要求10所述的gefi,其中,所述阿片受体是包括seq id no:8的氨基酸序列的嵌合阿片受体。

13.根据权利要求6-12中任一项所述的gefi,其中,所述cpfp通过接头与所述蛋白质结合。

14.根据权利要求13所述的gefi,其中,所述接头包括fplkmrmerqgap(seq id no:5)或gap。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的gefi,其中,所述gefi包括与seqid no:17具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

16.根据权利要求15所述的gefi,其中,所述gefi包括seq id no:17的氨基酸序列。

17.根据权利要求1-14中任一项所述的gefi,其中,所述gefi包括与seqid no:21具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

18.根据权利要求17所述的gefi,其中,所述gefi包括seq id no:21的氨基酸序列。

19.根据权利要求1-14中任一项所述的gefi,其中,所述gefi包括与seqid no:18具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

20.根据权利要求19所述的gefi,其中,所述gefi包括seq id no:18的氨基酸序列。

21.根据权利要求1-14中任一项所述的gefi,其中,所述gefi包括与seqid no:27具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

22.根据权利要求21所述的gefi,其中,所述gefi包括seq id no:27的氨基酸序列。

23.根据权利要求1-14中任一项所述的gefi,其中,所述gefi包括与seqid no:28具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

24.根据权利要求23所述的gefi,其中,所述gefi包括权利要求31的氨基酸序列。

25.一种构建体,其编码前述权利要求中任一项所述的gefi。

26.一种细胞,其包含前述权利要求中任一项所述的gefi。

27.一种试剂盒,其包含前述权利要求中任一项所述的gefi。

28.根据前述权利要求中任一项所述的gefi、权利要求26所述的细胞或权利要求27所述的试剂盒在检测蛋白酶活性、检测蛋白质-蛋白质相互作用或检测样品中g蛋白偶联受体激动剂的方法中的用途。

29.一种确定剂是否为g蛋白偶联受体(gpcr)激动剂的方法,包括:

30.根据权利要求29所述的方法,其中,所述系统包括细胞。

31.根据权利要求29或30所述的方法,其中,所述抑制性分子是纳米抗体。

32.根据权利要求31所述的方法,其中,所述纳米抗体包括nb39。

33.根据权利要求29-32中任一项所述的方法,其中,所述抑制性分子通过接头与所述cpfp结合。

34.根据权利要求33所述的方法,其中,所述接头包括lkedi(seq id no:4)。

35.根据权利要求29-34中任一项所述的方法,其中,所述gpcr是阿片受体。

36.根据权利要求35所述的方法,其中,所述阿片受体是μ-阿片受体、κ-阿片受体或嵌合阿片受体。

37.根据权利要求36所述的方法,其中,所述阿片受体是包括seq id no:7、seq id no:11或seq id no:12的氨基酸序列的κ-阿片受体。

38.根据权利要求37所述的方法,其中,所述阿片受体是包括seq id no:8的氨基酸序列的嵌合阿片受体。

39.根据权利要求29-38中任一项所述的方法,其中,所述cpfp通过接头与所述gpcr结合。

40.根据权利要求39所述的方法,其中,所述接头包括fplkmrmerqgap(seq id no:5)或gap。

41.根据权利要求29-40中任一项所述的方法,其中,所述gefi包括与seqid no:17具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

42.根据权利要求41所述的方法,其中,所述gefi包括seq id no:17的氨基酸序列。

43.根据权利要求29-40中任一项所述的方法,其中,所述gefi包括与seqid no:21具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

44.根据权利要求43所述的方法,其中,所述gefi包括seq id no:21的氨基酸序列。

45.根据权利要求29-40中任一项所述的方法,其中,所述gefi包括与seqid no:18具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

46.根据权利要求45所述的方法,其中,所述gefi包括seq id no:18的氨基酸序列。

47.根据权利要求29-40中任一项所述的方法,其中,所述gefi包括与seqid no:27具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

48.根据权利要求47所述的方法,其中,所述gefi包括seq id no:27的氨基酸序列。

49.根据权利要求29-40中任一项所述的方法,其中,所述gefi包括与seqid no:28具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

50.根据权利要求49所述的方法,其中,所述gefi包括权利要求31的氨基酸序列。

51.一种评估样品中蛋白质-蛋白质相互作用的方法,包括:

52.根据权利要求51所述的方法,其中,所述样品包括细胞。

53.根据权利要求52所述的方法,其中,所述第一蛋白质与由所述细胞表达的阿片受体结合。

54.根据权利要求53所述的方法,还包括:在检测所述样品中的所述荧光信号之前,将所述样品与阿片受体激动剂接触,其中当所述第一蛋白质和所述第二蛋白质之间已经发生了蛋白质-蛋白质相互作用时,所述阿片受体激动剂诱导所述gefi中的构象变化,使得观察到荧光信号。

55.根据权利要求51-54中任一项所述的方法,其中,所述抑制性分子是纳米抗体。

56.根据权利要求55所述的方法,其中,所述纳米抗体包括nb39。


技术总结
本公开涉及荧光生物传感器及其使用方法。特别地,本文提供了遗传编码的荧光指示剂(GEFI),其包含环状排列荧光蛋白(cpFP)和与cpFP结合的抑制性分子。在基础状态下,抑制性分子阻止来自环状排列荧光蛋白的荧光。在构象变化和/或抑制性分子和cpFP之间的键断裂时,使得cpFP抑制解除,从而允许来自cpFP的荧光。本文所述的生物传感器可以用于检测多种细胞信号转导事件的方法中。

技术研发人员:王文静,凯拉·克罗宁
受保护的技术使用者:密执安大学评议会
技术研发日:
技术公布日:2024/1/15
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