pH 7. 6Tris 缓冲液 18. 16mmol/L 氯化钠 150mmol/L 聚乙二醇400 6% 试剂R2组成为： Tris 缓冲液 pH 7. 6 18. 16mmol/L 羊抗人IgE抗体 30ml/L 本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的东芝120自 动分析仪，操作如下： 加入生理盐水、样本或校准品5 μ 1，之后再加入Rl试剂200 μ 1预孵育5min后读取吸 光度A1，之后再加入100μΙ的试剂R2反应5min后，读取吸光度A2,并计算ΔΑ。
[0018] 本实施例所使用的校准品为久峰润达生物技术有限公司生产的IgE校准品。
[0019] 实施例2 一种免疫球蛋白E免疫比浊法检测试剂盒，它包括试剂RU试剂R2、校准品。
[0020] 其中试剂Rl组成为： pH 7.6 Tm 缓冲液 ！ 8.16 mmo!/L 汉化钠 LSOirimoi/L 聚乙二搜MOO 6% 二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒 试剂R2组成为： Tris 缓冲液 pH 7.6 18. i 6 mmol/L 羊抗人IgE抗体 30ml/L 牛血清宵蛋_ 20g/L Kathon-CG 0.05% 具体测定方法同实施例1。
[0021] 实施例3 一种免疫球蛋白E免疫比浊法检测试剂盒，它包括试剂RU试剂R2、校准品。
[0022] 其中试剂Rl组成为： pH 7.0 Tiis 缓冲液 18.丨 6 mmoi/L &U'匕钠 150 inmol/L 聚乙醉 400 6% 二_化硅包覆的磁性_米颍粒 1% 试剂R2组成为： Tris 缓冲液 pH 7.6 18.16mm〇]/L 羊抗人IgE抗体 30mL/L 牛血清白蛋：_ 30麥L Kathon-CG 0.05% 具体测定方法同实施例1。
[0023] 实施例4 一种免疫球蛋白E免疫比浊法检测试剂盒，它包括试剂RU试剂R2、校准品。
[0024] 其中试剂Rl组成为： pH 7.6 TTris 缓冲液 18.16 mrnoi/L 氣化钠 〗50 mmol/L 聚乙醉 400 6% 二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒 2% 试剂R2组成为： Tris 缓冲液 pH 7.6 l8.16mmol/L 羊抗人IgM抗体 30ml/L 牛血.清_.蛋白 .40g/X Kathon-CG 0.05% 具体测定方法同实施例1。
[0025] 对上述实施例1-4中制得的试剂盒分析性能进行实验验证。
[0026] 准确度验证实验： 将实施例2、3、4的试剂盒作为实验组，市场上获得认可的一种准确度优异的免疫球蛋 白E试剂盒（长春某公司生产）作为对照组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测的 结果如图1-图3。
[0027] 通过图1-图3的检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒与对照检测试剂盒的检 测结果相关性分别为〇. 9979、0. 9982、0. 9982,相关性比较好，表明本发明的试剂盒与市场 上获得认可的具有优异准确度的免疫球蛋白E检测试剂盒有高度一致性，证明本发明试剂 盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
[0028] 线性相关性验证实验： 找到免疫球蛋白E高值样本为1000IU/mL，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓 度的样本，依次为 1000IU/mL、800IU/mL、600IU/mL、400IU/mL、200IU/mL、0IU/mL 浓度的样 本，每个浓度水平各样本分别测定三次，分别取其平均值。分别利用实施例1、2、3、4的试剂 进行检测。检测结果如表1所示。
[0029] 表1实施例1-4线性相关验证实验检测结果 UiN 丄 丄 CUUO 乙 Λ J ^ 〇/ ?
上述检测结果显示，实施例1-4检测结果相关性均大于0. 990,但实施例2、3、4的检测 结果大于〇. 999,与实施例1相比具有更好的线性相关性，这说明本发明试剂具有更好的线 性相关性。
[0030] 稳定性验证实验： 在2°C~8°C、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测四种实施例试剂的稳定性。 四种试剂每月选取同一样本测定其吸光度三次，取平均值，与新鲜的实施例1试剂检测结 果进行对比，从而确定试剂的稳定时间。检测数据如表2。
[0031] 表2稳定性验证实验检测结果
实验结果显示，实施例1试剂在2°C~8°C、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳 定，而实施例2、3、4试剂在2°C~8°C、无腐蚀性气体的避光环境中贮存24个月稳定，说明 在试剂中加入牛血清白蛋白和Kathon-CG，二者共同作用有效的提高了免疫球蛋白E检测 试剂盒的稳定性。
[0032] 分析灵敏度验证实验： 用本发明免疫球蛋白E试剂盒测试已知浓度在167. 2IU/mL的样本，记录吸光度差值。 分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如表3所示。
[0033] 表3分析灵敏度实验结果
通过检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒的吸光度差值均比实施例1的高，说明在 试剂中加入二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒在静电吸附的作用下与羊抗人IgE抗体结合，从 而使抗体在磁性纳米颗粒上形成凝集，扩大了响应信号，大大的提高了试剂的分析灵敏度。
[0034] 综合以上分析，本发明提供的免疫球蛋白E免疫比浊法检测试剂盒，在试剂Rl中 通过加入一定量的二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒和在试剂R2中加入一定量的牛血清白蛋 白和Kathon-CG能够有效的提高试剂盒的稳定性和分析灵敏度，线性范围较好，试剂的准 确度也较好。因此，本发明提供的免疫球蛋白E免疫比浊法检测试剂盒有利于在市场中进 一步的推广使用。
【主权项】
1. 一种免疫球蛋白E免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂RU试剂R2 和校准品，其中试剂Rl组成为：18. 16mmol/L pH 7. 6 Tris缓冲液、150mmol/L氯化钠、6% 聚乙二醇400、0. 1%-2%二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒；试剂R2组成为：18. 16mmol/L pH 7. 6Tris缓冲液、30ml/L羊抗人IgE抗体、20-40g/L牛血清白蛋白、0? 05% Kathon-CG。2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒为 Fe304/Si0 2复合纳米粒子，粒径为20_50nm。3. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂Rl和试剂R2在使用时的比例 为 Rl :R2=200 :100。
【专利摘要】本发明公开了一种免疫球蛋白E免疫比浊法检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1、试剂R2、校准品。通过在试剂R1中加入一定量的二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒和在试剂R2中加入一定量的牛血清白蛋白和Kathon-CG，有效的提高了试剂盒的稳定性和分析灵敏度，其线性范围也较好，试剂的准确度高，有利于在市场中进一步的推广使用。
【IPC分类】G01N33/543
【公开号】CN105137062
【申请号】CN201510300205
【发明人】甘宜梧, 董雯, 谭柏清, 赵新
【申请人】章丘维他力医疗器械有限公司
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年6月3日