专利名称：用于免疫诊断结核病的新的17KDa蛋白抗原及由其衍生的肽片段的制备方法
技术领域：
本发明涉及新的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(南印度分离菌SⅡ1)的17KDa蛋白抗原和由其衍生的若干肽片段以及所述抗原和由其衍生的肽片段在人和试验结核的免疫诊断、免疫治疗和免疫预防中的应用。本发明还涉及编码所述17KDa抗原的DNA顺序、编码由17KDa抗原衍生的肽片段的DNA顺序和以包括17KDa抗原的肽片段顺序的17KDa抗原的蛋白质顺序为基础构建的DNA和RNA探针。主要的应用领域是17KDa抗原及其肽片段在免疫诊断结核中的应用。另一个应用领域是17KDa抗原或其肽亚结构在制备抗结核疫苗中的应用。还有一个应用领域是通过人体的皮肤试验或离体测定，将17KDa抗原或其亚结构肽应用于检测T细胞的增殖。后一个应用领域在通过加强细胞免疫性有可能治疗人体癌症方面具有重要意义。还有一个应用领域是17KDa抗原或其亚结构肽在实验室生产细胞生长因子和酶方面的应用。
由结核分枝杆菌引起的人体结核是广泛发生在大约1600万人中的重要的慢性体衰病。正当结核病在发达国家和发展中国家严重蔓延时，目前在发达国家中后天获得性免疫缺陷综合症(爱滋病)的传染已经成为包括结核分枝杆菌在内的分枝杆菌传染的另一个难题。
尽管在许多国家抗药性已经成为一个问题，但是准确确诊人体结核病就能够利用有效的抗菌素进行早期治疗。因此，结构病的早期诊断意味着能进行有效的化学治疗，从而消灭肺结核患者中活杆菌的传播。
结核病的常规诊断决定于临床和放射性检查结果、结核杆菌样品的显微镜检查和结核分枝杆菌培养物的细菌分离。
由于现有可利用的诊断方法不完整，因此还不能全球性控制结核病。
虽然包括印度在内的许多国家把所有X光检查的疑似患者都进行抗结核化学治疗，但是结核病的许多临床特征不只对结核病具有专一性，而且在印度进行的研究(由印度班加罗尔全国结核病研究所提供)说明，仅仅30%的X光检查的疑似患者最后发展成为结核病患者。
在野外的条件下，对结核样品进行显微镜检查并不容易，并且至少104杆菌/ml需要进行筛选。许多结核样品，像结核性脑脊膜炎中的脑脊髓液，并非经常含有杆菌。此外，细菌培养物通常要培养6至8周，作为一种诊断方法而言确太费时。
广泛使用的结核菌素皮肤试验则缺乏敏感性和特异性，并且需要大约三天才能完成。由于结核的化学治疗需要至少6个月，许多不正常治疗的患者都产生了抗药性，造成活杆菌的传播。现已发现传统的BCG疫苗接种，其保护程度也随地区不同而改变。
基于这些因素，许多研究人员和世界卫生组织都认为，应把结核病的早期诊断视为优先研究和开发的领域。
将分枝杆菌用于加强免疫反应的免疫助剂，已经证明它对人和动物是有效的抗原。现已知道，由结核分枝杆菌产生的许多抗原可促使结核病患者特异性抗体和可增殖的淋巴细胞的形成(Ivanyi et al.，1988)以及试验动物模型的产生。结核病患者中抗体反应的检测可应用于早期诊断。关于对T淋巴细胞特异性的结核分枝杆菌的研究，通过皮肤试验和保护性疫苗的发展，同样也可应用于早期诊断。
有关结核病上述各方面研究的中心集于结核分枝杆菌特异性抗原的鉴定和合成。
许多研究人员已经鉴定出具有免疫诊断或免疫防护应用可能性的结核分枝杆菌的蛋白抗原。许多上述抗原的N末端的内氨基酸顺序已经发表，现将其中有些抗原的N端氨基酸顺序列于表1。
表1经过鉴定的结核分枝杆菌蛋白抗原的N端氨基酸顺序研究者 抗原和N末端Shinnick et al，1987 65 kDaRGCRHPVYamaguchi et al，1987 MPB 57MAKFNIKPLPattorroyo et al，1987 13 kDaAKVNI18 kDaGDLVGPGAE23 kDaAPKTY30 kDaFSXPGL68 kDaWMTMT77 kDaGKXIAYDGAAMatsuo et al，1988 30 kDaFSRPGLPAshbridge et al，1989 19 kDaEHRVKRGLTVBaird et al，1989 10 kDaAKVNIPKPGarcia et al，1989 70 kDaFQRITRQDLLBorremans et al，1989 32 kDaFSRPGLP据我们所知，上述抗原中没有一个能够用作免疫诊断的试验产品，其中两个抗原即Baird等(1989)的10KDa和Shinnick等(1987)的65KDa同系物已经测定，其用于试验动物模型的疫苗对结核分枝杆菌的保护性极差(美国维斯康辛大学D.W.Smith，私人通讯)。
使用存在于所有分枝杆菌中的A60抗原诊断结核病的ELISA盒已经用于ANDA诊断(法国)，但是该测定并不仅对人体结核具有特异性。
诊断结核病的另一方法就是使用DNA探针。通过商业途径得到的基因探针盒(1988)已用于鉴定由培养物分离得到的结核分枝杆菌复合物的成份，但并未直接用于临床样品。这些测定并不能排除其他分枝杆菌得到正结果。由Enzo Biochem设计的DNA探针(J.Clin.Microbiol.1988，Dec.)已用于1000碱基或更长的特异性DNA顺序并要求具有更高的特异性。以DNA为基础的所有探针的主要问题在于用患者的样品是否能得到真实的正结果，从而避免繁复的杆菌培养。
在南印度分离得到的结核分枝杆菌菌株中(Naganathan et al.，1987)，已经知道有毒性的表型变异，其分子基础还不清楚。Abou Zeid等(1988)发现，13KDa蛋白抗原存在于噬菌体Ⅱ型毒性结核分枝杆菌中，但在噬菌体Ⅰ型南印度低毒性结核杆菌中却不存在。而对该抗原和毒性间的关系至今还未详细研究。
现已发现，在结核分枝杆菌的分离物中存在17KDa蛋白抗原，本发明公开了其免疫化学特征。
因此，本发明涉及如下各个方面1.如下所述的结核分枝杆菌(SⅡ1)的17KDa蛋白抗原及其若干亚结构(肽)。
2.编码结核分枝杆菌(SⅡ1)中的17KDa抗原的DNA顺序。
3.编码结核分枝杆菌(SⅡ1)中的17KDa抗原亚结构(肽)的DNA顺序。
4.将所述17KDs蛋白或所述亚结构(肽)用于制备与所述17KDa蛋白抗原或其亚结构反应的单克隆或多克隆抗血清。所述抗体可在用于多克隆的诸如小鼠、兔和羊一类的哺乳动物中和在用于单克隆的小鼠中产生。
5.将所述亚结构(肽)的17KDa蛋白抗原用于检测免疫诊断的人和动物样品中的抗体。检测方法是本领域已知的方法，例如ELISA、放射免疫测定(RIA)和被动逆转血红细胞凝集(RPHA)等方法。
6.17KDa蛋白抗原或其亚结构(肽)在治疗结核病中的应用。
7.17KDa蛋白抗原或其亚结构(肽)在制备抗结核疫苗中的应用。
8.17KDa蛋白抗原或其亚结构(肽)在制备用于皮肤试验免疫诊断结核病的试剂中的应用。
9.以17KDa抗原或其亚结构(肽)的蛋白质顺序为基础构建用于诊断结核病的DNA或RNA探针。这类探针可按本领域已知方法构建和标记，例如掺入放射性同位素或用生物素进行非放射性标记。
10.通过诸如待诊断患者的血清、CSF和胸膜液等体液与3所述的17KDa抗原或其亚结构(肽)的单克隆抗体反应，诊断人体结核病的方法。
11.通过待诊断患者的体液(例如血清)与5所述的17KDa蛋白反应，诊断人体结核病的方法。
12.通过待诊断患者的体液(例如痰、血清、CSF和胸膜液)与9所述的DNA或RNA探针反应，诊断人体结核病的方法。
13.体外检测人体结核病的方法，该方法包括患者的体液(例如痰、CSF、胸膜液或血清)样品与10所述的经过标记的单克隆抗体接触。
14.体外检测人体结核病的方法，该方法包括患者的体液(例如痰、CSF、胸膜液或血清)样品与10所述的经过标记的单克隆抗体接触。
15.体外检测人体结核病的方法，该方法包括患者的体液(例如痰、CSF、胸膜液或血清)样品与3所述的经过标记的多克隆抗体接触。
16.使用3所述的17KDa抗原的单克隆抗体实施免疫诊断结核病的药盒。
17.使用5所述的17KDa抗原或肽亚结构实施免疫诊断结核病的药盒。
18.使用9所述的DNA或RNA探针实施诊断结核病的药盒。
19.表达1所述的17KDa蛋白或其亚结构的微生物。
20.以1所述的17KDa抗原或其亚结构肽为基础研制的抗结核疫苗。这类疫苗可以是通过遗传工程方法处理过的有机体(例如沙门氏菌属和牛痘病毒等)的产物。
本发明通过例举疾病的诊断、治疗和预防，特别是结核分枝杆菌传染病的诊断予以说明，但并不是以这些实施例限制本发明。本申请公开的内容，其应用方面可包括流行病检查、法医调查、食品污染测定、公共卫生检查、预防药物和农畜牧业等传染原的诊断检查。
实施例117KDa抗原的分级分离和纯化声波处理抗原粗制品，在37℃下，将结核分枝杆菌置于Kirchner培养基中培养2周，收集到的杆菌在4℃下和冷丙酮中经18小时杀死。杆菌用盐水洗涤3次，取10mg杆菌的盐水[5ml]悬浮液用Branson超声波仪微型探测器在40瓦输出功率下经声波处理，然后在20000×g下离心30分钟，再用Lowry方法测定其上清液中蛋白质含量后，在-70℃下冷冻贮藏。
分级分离和纯化取500μg经声波处理的粗制品，在按Hunkapi-ller和Lujan(1986)所介绍的12.5%聚丙烯酰胺凝胶上分级分离。用考马斯亮兰简单染色，即可目视到蛋白带。用0.1%SDS和0.05M碳酸氢铵将17KDa抗原进行电洗脱，然后用0.02%SDS和0.01M碳酸氢铵电渗析，洗脱的蛋白用氯仿-甲醇提取，除去SDS，将沉淀物干燥。
取5μg该沉淀物，用Lichrosorb RP18柱(LKB)进行HPLC检测，分析洗脱蛋白的纯度。在45%B和26分钟处洗脱物呈现的一个峰值，含有免疫反应抗原。图1表示17KDa抗原的HPLC图形。
实施例217DKa抗原的氨基酸顺序分析关于17KDa抗原的肽谱法，本文给出胰蛋白酶图和V8蛋白酶图。
胰蛋白酶图取30μg的17KDa蛋白，在37℃下，于0.1M碳酸氢铵缓冲液(pH7.8)中，用经TPCK处理过的胰蛋白酶(酶与底物比为1∶50)消化5小时。在经溶剂A(0.1%TFA水溶液)平衡过的RP18柱(0.46×25cm)上用HPLC分级分离胰蛋白酶消化物，并用0-65%的梯度溶剂B(含0.085%TFA的70%乙腈溶液)将肽洗脱60分钟。胰蛋白酶图示于图2。
V8蛋白酶图取30μg的17KDa抗原，在37℃下，于0.07%的氨中，用葡萄球菌V8蛋白酶处理48小时。酶与底物的摩尔比为1∶25。在用于蛋白酶图的条件下，在HPLC柱上纯化酶消化物中的各种肽。肽图示于图3。
17KDa抗原的顺序分析用与477A型蛋白质顺序仪(Applied Bios-ystems Inc.，USA)相连接的PTH氨基酸分析器进行蛋白和肽的氨基酸顺序分析。将样品溶于10%甲酸中，固定在经TFA处理过的涂有Polybre-ne(1mg)的玻璃纤维盘上，用于定序。
用完全蛋白测定N端的前18个氨基酸。根据胰蛋白酶分解的肽段的氨基酸顺序，选择V8蛋白酶产生能够与胰蛋白酶分解的肽段重叠的肽。胰蛋白酶和V8蛋白酶分解的肽段连成直线，得到17KDa抗原的完整顺序。重叠的详细情况示于图4。
17KDa抗原的氨基酸组份蛋白质具有A9、C3、D11、E10、F9、G8、H2、I7、K4、L11、M2、P9、Q2、R12、S8、T9、V11和Y4。显然其中没有色氨酸和天冬酰胺。由于该蛋白质的酸性氨基酸(D+E＝21)比碱性氨基酸总数(R+K＝16)多5个，所以呈酸性。该蛋白具有131个氨基酸，分子量为14762。
实施例317KDa抗原的免疫反应性在结核分枝杆菌菌株中呈现17KDa抗原的免疫显性结核分枝杆菌(M.tuberculosis)ATCC 27294，草分枝杆菌(M.phlei)、耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)、Kanasasii分枝杆菌(M.kanasasii)、胞内乌分枝杆菌(M.avium intracellulare)和scrofulaceum分枝杆菌(M.scrofulace-um)在Kirchner培养基中培养2周，将收集到的杆菌置于冷丙酮中杀死。按实施例1所述，由每个菌种制备经过声波处理的抗原，然后在12.5%凝胶中对这些抗原进行SDS PAGE分析。经考马斯兰染色的凝胶证明，17KDa抗原仅存在于结核分枝杆菌菌株中。在Western影印法中，结核分枝杆菌SⅡ1的兔抗血清也被用于探查这些声波处理物。在Weste-rn影印法中。呈现17KDa显性带。
在试验动物中得到17KDs抗体经电洗脱的17KDa抗原(10μg于100μl盐水中)用等体积的弗罗得氏不完全佐剂(FICA)乳化，并用于10BALB/C小鼠的腹膜内免疫。免疫30天后，从这些小鼠中收集血清，识别经声波处理过的结核分枝杆菌SⅡ1抗原中的17KDa带。
该试验确认，在经识别17KDa抗原的蛋白结构及其亚结构(肽)的小鼠中，能够产生多克隆或单克隆抗体。这类抗体，特别是单克隆抗体如同ELISA方法一样，可用于检测人体结核病样品中17KDa抗原或其亚结构的抗原检测方法，从而能够进行结核病的免疫诊断。
17KDa抗原与人结核病患者血清反应的证明从24个健康的人和20个已证实为结核病患者的培养物得到的血清按如下所述与17KDa抗原进行滴定。在22℃下，用1μg/ml经电洗脱的17KDa抗原的PBS涂敷PVC Dynatech平皿24小时。然后PBS-BSA封阻的平皿用在22℃下温育2.5小时的血清重复(1/200)稀释液滴定。洗涤平皿1.5小时内得到抗人IgGHRP结合物。洗涤平皿，用邻苯二胺底物测定并在492nm处读数。表Ⅱ给出17KDa抗原的敏感性达70%，特异性达85%。
表Ⅱ在结核病患者和对照的血清上ELISA微量测定17KDa抗原血清 n ELISA+ ELISA- 敏感性 特异性健康的人 24 4 20 - 85%结核病患者 20 14 6 70% -敏感性已知结核病患者为阳性特异性已知健康对照组为阴性ELISA+OD 492 nm＞＝0.3(1/200稀释)健康对照组＝平均+2SDOD 492 nm，n＝24)。
因此，这个试验肯定了结核分枝杆菌菌株中的17KDa抗原能够用于免疫诊断人体结核病的微量ELISA系统。
17KDa蛋白抗原其限定的抗体表位的证明由胰蛋白酶消化(实施例2，图2)的17KDa抗原产生的肽片段，按以上所述分别用健康人和结核病患者的血清滴定。在被测定的14个肽中，具有RATYDK，YEVR，LEDEMK，LMR，DFDGR和SEFAYGSFVR顺序的肽显示抗体结合活性的敏感性为17-36%。为了测定这些肽是否形成线性或构象抗体表位，用17KDa抗体的小鼠抗血清并参照其他5个肽测定另一个肽，即进行ELISA的抑制测定。YEVR和ATYDK两个肽相互抑制，从而说明它们是完整抗体表位的一部份，并且还按实施例2和图4所述，通过17KDa抗原的完整结构的测定予以肯定。对抗体表位说明，其他四个肽都呈线性肽，并可能呈构象肽。在带肽的上述6个抗体表位中，下述氨基酸顺序的肽是按Merrifi-eld的固相法合成的，并且含有特异性和敏感性的抗体结合活性
RATYDKRYEVR敏感性65%，特异性95%SEFAYGSFVR敏感性66%，特异性95%如上所述的抗体表位图谱法说明了限定的17KDa抗原的亚结构或肽能够被合成，并且采用微量ELISA法，能够将其用于免疫诊断人体结核病。
顺序为RATYDKRYEVRDFDGRAEL的肽已被合成，在对已被证实为结核病患者和对照的培养物的CSF样品进行测定时，其敏感性为86.6，特异性为100%。因此这个肽特别适宜用于代替ELISA测定中的17KDa抗原。
17KDa抗原能使淋巴增殖将健康供体和结核病患者的外周血淋巴细胞(PBL)进行分级分离，取2×106细胞在含10%自身血清的RPMl1640培养基中，在含或不含(对照)1μg的17KDa抗原条件下培养3天。在收集培养物前24小时，先用1μci的3H胸苷冲洗。表Ⅲ说明，17KDa抗原能使结核病患者的淋巴细胞的淋巴增殖(仅2个患者的数据)。
表Ⅲ用17KDa抗原测定淋巴增殖PBL源 加入3H胸苷 每分钟计数，3个重复培养物的平均健康供体 对照90 抗原121结核病患者 对照110 抗原65017KDa抗原除了具有使淋巴增殖的性质外，预测T细胞刺激性表位的方法(Rothbard和Taylor，1988)也可用于绘出17KDa抗原结构中的可能位点。这些T细胞表位位于SEFAYGSFVR和AELPGVDPDCDVCITR顺序的肽上。
因此，这个试验说明，17KDa抗原或亚结构(肽)能够用于刺激人外周血淋巴细胞。由于受刺激的淋巴细胞能够产生有助17KDa抗原或其亚结构的疫苗效应的若干细胞生长分化因子，所以17KDa抗原首先能用作结核疫苗，而且还可以非特异性地加强细胞免疫。
图5表示含有生物活性区的结核分枝杆菌的17KDa抗原的一级结构，但在未标出区中并不需要排除类似的活性。
测定结果的讨论和总结本发明介绍了结核分枝杆菌(SⅡ1菌株)中新的17KDa蛋白抗原的免疫化学性质。结核分枝杆菌造成了世界范围的1600万人的结核病。由于现有诊断方法存在的缺陷，目前这种疾病还未能被消灭。由于传统的BCG疫苗仅能部份预防结核病，所以近几年来的研究集中于开展检测早期结核病的免疫诊断方法和鉴定适当的防疫手段。
本发明所介绍的研究说明，由结柿分枝杆菌产生的新的17KDa抗原具有抗原活性，其抗原性质和抗原化学已进行了研究。
提供了蛋白抗原的生物活性蛋白，研究了早期检测结核病的免疫诊断方法。
因此，发现了具有131个氨基酸的17KDa蛋白抗原含有RATYDKRYE-VR和SEFAYGSFVR顺序的两种肽，带有诊断结核病的抗体结合表位。此外，还含有在SEFAYGSFVR和AELPGVDPDCDVCITR顺序中带预测T细胞刺激区的两种肽。后两种肽可能增加本发明所述整个17KDa抗原的T细胞刺激性质。17KDa抗原及其亚结构肽的T细胞刺激性质意味着它们能用于结核病的治疗和预防。
如下图1经电洗脱后的结核分枝杆菌(SⅡ1)的17KDa蛋白抗原的HPLC分析。
HPLC条件RP18柱(LKB，10μm孔径)，A＝0.1% TFA水溶液，B0.085%TFA的乙腈(70%)溶液，梯度0-65%，B，40分钟，敏感性0.08，220nm。
图2经RP18(LKB，10μm孔径)的HPLC分级分离结核分枝杆菌(SⅡ1)的17KDa蛋白抗原的胰蛋白酶肽。
分级分离A0.1%TFA水溶液，B0.085%TFA的70%乙腈溶液，梯度0-65%B，60分钟，敏感性0.08.220nm。
氨基酸顺序给出各个肽所测定的顺序。
图3经RP18(LKB，孔径10μm)的HPLC分级分离的结核分枝杆菌(SⅡ1)的17KDa蛋白抗原的V8蛋白酶肽。
分级分离A0.1%TFA水溶液;B0.085%TFA的70%乙腈溶液，梯度0-65%，60分钟，敏感性0.082，220nm。
图4表示肽直线连接的结核分枝杆菌(SⅡ1)的17KDa抗原的一级结构。Trp胰蛋白酶，V8金黄色葡萄球菌V8蛋白酶。标在上面的箭头表示完全蛋白得到的氨基酸顺序。
(单字母密码用于氨基酸)。
图5;给出生物活性区的结核分枝杆菌(SⅡ1)的17KDa抗原的一级结构。
AA68-77表示抗体和T细胞表位。
AA91-101表示抗体表位。
AA107122表示2个T细胞的表位。
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权利要求
1.下列结构的蛋白1 40ATTLPVQRHPRSLFPEFSELFAAFPSFAGLRPTFDTRELM30RSIQITIKLEDEMKGIYLPVAKHGELRSEFAYGSFVRTVS131LPVGADEDDIRATYDKRYEVRDFDGRAELPGVDPDCDVCITRGILTVSVCV
2.下列结构的肽和权利要求1的蛋白的片段RATYDKRYEVRDFDGRAELAELPGVDPDCDVCITR包括一个或多个该肽的顺序。
3.编码权利要求1定义的蛋白的DNA顺序。
4.编码权利要求2定义的肽的DNA顺序。
5.根据权利要求1或2定义的蛋白或肽或权利要求3或4的DNA顺序构建的DNA或RNA杂交探针，所述探针可任意进行标记。
6.根据权利要求1或2定义的蛋白或肽的抗体。
7.根据权利要求6的抗体，它是多克隆或单克隆抗体，所述抗体可任意进行标记。
8.实施免疫诊断结核病的药盒，它包括权利要求1或2的蛋白或肽。
9.实施免疫诊断结核病的药盒，它包括权利要求7的单克隆抗体。
10.实施以DNA为基础的诊断结核病的药盒，它包括权利要求5的杂交探针。
11.能够表达权利要求1或2的蛋白或肽的微生物。
12.结核疫苗，包括权利要求1或2的蛋白或肽。
13.诊断人结核病的方法，该方法包括患者的体液，例如血清，与权利要求1或2的蛋白或肽相互反应。
14.诊断人结核病的方法，该方法包括患者的体液，例如痰、CSF、胸膜液或血清，与经过标记的权利要求7的单克隆抗体相互反应。
15.诊断人结核病的方法，该方法包括患者的体液，例如痰、CSF、胸膜液或血清，与经过标记的权利要求5的DNA探针相互反应。
16.体外检测人结核病的方法，该方法包括患者的体液样品，例如痰、CSF、胸膜液或血清，与经过标记的权利要求7的多克隆抗体接触。
17.体外检测人结核病的方法，该方法包括患者的体液样品，例如痰、CSF、胸膜液或血清，与经过标记的权利要求7的单克隆抗体接触。
18.根据权利要求1或2的蛋白或肽，其在治疗人或动物体的方法中应用于人结核病的免疫诊断、治疗或接种预防。
19.根据权利要求1或2的蛋白或肽，其在治疗人或动物体的方法中应用于在小鼠体内产生用于像ELISA方法的免疫诊断方法的哺乳动物的多克隆抗体或单克隆抗体，该方法可检测人结核病中的如权利要求1所述的蛋白。
20.根据权利要求1或2的蛋白或肽，其在治疗人或动物体的方法中，通过早期检测结核病的血清液方法，用于检测结核病样品中的抗体。
21.根据权利要求1或2的蛋白或肽，其在治疗人或动物体的方法中为了通过皮肤获得免疫诊断或为了获得接种预防结核病的手段，用于检测结核样品中T细胞的增殖。
22.权利要求1或2的蛋白用于人结核病的免疫诊断、治疗和预防接种。
23.权利要求1或2的蛋白或肽用于开发通过T细胞的增殖治疗结核感染的试剂。
24.权利要求1或2的蛋白或肽应用于通过T细胞增殖测定，产生生长分化因子。
25.权利要求5的DNA或RNA探针用于检测人结核样品中的结核分枝杆菌DNA，以利获得早期检测结核病。
26.权利要求5的DNA或RNA探针应用于鉴定培养分离物中的分枝杆菌DNA和实验室研究。
全文摘要
本申请公开了分级分离、纯化和定序结核分枝杆菌(SⅡ1)氨基酸的17KDa蛋白抗原的免疫化学特性。具有N末端ATTLPVQR(aa1-8)的17KDa蛋白抗原至少具有3个位于线性顺序RATYDKRYEVR(aa91-101)和SEFAYGSFVR(aa68-77)肽的特异性抗体结合的抗原决定部位。促人体结核外周血淋巴细胞有丝分裂的17KDa蛋白原含有3个预测的位于线性顺序SEFAYGSFVR(aa68-77)和AELPGVDPDCDVCITR(aa107-122)肽的T细胞抗原决定部位。17KDa蛋白抗原可能用于人体结核病的免疫诊断、治疗和预防。
文档编号C07K16/12GK1060310SQ9110123
公开日1992年4月15日 申请日期1991年3月27日 优先权日1990年3月27日
发明者C·贾甘纳特, M·包尔甘纳什, B·R·斯里尼瓦沙 申请人:阿斯特拉公司