专利名称：免疫球蛋白g·a·m联合火箭电泳测定板及测定方法
技术领域：
本发明涉及一种免疫球蛋白火箭电泳测定板及测定方法，特别是一种免疫球蛋白G、A、M联合火箭电泳测定板及测定方法。
免疫球蛋白火箭电泳测定法是使抗原在电场力作用下通过含有抗体的琼脂糖凝胶板时与相应的抗体形成抗原抗体复合物，这种复合物在抗原和抗体比例恰当的部位沉淀下来形成圆锥形沉淀峰，其形状似火箭，由于沉淀峰的高度与抗原浓度成正比，因此可作为抗原定量。
在现有技术中，免疫球蛋白G、A、M火箭电泳测定方法是一板单项测定，测定板的琼脂糖凝胶膜中只含有一种抗人免疫球蛋白血清(即抗人免疫球蛋白G、A、M血清中的一种)，因此一板一次只能测出一项结果，若要测定被测血清中免疫球蛋白G、A、M的含量则需三块测定板分三次测定，加之这种火箭电泳法每次的操作时间需要几小时，因此这种一板单项测定法不适宜大批量检测，致使这种精密度高、重复性好、试剂来源方便的检测方法难以大批量推广使用。(参考资料《临床免疫检验学》p275～276，天津科学技术出版社1990年出版)
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处，提供一种能联合测定免疫球蛋白G、A、M的火箭电泳测定板及测定方法。
本发明的目的是这样实现的这种免疫球蛋白G、A、M联合火箭电泳测定板是在支持板上浇注有一层含抗人免疫球蛋白血清的琼脂糖凝胶膜，膜上打有用于加注免疫球蛋白工作标准和被测血清的小孔，凝胶膜中所含的抗人免疫球蛋白血清为选自抗人免疫球蛋白G、A、M血清的两种以上的混合物。
上述混合物是指抗人免疫球蛋白G、A、M血清三者的混合物或三者之中任选二者的混合物。
上述测定板凝胶膜中所含的抗人免疫球蛋白血清用量(以每ml琼脂糖凝胶计)分别为(“u”为“单位”)抗人免疫球蛋白G血清0.1～0.5u，较佳为0.2～0.3u;
抗人免疫球蛋白A血清0.1～1u，较佳为0.4～0.6u;
抗人免疫球蛋白M血清0.1～1u，较佳为0.4～0.6u;
上述抗人免疫球蛋白血清用量的确定是基于(1)为使测定板经电泳后出现的沉淀峰在2～4cm高度，防止抗原太浓在一定时间内达不到最高峰，而抗体太浓又使沉淀峰太低难以测量;(2)为使测定板经电泳后出现的免疫球蛋白G、A、M沉淀峰的峰形(在后面的实施例中具体介绍)在一般情况下保持不变，以便于确认。
用这种测定板联合测定免疫球蛋白G、A、M的方法，包括将用稀释液稀释后的免疫球蛋白工作标准和被测血清分别加注到测定板凝胶膜的小孔中、搭桥电泳、染色及漂洗。所用的稀释液为2.5～3%甲醛(AR级)水溶液1份与7.5～8.5mol/L尿素水溶液5份的混合物。
上述稀释液中甲醛的作用是使免疫球蛋白A、M的沉淀峰显示清晰，尿素的作用是使免疫球蛋白G的沉淀峰显示清晰。
本发明对比现有技术具有以下优点和积极效果本发明提供的免疫球蛋白G、A、M联合火箭电泳测定板及测定方法不仅具有现有技术一板单项测定的优点(精密度高、重复性好、试剂来源方便等)，而且由于用一块板加一次样品即可同时获得三项结果，并且其测定结果与一板单项所测定的结果相一致，因此使原材料和操作时间大大降低，提高了检测效率，适合于各级实验室进行大批量检测。
下面将结合具体实施例对本发明进行详细描述(以下“免疫球蛋白”缩写为“Ig”)制板支持板为10×7cm塑料板(也可为玻璃板)，每板用10g/L琼脂糖凝胶11ml、抗人IgG血清(效价1∶100)2.52u、抗人IgA血清(效价190)3.18u、抗人IgM血清(效价1120)5.12u(抗人IgG、A、M血清均为卫生部北京生物制品研究所的制品)，将上述抗人IgG、A、M血清与琼脂糖凝胶于55℃混匀后浇注在水平放置的支持板上，冷却后沿支持板上凝胶膜的下底边(长边)打孔一排，孔径2.5mm，孔距2.0mm。
测定取2.85%甲醛(AR级)水溶液1份与8.0mol/L尿素水溶液5份混合，制得稀释液;
用上述稀释液将被测血清按1∶10稀释，用上述稀释液将Ig工作标准分别按1∶10、1∶20、1∶30三种浓度稀释(Ig工作标准为卫生部北京生物制品研究所的制品，其中Ig含量为IgG126u/ml，80.4μg/u;IgA106u/ml，14.2μg/u;IgM128u/ml，8.47μg/u);
取上述稀释后的被测血清5μml加注到测定板凝胶膜的小孔中，取上述稀释成三种浓度的Ig工作标准各5μml分别加注到三个小孔中，然后用四层纱布搭桥，置于PH＝9.0、0.05M巴比妥缓冲液电泳槽内于电流20～25mA/板、端电压5～7V进行电泳4.5小时;
用氨基黑10B染液覆盖板面3分钟后置于5%冰乙酸漂洗液中漂洗10分钟至峰形显示清晰。
用本实施例的测定板每板可测定被测血清20份。
峰形判断测定板经电泳后，沿每个小孔向上迁移出现三个叠加在一起的形状不同的火箭状沉淀峰，峰形与一板单项测定时出现的峰形相同，即峰底最宽、峰高最高、峰尖最尖的是IgG沉淀峰，峰底、峰高居中、峰尖呈钝圆形的是IgA沉淀峰，峰底最窄、峰高最低、峰尖呈较尖形的是IgM沉淀峰。
准确测量各种浓度Ig工作标准形成的IgG、A、M沉淀峰高度，绘制标准曲线，再测量被测血清形成的IgG、A、M沉淀峰高度，经查阅标准曲线，即可得出被测血清中IgG、A、M的含量。
对本发明提供的测定板及测定方法进行线性关系、重复性试验及相关性试验结果分析如下1.线性关系将稀释成1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30几种不同浓度的Ig工作标准绘制标准曲线，其结果IgG含量在3.38～20.26g/L范围内与峰高成直线关系，r＝0.9959、a＝3.9447、b＝7.0886;IgA含量在0.5～3.01g/L范围内与峰高成直线关系，r＝0.9996、a＝6.8733、b＝1.3772;IgM含量在0.36～2.1g/L范围内与峰高成直线关系，r＝0.9994、a＝1.7883、b＝20.8214。
2.重复性试验分析一份被测血清标本批内做10次，批间一天做一次共做10次，结果IgG含量为10.071g/L，批内CV＝0.77%，批内CV＝1.3%;IgA含量为1.498g/L，批内CV＝0.70%，批间CV＝1.5%;IgM含量为1.0784g/L，批内CV＝0.46%，批间CV＝1.2%。证明该测定方法的重复性良好。
3.相关性试验分析用本发明提供的测定方法与现有的一板单项测定方法随机检测48例临床标本做相关性比较，其结果IgG r＝0.9430
(本法)＝0.8686X+1.3916IgA r＝0.9440
(本法)＝0.8935X+0.138
IgM r＝0.9917
(本法)＝1.0534X+0.0856三者P＞0.05，证明本发明提供的一板三项测定结果与一板单项的测定结果无显著性差异。
权利要求
1.一种免疫球蛋白火箭电泳测定板，特别是一种免疫球蛋白G、A、M联合火箭电泳测定板，在支持板上浇注有一层含抗人免疫球蛋白血清的琼脂糖凝胶膜，膜上打有用于加注免疫球蛋白工作标准和被测血清的小孔，其特征在于凝胶膜中所含的抗人免疫球蛋白血清为选自抗人免疫球蛋白G、A、M血清的两种以上的混合物。
2.如权利要求1所述的测定板，其特征在于凝胶膜中所含的抗人免疫球蛋白血清用量(以每ml琼脂糖凝胶计)分别为(“u”为“单位”)抗人免疫球蛋白G血清0.1～0.5u，较佳为0.2～0.3u;抗人免疫球蛋白A血清0.1～1u，较佳为0.4～0.6u;抗人免疫球蛋白M血清0.1～1u，较佳为0.4～0.6u;
3.一种用权利要求1所述的测定板联合测定免疫球蛋白G、A、M的方法，包括将用稀释液稀释后的免疫球蛋白工作标准和被测血清分别加注到测定板凝胶膜的小孔中、搭桥电泳、染色及漂洗，其特征在于所用的稀释液为2.5～3%甲醛(AR级)水溶液1份与7.5～8.5mol/L尿素水溶液5份的混合物。
全文摘要
本发明提供了一种免疫球蛋白G、A、M联合火箭电泳测定板及测定方法，这种测定板的特征在于琼脂糖凝胶膜中所含的抗人免疫球蛋白血清为选自抗人免疫球蛋白G、A、M血清的两种以上的混合物。用这种测定板可以联合测定免疫球蛋白G、A、M，即用一块板加一次样品可同时获得三项结果，与现有的一板单项测定法相比较，使原材料和操作时间大大降低，提高了检测效率，适合于各级实验室进行大批量检测。
文档编号G01N33/561GK1067512SQ9210365
公开日1992年12月30日 申请日期1992年5月14日 优先权日1992年5月14日
发明者李宽明, 李惜芳, 郭广平, 李晓忠 申请人:石家庄市第三医院