人巨细胞病毒糖蛋白B多肽中的新的可成药区域及其使用方法与流程

发明领域本发明涉及人巨细胞病毒(hcmv)糖蛋白b(gb)多肽中的新的可成药区域及其使用方法，例如用于药物开发。

背景技术：

0、发明背景

1、人巨细胞病毒(hcmv)是β-疱疹病毒科的双链dna病毒。hcmv是在孕妇中潜伏病毒感染或重新激活后垂直病毒传播导致先天性和新生儿听力丧失的主要原因。此外，hcmv是一种常见的机会性病原体，影响免疫抑制患者，例如实体器官和干细胞移植患者、艾滋病患者等。尽管医学研究机构已将开发针对hcmv的疫苗列为首要任务，但迄今为止尚未获得任何许可。

2、hcmv基因组编码几种包膜糖蛋白，其中之一是糖蛋白b(gb)。糖蛋白b是病毒进入细胞所需的融合蛋白，也是中和抗体(nab)应答感染的重要靶标。并入gb亚单位抗原的hcmv疫苗正在开发中。

3、由于融合是病毒感染性的关键步骤，因此鉴定gb蛋白内的可药物区域将进一步鉴定和开发能够特异性抑制融合的疗法，从而抑制hcmv的病毒感染。

技术实现思路

0、发明概述

1、融合前和融合后构象中hcmv gb蛋白结构已如下文详细描述的那样被分辨，从而提供关于多肽的结构以及其中包含的可成药区域、结构域等信息，所有这些都可以用于基于理性的药物设计工作。

2、因此，本发明部分提供了hcmv gb蛋白中的新的可成药区域。化合物与这些区域的相互作用、或者用化合物调节这些区域的活性，可以抑制病毒融合，从而抑制病毒感染性。一方面，本发明提供了针对这些可成药区域筛选化合物的方法，以发现用于由具有gb蛋白的hcmv引起的hcmv感染的候选治疗剂，例如病毒融合抑制剂。

3、此外，本发明提供了鉴定用于治疗或预防由hcmv感染引起的疾病的候选治疗剂的方法，包括使具有包含可成药区域的糖蛋白b(gb)多肽的hcmv与化合物接触，其中所述化合物的结合指示候选治疗剂。在某些实施方案中，化合物可以选自以下类别的化合物：蛋白质、肽、多肽、拟肽、抗体、核酸和小分子，或者可以选自化合物文库。这样的文库可以通过组合合成方法生成。可以在体外或体内测定结合。在这个方法的某些实施方案中，所述蛋白质是hcmv gb蛋白质并且包含来自hcmv gb蛋白的可成药区域的至少一个残基，优选三个残基。这种可成药区域还可用于结构确定、药物筛选、药物设计和本文描述和要求保护的其它方法中。

4、在一个实施方案中，所述可成药区域包含seq id no:1的残基k130-a135、d216-w233、r258-k260、a267-v273、r327-d329、w349-e350、v480-k518和n676-y690。这些残基形成在融合后构象中hcmv gb蛋白结构域v的结合口袋。

5、在又一个实施方案中，所述可成药区域包含在融合后构象中hcmv gb蛋白的融合环或其一部分。

6、另一方面，本发明提供了鉴定用于治疗或预防由具有gb蛋白的hcmv引起的感染的候选治疗剂的方法。在某些实施方案中，此类方法包括使包含可成药区域的gb蛋白与化合物接触，其中所述gb蛋白的活性的调节指示候选治疗剂。在其它实施方案中，此类方法包括使包含可成药区域的gb蛋白与化合物接触，其中所述可成药区域的移动或相互作用的被阻止指示候选治疗剂。在其它实施方案中，所述gb蛋白的功能或活性的调节涉及阻止融合后构象变化的完成。在另一个实施方案中，所述gb蛋白的功能或活性的调节涉及干扰构象变化的第一阶段。在另一个实施方案中，此类方法包括使包含可成药区域的gb蛋白与化合物接触，其中所述病毒融合的抑制指示候选治疗剂。在又一个实施方案中，所述方法包括使包含可成药区域的gb蛋白与化合物接触，其中所述hcmv的病毒感染性的抑制指示候选治疗剂。在又一个实施方案中，对象中由hcmv感染引起的疾病的至少一个症状的减轻指示候选治疗剂。

7、在另一个实施方案中，本发明提供了鉴定由具有gb蛋白的hcmv感染引起的疾病的候选治疗剂的方法，包括使包含可成药区域的gb蛋白与化合物接触，其中所述化合物阻止gb蛋白的结构域v或其片段在其结合口袋中结合。在一个实施方案中，gb蛋白的结构域v的结合口袋包含seq id no:1的残基k130-a135、d216-w233、r258-k260、a267-v273、r327-d329、w349-e350、v480-k518和n676-y690。

8、另一方面，了解到的和本文描述的关于gb蛋白的所有信息均可用于设计其生物活性调节剂的方法中。在一个实施方案中，设计用于预防或治疗由具有gb蛋白的hcmv感染引起的疾病的调节剂的方法，包括：(a)提供gb蛋白的三维结构；(b)通过参考三维结构鉴定用于预防或治疗由具有gb蛋白的hcmv感染引起的疾病的潜在调节剂；(c)使gb蛋白与所述潜在调节剂接触；以及(d)在与所述调节剂接触后测定gb蛋白的活性或确定具有所述gb蛋白的病毒的存活力，其中所述蛋白质活性或病毒的存活力的变化指示所述调节剂可用于预防或治疗与病毒相关的疾病或病症。在某些实施方案中，通过参考具有gb蛋白的hcmv的三维结构来鉴定潜在调节剂。在其它实施方案中，通过参考gb蛋白或其片段的可成药区域的三维结构来鉴定潜在调节剂。

9、另一方面，本发明提供了hcmv感染的调节剂(在某些实施方案中是抑制剂)，以及包含其的药物组合物和试剂盒。在某些实施方案中，此类调节剂可以与本发明的可成药区域相互作用。又一方面，本发明涉及调节剂，其是hcmv gb蛋白的结构域v的片段(或此类片段的同源物或此类片段的模拟物)并且竞争所述可成药区域。任何上述可成药区域的调节剂可以单独使用或以补充方法使用来治疗或预防hcmv感染。

10、最后，本发明提供了hcmv gb的可成药区域，其包含seq id no:1的残基k130-a135、d216-w233、r258-k260、a267-v273、r327-d329、w349-e350、v480-k518和n676-y690。一方面，所述可成药区域的残基处于融合后构象。

11、本发明的实施方案和实践、其它实施方案以及其特征和特性从随后的描述、附图和权利要求中将显而易见，所有权利要求由此通过引用并入本发明这个概述中。

技术特征：

1.一种用于鉴定用于治疗或预防由人巨细胞病毒(hcmv)感染引起的疾病的候选治疗剂的方法，包括使具有包含可成药区域的糖蛋白b(gb)多肽的hcmv与化合物接触，其中所述化合物的结合指示候选治疗剂。

2.一种用于鉴定用于治疗或预防由hcmv感染引起的疾病的候选治疗剂的方法，包括使包含可成药区域的hcmv gb多肽与化合物接触，其中所述gb多肽的功能或活性的调节指示候选治疗剂。

3.权利要求2的方法，其中所述gb多肽活性的所述调节包括阻止融合后构象中结构域v与结构域v结合槽的结合。

4.一种用于鉴定用于治疗或预防由具有gb多肽的hcmv感染引起的疾病的候选治疗剂的方法，包括使包含可成药区域的gb多肽与化合物接触，其中所述病毒的融合的抑制指示候选治疗剂。

5.一种用于鉴定由具有gb多肽的hcmv感染引起的疾病的候选治疗剂的方法，包括使包含可成药区的gb多肽与化合物接触，其中所述病毒的病毒感染性的抑制指示候选治疗剂。

6.一种用于鉴定由具有gb多肽的hcmv感染引起的疾病的候选治疗剂的方法，包括使包含可成药区域的gb多肽与化合物接触，其中对象中所述疾病的至少一种症状的减轻指示候选治疗剂。

7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述化合物选自以下类别的化合物：蛋白质，肽，多肽，拟肽，抗体，核酸和小分子。

8.权利要求7的方法，其中使用体外测定来确定结合。

9.权利要求7的方法，其中使用体内测定来确定结合。

10.权利要求7的方法，其中所述可成药区域包含来自以下残基的至少一个残基：seqid no:1的k130-a135、d216-w233、r258-k260、a267-v273、r327-d329、w349-e350、v480-k518或n676-y690。

11.权利要求10的方法，其中所述可成药区域的残基处于融合后构象。

12.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述化合物是包含seq id no:1(towne株)残基的肽，选自m648-k700(seq id no:260)、m648-v697(seq id no:261)、s647-v697(seq idno:262)、s647-v663(seq id no:263)、i653-v697(seq id no:264)、i653-q692(seq idno:265)、i653-l680(seq id no:266)、i653-s675(seq id no:267)、i653-y667(seq idno:268)、r662-v697(seq id no:269)、r662-q692(seq id no:270)、r662-l680(seq idno:271)、r662-s675(seq id no:272)、l664-f678(seq id no:273)、s668-v697(seq idno:274)、s668-q692(seq id no:275)、s668-v677(seq id no:276)、d679-v697(seq idno:277)、l680-v697(seq id no:278)、l680-q692(seq id no:279)、和r693-k700(seq idno:280)。

13.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述化合物在化合物文库中。

14.权利要求13的方法，其中所述文库使用组合合成方法生成。

15.一种候选治疗剂，其中所述候选治疗剂是hcmv活性调节剂，其与hcmv糖蛋白b(gb)的结构域v区域相互作用。

16.一种候选治疗剂，其中所述候选治疗剂是hcmv活性调节剂，其阻止hcmv糖蛋白b(gb)的结构域v的移动。

17.一种候选治疗剂，其中所述候选治疗剂是hcmv活性调节剂，其通过与来自融合后三聚体中的任何亚基形成的三聚体界面处的结构域v残基的至少一个残基相互作用来阻止构象变化的完成。

18.一种候选治疗剂，其中所述候选治疗剂是hcmv活性抑制剂，其包含与seq id no:1具有至少80％同源性的多肽序列。

19.根据要求15至18的候选治疗剂，其中所述候选抑制剂是包含seq id no:1(towne株)残基的肽，选自m648-k700(seq id no:260)、m648-v697(seq id no:261)、s647-v697(seq id no:262)、s647-v663(seq id no:263)、i653-v697(seq id no:264)、i653-q692(seq id no:265)、i653-l680(seq id no:266)、i653-s675(seq id no:267)、i653-y667(seq id no:268)、r662-v697(seq id no:269)、r662-q692(seq id no:270)、r662-l680(seq id no:271)、r662-s675(seq id no:272)、l664-f678(seq id no:273)、s668-v697(seq id no:274)、s668-q692(seq id no:275)、s668-v677(seq id no:276)、d679-v697(seq id no:277)、l680-v697(seq id no:278)、l680-q692(seq id no:279)、和r693-k700(seq id no:280)。

20.权利要求15至19的候选治疗剂，其中所述候选治疗剂是核酸。

21.一种药物组合物，其包含权利要求15至20中任一项的候选治疗剂。

22.一种治疗患有与hcmv感染相关的疾病或病症的对象的方法，包括向所述对象施用权利要求21的药物组合物。

23.一种预防对象中与hcmv感染相关的疾病或病症的方法，包括向所述对象施用权利要求21的药物组合物。

24.一种用于治疗或预防与hcmv感染相关的疾病或病症的试剂盒，其包含权利要求21的药物组合物和任选地使用说明书。

25.包含以下残基的hcmv gb的可成药区域：seq id no:1的k130-a135、d216-w233、r258-k260、a267-v273、r327-d329、w349-e350、v480-k518和n676-y690。

26.权利要求25的hcmv gb的可成药区域，其中所述可成药区域的残基处于融合后构象。

技术总结
本发明涉及一种鉴定由具有糖蛋白B(gB)多肽的人巨细胞病毒(HCMV)感染引起的疾病的候选治疗剂的方法，包括使包含可成药区的HCMV gB多肽与化合物接触，其中所述化合物的结合表明候选治疗剂。本发明还涉及包含HCMV活性调节剂和抑制剂的候选治疗剂和包含所述调节剂和抑制剂的药物组合物及其使用方法。

技术研发人员：X·S·池,P·R·多尔米策尔,W·刘,Y·刘
受保护的技术使用者：辉瑞公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11