一种鉴别冬虫夏草存储时间的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中草药分析领域，具体涉及一种冬虫夏草存储时间的鉴别方法。
技术背景
[0002]冬虫夏草系麦角菌科真菌冬虫夏草菌(Cordyceps sinensis)寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。由于冬虫夏草具有免疫调节、抗疲劳、抗肿瘤、抗衰老等功能，被视为珍贵的中药材，闻名世界。近年来，虽然冬虫夏草资源稀缺，价格昂贵，但其仍以其多种药用功效而备受关注。
[0003]虫草的储藏要点是防潮、防蛀和防虫。虫草常用的储藏方式是用密封容器放在阴凉干燥处，还可以向容器内添加干燥剂。有文献报道，在一般的贮藏条件下，冬虫夏草的保质期为2-3年。理论上来说，采用相同的保存方法，冬虫夏草保存的时间越久，里面所含各种有效成分流失的可能性与流失的量就越大，其药用价值就越低。冬虫夏草的交易市场上，两年以上的旧虫草明显比新虫草价格低。
[0004]目前市场上辨别冬虫夏草存储时间的方法主要为经验鉴别，通过观察其外表色泽来辨别，这些方法依赖于经验，准确度不好把握。
【发明内容】
[0005]有鉴于此，本发明的目的在于利用现代分析手段，建立快速鉴别冬虫夏草存储时间的方法。
[0006]麦角甾醇为冬虫夏草的特征成分，其本身在365nm紫外灯下检视无特征荧光斑点，当冬虫夏草在室温下放置一定时间后，麦角留醇会发生转化，转化物质在紫外灯下检视为黄绿色荧光斑点。因此，利用这一性质，结合本发明人长期实验统计经验，本发明提供一种简易廉价的方法，可以快速地大致判断冬虫夏草的存在年限。
[0007]本发明提供如下技术方案:
[0008]本发明提供了一种鉴别冬虫夏草存储时间的方法，其特征在于，包含以下步骤:
[0009]I)有机溶液提取冬虫夏草粉末，过滤或离心后，浓缩；
[0010]2)将I)中所得溶液和麦角留醇对照品溶液进行薄层层析；
[0011]3)取出薄层板，加热，紫外光灯下检视，根据斑点的位置和亮度进行判断。
[0012]在一些实施方案中，本发明所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙腈或其组合。
[0013]在另一些实施方案中，本发明所述有机溶剂为甲醇。
[0014]在一些实施方案中，本发明步骤2)中所述薄层层析方法的展开剂为弱极性溶剂-中等极性溶剂-酸的组合，其中弱极性溶剂选自石油醚、正己烷，中等极性溶剂选自甲酸乙酯，酸选自甲酸。
[0015]在一些实施方案中，本发明步骤2)中所述薄层层析方法的展开剂弱极性溶剂-中等极性溶剂-酸的体积比为15:5:1。
[0016]在一些实施方案中，本发明步骤3)中所述紫外光灯的波长为365nm。
[0017]在一些实施方案中，本发明所述判断的依据为:以麦角甾醇对照品的斑点为参照，若供试品图谱中与麦角留醇对照品斑点平行位置出现的斑点II与此斑点上方的斑点III相t匕，a.斑点II比斑点III亮度强，则为6个月以内冬虫夏草；b.斑点II亮度与斑点III亮度相当，则为6个月至13个月以内冬虫夏草；c.斑点II亮度比斑点III亮度弱，则为13个月至24个月以内冬虫夏草；d.无斑点II，只有斑点III，则为24个月以上冬虫夏草。
[0018]本发明的优点是:
[0019]首次提出了一种鉴别冬虫夏草存储时间的方法，鉴别手段无需使用贵重的分析仪器，利用薄层色谱就能快速评判冬虫夏草的已存在月份。
[0020]本发明的详细说明
[0021]定义和一般术语
[0022]本发明使用的定义“展开剂”的作用是使被分析物质可以在薄层板上得以分离，常用组合是石油醚(或正己烷):甲酸乙酯:甲酸，一般取上层溶液，各种溶剂也可以用各极性相似的溶剂来替代。展开剂组合的常用比例是15:5:1，此比例有较宽的耐用范围，在本领域技术人员公知的范围内，使用相似溶剂以耐用范围内的比例组合作为展开剂都是可行的。
[0023]本发明所述“麦角留醇对照品”，本发明使用甲醇溶解麦角留醇对照品制得，其麦角甾醇使用量也有一定的耐用范围，相对而言，使用0.3-0.4mg/mL浓度的麦角甾醇溶液作为对照品，有利于斑点II和斑点III之间的亮度差异的肉眼判断。
[0024]本发明使用的定义“斑点II ”和“斑点III”，其中“斑点II ”表示使用本发明方法，有机溶剂提取样品进行薄层层析后，与麦角留醇对照品斑点平行位置出现的斑点，由于和麦角甾醇对照品出现的位置一样，因此判断该斑点的主要物质为麦角留醇，它们通过加热或长时间放置，麦角留醇发生转化，在紫外灯下检视到黄绿色的荧光斑点。若不通过长时间置放或加热，麦角留醇在紫外灯下检视无特征斑点。“斑点III”属于冬虫夏草内麦角留醇转化的产物，薄层层析后，在紫外灯下检视为黄绿色的荧光斑点。
[0025]本发明“判断的依据”，是通过发明人长期的实验经验得出的，采收后6-13个月的虫草，通过本发明的方法检测，“斑点II ”和“斑点III”的亮度应该是接近的。
[0026]本发明所述“有机溶液提取冬虫夏草粉末”，可以用有机溶剂提取后直接浓缩至所需要的体积，也可以提取后将有机溶剂挥发干后直接用相同或相似极性的溶剂复溶，目的都是为了浓缩；提取用冬虫夏草粉末和供试品溶液的最终体积的常用比例为0.lg:0.1mL,该比例具有一定的耐用范围，并可通过调节点样量使供试品待测斑点达到预期亮度。提取的有机溶液在进行薄层层析之前需要离心或者过滤，静置一段时间也能达到澄清溶液的目的，属于技术领域公知。本发明对薄层板“加热”的目的是使麦角留醇转化成为在紫外灯下检视呈黄绿色荧光斑点的物质，一般情况下，室温下放置6h以上或80°C加热30min以上或100°C加热15min以上即可，温度越高所需加热时间越短，若加热时间不够，会因为麦角甾醇转化不充分而导致误判。
[0027]下面通过具体实施例阐述本发明的技术方案。
【附图说明】
[0028]图1是不同存储时间冬虫夏草样本及麦角留醇高温破坏样本薄层层析图，其中I为空白溶液，2为室温放置2个月冬虫夏草，3为室温放置22个月冬虫夏草，4为麦角甾醇对照品，5为麦角甾醇高温破坏样品，6为斑点III化合物，7为前沿，8为斑点III，9为斑点II，10为基线。
[0029]图2是不同存储时间的冬虫夏草薄层色谱鉴别图，其中I为空白溶液，2为麦角甾醇对照品，3为斑点III化合物，4为室温放置I个月样本，5为室温放置7个月样本，6为室温放置12个月样本，7为室温放置27个月样本，8为室温放置22个月冬虫夏草，9为青海冬虫夏草(当年)，10为前沿，11为斑点III, 12为斑点II, 13为基线。
[0030]图3未知储存时期的冬虫夏草薄层色谱鉴别图，其中I为空白溶液，2为麦角甾醇对照品，3为斑点III化合物，4为市售冬虫夏草，5为青海样本，6为西藏那曲样本，7为四川甘孜样本，8为冬虫夏草对照药材，9为前沿，10为斑点III，11为斑点II，12为基线。<