一种免疫球蛋白e免疫比浊法检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种免疫球蛋白E免疫比浊法 检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 免疫球蛋白为五类，即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白 M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E。其主要作用是与抗原起免疫反应，生成抗 原-抗体复合物，从而阻断病原体对机体的危害，使病原体失去致病作用。另一方面，免疫 球蛋白有时也有致病作用。临床上的过敏症状如花粉引起的支气管痉挛，青霉素导致全身 过敏反应，皮肤荨麻疹（俗称风疹块）等。免疫球蛋白制剂能增强人体抗病毒的能力，可作 药用。如注射人血清或人胎盘中提取的丙种球蛋白制剂可防治麻疹、传染性肝炎等传染病。
[0003] 免疫球蛋白E(IgE)是一类具有δ链的亲同种细胞抗体，是参与过敏性鼻炎、过敏 性哮喘和湿疹等发病机制调节的主要抗体。自1966年日本学者Ishizaka发现IgE以来， 有关IgE的研究已取得重大进展，并先后在肥大细胞、嗜碱细胞、嗜酸细胞和巨噬细胞表面 发现了 IgE受体，还分别从各种过敏性疾病患者包括过敏性哮喘患者血清中分离出针对多 种花粉、尘螨、霉菌和动物皮毛的特异性IgE，近年证实许多细胞因子如IL-4、γ-干扰素均 参与了 IgE合成的调节。IgE抗体既能启动速发相过敏反应，也可诱发迟发相过敏反应。
[0004] IgE是由两条轻链和两条重链组成的对热极不稳定的一种分泌型免疫球蛋白，它 是由鼻咽、扁桃体、支气管、胃肠粘膜等处固有层的浆细胞产生，是介导I型变态反应的主 要抗体，最明显的基本生物学特性是亲同种细胞性。在5种免疫球蛋白中，IgE半衰期最短， 并且具有最高的分解率和最低的合成率，因此血清中含量最低，通常男性略高于女性，过敏 体质或超敏患者，血清中IgE明显高于正常人，外源性哮喘患者较正常人高数倍，故IgE在 血清中含量过高，常提示遗传过敏体质，或I型变态反应的存在。血清中IgE含量的升高分 为单纯性升高和多种型升高。单纯性升高，一般是由于IgE型多发性骨髓瘤所致。多种型 升高是由于特异反应性疾病（特异反应性支气管哮喘、过敏性鼻炎、特异反应性皮炎、过敏 性支气管肺曲霉菌病）、寄生虫感染、T细胞功能不全症（高IgE综合征、湿疹血小板减少多 次感染综合征、胸腺发育不全综合征、选择性IgA缺乏症、重症复合免疫功能缺陷）、软组织 嗜酸性肉芽肿（木村病），Hodgkig病（霍奇金病），急性肝炎，肝硬化，原发性肝癌，风湿性 关节炎，川崎病，小儿腹泻等疾病所致。血清中IgE含量减少一般由多发性骨髓瘤（IgE型 除外、低或无 γ-球蛋白症（原发性或继发性），共济失调-毛细血管扩张症，重症复合性免 疫功能缺陷、慢性副鼻窦肿瘤，类肉瘤样病，慢性淋巴细胞性白血病、矽肺，石棉肺引起的。
[0005] 目前，实验室常用的IgE测定方法有HPLC及ELISA法。HPLC具有特异性强、灵敏 度高、重复性好等优点，现在公认其为测定血浆IgE浓度的首选方法，但因 HPLC需要的设备 复杂且昂贵，难以适应常规临床化学实验室应用，而ELISA法操作过程有些繁琐，反应需要 时间，不能一蹴而就。免疫球蛋白E免疫比浊法检测试剂盒基于IgE抗体与IgE抗原间的 反应，形成免疫复合物，在570nm波长处检测其浊度变化，其变化程度与样本中的IgE含量 成正比。该方法是一种无需预处理样本，技术和设备要求不高，而精密度和特异性更高的分 析方法。由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动化，且可测定大量标本，因此受到临 床广泛推广。但是普通的免疫球蛋白E免疫比浊法检测试剂稳定性不好，准确度和灵敏度 也不高，因而限制了其在临床上的推广应用。
【发明内容】
[0006] 针对于现有技术存在的问题，本发明提供了一种免疫球蛋白E免疫比浊法检测试 剂盒，该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性和线性范围比常规的检测试剂盒要好，分析灵 敏度高，有利于试剂在临床上的推广应用。
[0007] 本发明是通过以下措施实现的： 一种免疫球蛋白E免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂Rl、试剂R2和校准 品，其中试剂Rl组成为：18. 16mmol/L pH 7. 6Tris缓冲液、150mmol/L氯化钠、6%聚乙二醇 400、0. 1% -2%二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒；试剂R2组成为：18. 16mmol/L pH 7. 6Tris 缓冲液、30ml/L羊抗人IgE抗体、20-40g/L牛血清白蛋白、0. 05% Kathon-CG。
[0008] 所述二氧化娃包覆的磁性纳米颗粒为Fe304/Si0 2复合纳米粒子，粒径为20_50nm。
[0009] 所述试剂Rl和试剂R2在使用时的比例为Rl :R2 = 200 :100。
[0010] 本发明所使用的二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒是采用以下方法制备的： 采用多元醇法制备Fe3O4纳米粒子。取一定的乙酰丙酮铁和三甘醇加入到回流加热反 应装置中，在磁力搅拌和Ar气保护的条件下，将装置缓慢加热至沸腾，并保持回流一段时 间。冷却后向反应溶液中加入乙酸乙酯使生成的四氧化三铁纳米粒子产生絮凝，磁性分离 黑色产物，清洗数次，分散到乙醇中，即得到稳定的Fe 3O4纳米粒子乙醇胶体溶液。之后将所 得Fe3O4纳米粒子采用Stober水解法制得SiO 2包覆的Fe 304纳米粒子。所得Fe 304/5;102复 合纳米粒子的粒径为20_50nm。
[0011] 本发明所使用的校准品为久峰润达生物技术有限公司生产的IgE校准品。
[0012] 本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行，其具体使用方法如 附图4。 加入生理盐水、样本或校准品5 μ 1，之后再加入Rl试剂200 μ 1预孵育5min后读取吸 光度A1，之后再加入100μΙ的试剂R2反应5min后，读取吸光度A2,并计算ΔΑ。
[0013] 本发明的有益效果： 本发明提供的免疫球蛋白E免疫比浊法检测试剂盒，通过在试剂Rl中加入二氧化硅 包覆的磁性纳米颗粒，该磁性纳米颗粒在静电吸附的作用下与羊抗人IgE抗体结合，从而 使抗体在磁性纳米颗粒上形成凝集，大大的提高了试剂的分析灵敏度。同时在试剂R2中加 入牛血清白蛋白，解决了抗体在稀溶液中不稳定这一难题，在试验中它能使抗体稳定，且相 对地中性，但不会影响抗体的性质，而Kathon-CG是一种新型高效环保型广谱杀菌剂、防腐 剂，在该试剂盒中使用Kathon-CG有效解决了 BSA长时间保存易发霉的缺点，因此BSA与 Kathon-CG共同作用有效地增强了试剂盒的稳定性，却不会对试剂的准确度产生影响，有利 于该试剂在市场中进一步的推广。
【附图说明】
[0014] 图1实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性； 图2实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性； 图3实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性； 图4是本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行，其具体使用方 法。
【具体实施方式】
[0015] 为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步详细说明。
[0016] 实施例1 一种常规的免疫球蛋白E免疫比浊法检测试剂盒，它包括试剂RU试剂R2、校准品。
[0017] 其中试剂Rl组成为：