同时检测禽畜肉制品中五种有机锡农药残留的二级质谱方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品检测技术领域，尤其是设及一种同时检测禽畜肉制品中五种有机 锡农药残留的二级质谱方法
【背景技术】
[0002] =挫锡、=环锡、=苯基氨氧化锡、=苯基氯化锡和苯了锡在农业上常作为杀蛾剂 和杀菌剂，具有一定的毒性，而且在环境中有较好的稳定性。在梨、苹果、巧橘、茶树、棉花、 小麦、蔬菜、花弁等作物中施用，鸡肉、牛肉中的有机锡农药残留来源于饲养过程中食用了 含有有机锡农药残留的饲料，在禽畜肉肉中蓄积，通过食物链进入人体，对人类的健康产生 威胁。国际上对禽畜肉中有机锡残留限量的规定例如欧盟、日本肯定列表限量规定鸡肉、猪 肉、牛肉中苯了锡的最大残留量（MRL)为0.05mg/kg，S挫锡不得检出；欧盟规定鸡肉、猪 肉、牛肉、羊肉中S挫锡和S环锡的总量不得超过0. Olmg/kg ;香港食物中除害剂残余规例 规定S苯基氨氧化锡在牛肉、羊肉、马肉中的MRL为0. 05mg/kg，在猪肉中为0. 06mg/kg。
[0003] 文献报道是蔬采、水果、水中的残留检测。化ristophe Devos等义用NaB化4衍生， 建立了自动顶空固相微萃取-气相色谱-质谱化eadspace-SPME-GC/M巧检测水样品中的 苯了锡残留方法。王建华等采用NaB化4衍生、气相色谱和气相色谱-质谱分析苹果汁中= 挫锡和S环锡残留量。化talia Campillo等采用Na邸t4衍生，顶空固相微萃取处理蜂蜜和 葡萄酒样品，比较了 GC-MS和气相色谱原子发射检测器（GC-AED)两种检测方法检测样品中 =挫锡、=环锡、苯了锡、氯化=了基锡、氯化=苯基锡、二氯化二苯基锡、=氯化一苯基锡、 二氯化二了基锡、=氯了基锡的残留。吴巧等建立了气相色谱-电子捕获检测器（GC-ECD) 测定巧枯和±壤中苯了锡残留量的分析方法，样品经己膳提取，浓盐酸衍生化，中性氧化侣 柱净化。李晓玉等采用格氏试剂（己基漠化儀-己離溶液）衍生化，建立了粮谷中S环锡 和苯了锡同时测定的气相色谱-质谱联用（GC-M巧测定方法。
[0004] 目前关于动物源食品中该五种有机锡农药残留分析方法的研究尚未见报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于利用气相色谱重四级杆串联质谱（MS-M巧的高灵敏度和强 特异性，建立一种同时检测禽畜肉制品中五种有机锡农药残留的二级质谱方法，其特点是 该方法包括W下步骤：
[0006] a、提取；首先测定肉制品样品中蛋白质的含量，然后称取4. Og样品，再按照下列 对应关系确定所需添加1%的甲酸-己膳的体积；
[0007] 蛋白质低于20%时，添加20血1%的甲酸-己膳；
[000引 蛋白质在20. 0%至24. 0%时，添加40血1%的甲酸-己膳；
[0009] 蛋白质高于24. 0%时，添加50血1%的甲酸-己膳；
[0010] 均质2min，然后加入5mL磯酸盐缓冲液，加入5g氯化钢，在水平振荡器上振荡 30min，500化/min下离屯、5min，取上清液10ml于旋转蒸发仪浓缩至近干，再用氮气吹干；力口 入2mL甲醇溶解残留物，用氮气吹至ImL，得到待衍生的提取溶液；
[0011] b、衍生；将上述提取溶液加入5血己酸-己酸钢缓冲溶液（pH = 4. W及1血2% 四己基棚化钢（Na邸t4)水溶液，迅速旋上瓶盖，超声衍生反应15min，加入2血正己烧提取 衍生产物，混匀，离屯、后取上层上清液1ml，待净化；
[001引 C、净化；先用6血正己烧预淋洗Florisil固相萃取小柱，待Florisil柱中溶液 的液面降至无水硫酸钢层时，将上述衍生的上层有机相取ImL转移至Florisil柱上；再用 8mL正己烧/丙酬巧9:l，v/v)溶液进行洗脱，收集全部流出液，35°C下氮气吹干，用正己烧 溶解并定容至1血，供GC-MS/MS测定；
[0013] t有机锡农药混合标准工作液的衍生制备；所述的五种有机锡分别为=挫锡、= 环锡、=苯基氨氧化锡、=苯基氯化锡和苯了锡，=挫锡会转化为=环锡，所W =挫锡、=环 锡的己基化衍生物为同一种化合物=环己基己基锡，立苯基氨氧化锡和=苯基氯化锡的己 基化衍生物也为同一种化合物=苯基己基锡，苯了锡的衍生物为=(2-甲基-2-苯基丙基） 己基锡。取五种浓度分别为10、50、100、200、500 y g/L的S环锡、S苯基氨氧化锡和苯了锡 S种有机锡混合标准工作液各ImL到五个15ml离屯、管中，分别加入5ml己酸-己酸钢缓冲 溶液（抑=4. 5)及1ml 2%四己基棚化钢水溶液，超声衍生反应15min后，加入1ml正己烧 提取衍生产物，混匀，离屯、后取上清液，即得到有机锡农药衍生物标准工作液；采用气相色 谱重四级杆质谱（GC-MS/M巧检测，得到标准工作曲线。
[0014] e、采用外标法检测步骤C得到的待测溶液中的=种有机锡农药衍生物残留量：将 样品待测溶液在下进行GC-MS/MS检测，将得到的S种有机锡衍生物的峰面积用上述d步骤 中的标准曲线进行定量分析，计算得到样品待测溶液中各有机锡农药的浓度，从而计算得 出样品中各有机锡农药的残留量。
[0015] 上述GC-MS/MS分析条件如下，其中，色谱分离的条件：
[0016] 色谱柱；HP-5MS 毛细管柱（30mX0. 25mm，0. 25 ym);
[0017] 程序升温；60°C保持2min，W 20°C /min升至280°C，保持lOmin，总运行时间为 23min ；
[001引进样口温度；27(TC;
[0019] 载气；氮气（纯度大于99. 999% );
[0020] 进样方式；不分流进样；
[002U 进样量 l.OuL;
[0022] 质谱检测的条件；
[0023] EI源；传输线温度280°C ;离子源温度250°C ;接收极电流50 y A ;溶剂延迟时间 5. Omin ;碰撞气体为氣气，碰撞压力为ImTorr ;扫描范围m/z 50?650 ;
[0024] 五种有机锡衍生物的保留时间、母离子、定性离子对和定量离子对及其最优碰撞 电压如表1 ;
[0025] 表1 选择反应监测模式下五种有机锡衍生物的保留时间、监测离子对和碰撞电 压
[0026]
【主权项】
1. 一种同时检测禽畜肉制品中五种有机锡农药残留的二级质谱方法，其特征是该方法 包括以下步骤： a、 提取：首先测定肉制品样品中蛋白质的含量，然后称取4.Og样品，再按照下列对应 关系确定所需添加1%的甲酸_乙腈的体积； 蛋白质低于20%时，添加20mL1%的甲酸-乙腈； 蛋白质在20. 0%至24. 0%时，添加40mL1%的甲酸-乙腈； 蛋白质高于24. 0%时，添加50mL1%的甲酸-乙腈； 均质2min，然后加入5mL磷酸盐缓冲液，加入5g氯化钠，在水平振荡器上振荡30min， 5000r/min下离心5min，取上清液10ml于旋转蒸发仪浓缩至近干，再用氮气吹干；加入2mL 甲醇溶解残留物，用氮气吹至lmL，得到待衍生的提取溶液； b、 衍生：将上述提取溶液加入5mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH= 4. 5)及lmL2%四乙 基硼化钠（NaBEt4)水溶液，迅速旋上瓶盖，超声衍生反应15min，加入2mL正己烷提取衍生 产物，混匀，离心后取上层上清液lml，待净化； c、 净化：先用6mL正己烧预淋洗Florisil固相萃取小柱，待Florisil柱中溶液的液面 降至无水硫酸钠层时，将上述衍生的上层有机相取lmL转移至Florisil柱上；再用8mL正 己烷/丙酮（99:1，v/v)溶液进行洗脱，收集全部流出液，35°C下氮气吹干，用正己烷溶解并 定容至lmL，供GC-MS/MS测定； d、 有机锡农药混合标准工作液的衍生制备：所述的五种有机锡分别为三唑锡、三环锡、 三苯基氢氧化锡、三苯基氯化锡和苯丁锡，三唑锡会转化为三环锡，所以三唑锡、三环锡的 乙基化衍生物为同一种化合物三环己基乙基锡，三苯基氢氧化锡和三苯基氯化锡的乙基化 衍生物也为同一种化合物三苯基乙基锡，苯丁锡的衍生物为三（2-甲基-2-苯基丙基）乙 基锡。取五种浓度分别为10、50、100、200、500yg/L的三环锡、三苯基氢氧化锡和苯丁锡三 种有机锡混合标准工作液各lmL到五个15ml离心管中，分别加入5ml乙酸-乙酸钠缓冲溶 液（pH= 4. 5)及lml2%四乙基硼化钠水溶液，超声衍生反应15min后，加入lml正己烧 提取衍生产物，混匀，离心后取上清液，即得到有机锡农药衍生物标准工作液；采用气相色 谱-三重四级杆质谱（GC-MS/MS)检测，得到标准工作曲线。 e、 采用外标法检测步骤c得到的待测溶液中的三种有机锡农药衍生物残留量：将样品 待测溶液在下进行GC-MS/MS检测，将得到的三种有机锡衍生物的峰面积用上述d步骤中的 标准曲线进行定量分析，计算得到样品待测溶液中各有机锡农药的浓度，从而计算得出样 品中各有机锡农药的残留量。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的GC-MS/MS分析条件如下，其中， 色谱分离的条件： 色谱柱：HP-5MS毛细管柱（30mX0. 25mm，0. 25ym); 程序升温：60°C保持2min，以20°C/min升至280°C，保持lOmin，总运行时间为23min; 进样口温度：270°C; 载气：氦气（纯度大于99. 999% ); 进样方式：不分流进样； 进样量1.0UL; 质谱检测的条件： EI源；传输线温度280°C;离子源温度250°C;接收极电流50yA;溶剂延迟时间5.Omin;碰撞气体为氩气，碰撞压力为lmTorr;扫描范围m/z50?650 ; 五种有机锡衍生物的保留时间、母离子、定性离子对和定量离子对及其最优碰撞电压 如表1 ; 表1选择反应监测模式下五种有机锡衍生物的保留时间、监测离子对和碰撞电压
【专利摘要】同时检测禽畜肉制品中五种有机锡农药残留的二级质谱方法，按样品中蛋白质含量确定所需添加甲酸-乙腈的体积以进行有机锡提取、衍生与净化；进行标准工作液的衍生制备，五种有机锡为三唑锡、三环锡、三苯基氢氧化锡、三苯基氯化锡和苯丁锡，衍生物有三种，采用气相色谱-三重四级杆质谱检测，得到标准工作曲线；采用外标法检测三种有机锡农药衍生物残留量：用标准曲线进行定量分析，得到样品有机锡农药浓度与残留量。本发明利用了具有极高的灵敏度的GC-MS/MS检测方法，确立了以蛋白质为提取液添加量的依据，对三种有机锡衍生物的一级和二级质谱断裂途径进行了解析，并确立了具体的质谱条件，是一种快速高效的动物性食品中有机锡农药检测方法。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104569272
【申请号】CN201510028293
【发明人】王建华, 张慧丽
【申请人】山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月20日