一种快速鉴别深海鱼油的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于化学分析领域，具体设及一种快速鉴别深海鱼油的方法。
【背景技术】
[0002] 深海鱼油因富含多元不饱和脂肪酸值HA和EPA)而深受人们的喜爱。深海鱼油的 主要作用功效包括；调节血脂，清理血栓，防止血液凝固，预防脑血栓、脑溢血及中风；预防 关节炎、缓解痛风、哮喘，暂时缓解由关节炎引起的肿痛；预防老年痴呆症、营养大脑、改善 记忆；改善视力、防治老花眼；维护视网膜等。《2009年膳食营养补充剂热口品类调查》显 示，维生素C、鱼油、巧制剂类品种位于全国销量前列，鱼油仅次于维生素C位于第二。而目 前市场上鱼油分为己醋型和甘油醋型，两种不同深海鱼油价格差异大，功效不同。
[000引甘油醋型鱼油由于是EPA与DHA的天然存在形式，因此食用安全，易被人体消化吸 收，是被人们普遍接受的一种产品形式。甘油醋型鱼油与己醋型鱼油相比，首先其吸收率 高，其吸收率是己醋型鱼油的S倍左右，原因是人体膜脏和肝脏的主要脂肪酶是专一性水 解甘油=醋的，因此，己醋型鱼油不能被有效水解而释放游离脂肪酸W被人体吸收。
[0004] 其次，己醋型鱼油存在着功能上的缺陷：己醋型鱼油脂肪酸被小肠吸收进入人体 后易作为供能的物质基础而被氧化，影响了鱼油的保健功效；己醋型在胃肠道分解成形成 己醇，对己醇耐受性差的人易引起一些不良反应，如过敏症，尤其是不适宜儿童；长期W脂 肪酸、己醇为膳食来源，易引起人体内甘油的缺失或不足，从而拉动人体糖代谢，该样易造 成人体内糖代谢的不平衡而产生一定的副作用。
[0005] 目前保健品市场上80% W上的鱼油为己醋型，它存在功能上的缺陷，隐含着消费 的信任危机，该种危机源于技术的滞后，我国作为保健食品及保健药品的鱼油胶丸消费大 国，开发能够快速鉴别深海鱼油的方法已迫在眉睫。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是提供一种快速鉴别深海鱼油的方法，其能准确区分 己醋型深海鱼油和甘油醋型深海鱼油，可有效地防止低价己醋型深海鱼油冒充高价甘油醋 型深海鱼油。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
[000引提供一种快速鉴别深海鱼油的方法，其特征在于：将待鉴别深海鱼油样品经提取 获得其中脂质组分后，稀释，过滤，进样到反相液相色谱-质谱联用仪中进行分析，所述反 相液相色谱使用的流动相包括；a组分异丙醇和b组分己膳，洗脱方式；梯度洗脱；质谱条 件；采集模式；正离子采集模式；离子源；大气压化学电离源；扫描方式：数据依赖型二级 扫描；采集范围；100?1200m/z ;碰撞能量；10-50eV ;
[0009] 导出色谱质谱图，通过对总离子流图、一级质谱图、二级质谱图进行结合分析，鉴 别样品是己醋型深海鱼油还是甘油醋型深海鱼油。
[0010] 按上述方案，所述己醋型深海鱼油和甘油醋型深海鱼油的鉴别方法为：样品中只 含有己醋酷基EPA和己醋酷基DHA，该样品即为己醋型深海鱼油；样品中只含有S酷甘油酷 基EPA和S酷甘油酷基DHA，且不含有己醋酷基EPA和己醋酷基DHA，该样品即为甘油醋型 深海鱼油。
[0011] 按上述方案，所述的鱼油样品为己醋型深海鱼油时，其总离子流图中没有甘油醋 型深海鱼油的手指型特征色谱峰，且在其一级质谱图中可看到己醋酷基EPA特征分子离子 峰（[C&C&O-EPA+Hr，m/z 331.：3)和己醋酷基 DHA 特征分子离子峰（[C&C&O-DHA+Hr， m/z 357. 4)，其二级质谱图中可看到碎片离子圧PA-0田+ (m/z 285. 27)和Q)HA-0田+ (m/z 311. 28)。
[0012] 按上述方案，所述的鱼油样品为甘油醋型深海鱼油时，其总离子流图中有甘油醋 型深海鱼油的手指型特征色谱峰，另外，各脂质组分的一级分子离子峰会任意丢失一个脂 肪酸中性碎片而形成二级碎片离子，结合一级分子离子和二级碎片离子的质荷比特征信息 可推测丢失的脂肪酸种类，从而判断所述的样品中是否含有S酷甘油酷基EPA和S酷甘油 酷基DHA，由此可判断鱼油样品是否为甘油醋型深海鱼油，且可判断甘油骨架上的脂肪酸种 类。
[0013] 按上述方案，所述的梯度洗脱方式为；0-5min，10% a，90% b(按体积百分比计）； 5-20min，59% a，41% b (按体积百分比计）；20-25min，10% a，90% b (按体积百分比计）。
[0014] 按上述方案，所述洗脱速度为150-300 y L/min。
[0015] 按上述方案，所述的提取用试剂为异丙醇、己膳和正己烧的混合溶液，其中按体积 百分比计，各组分的含量为；异丙醇5% -50%，己膳5% -40%，正已烧10-90%。
[0016] 按上述方案，所述稀释用溶剂为体积比为1:1的甲醇和异丙醇的混合溶液。
[0017] 按上述方案，所述的离子源温度；200-350°C ;毛细管温度；200-35(TC ;銷气压力： 30-35psi ;辅助气压力；0-10psi。
[0018] 按上述方案，所述的液相色谱分析中使用的色谱柱为反相色谱柱。
[0019] 按上述方案，所述的进样量10-25 uL。
[0020] 本发明的有益效果：
[0021] 本发明采用反相液相色谱-质谱联用仪分析样品，通过识别样品中EPA和DHA的 脂质结合方式，可很好地实现己醋型深海鱼油和甘油醋型深海鱼油的准确鉴别；需要待测 样品量少、前处理简单、分析时间短、适合推广。
【附图说明】
[0022] 图1为己醋型深海鱼油样品的总离子流图；
[002引图2己醋型深海鱼油样品中己醋化EPA/DHA的一级质谱图；
[0024] 图3己醋型深海鱼油样品中EPA己醋的二级质谱图；
[002引图4己醋型深海鱼油样品中DHA己醋的二级质谱图；
[0026] 图5甘油醋型深海鱼油样品的总离子流图；
[0027] 图6甘油醋型深海鱼油样品中[POEPADHA+田+的二级质谱图。图中可W看到 二级特征碎片离子脚齡6口4] + (111/2,671.50)，[口00齡]+ (111/2,621.50)，和[口06口4] + (111/2， 595. 47)；
[002引图7己醋型深海鱼油验证样品的总离子流图；
[0029] 图8己醋型深海鱼油验证样品中己醋化EPA/DHA的一级质谱图；
[0030] 图9甘油醋型深海鱼油验证样品的总离子流图。
【具体实施方式】
[0031] 为进一步阐述采用反相液相色谱-质谱联用仪分析鉴定深海鱼油的方法，下面具 体结合实例对本发明进行进一步说明。
[003引实施例1 ;
[0033] 样本来源：市售不同品牌的深海鱼油样品（样品1为己醋型深海鱼油，样品2为甘 油醋型深海鱼油）。
[0034] 称取30mg待测深海鱼油样本，采用异丙醇；己膳；正己烧（2:2:1 ;V/V/V)的混合 溶剂提取获得其中脂质组分（包括酷基EPA和酷基DHA)后，用甲醇；异丙醇（1:1 ;V/V) 稀释100倍，0. 22 ym的有机滤膜过滤，进样到液相色谱-质谱联用仪中进行分析，进样量 10 yl，其中；所述的反相液相色谱中使用的色谱柱为化ermo Scientific Hypersil GOLD C18色谱柱（1