0038] 12样品垫
[0039] 13含有经标记物标记的抗血红蛋白抗体的垫
[0040] 14抗体固定化膜
[0041] 15吸水垫
[0042] 16涂布有抗HbAlc抗体的抗HbAlc抗体涂布部
[0043] 17涂布有抗HbAO抗体的抗HbAO抗体涂布部
[0044] 18作为对照物的涂布有抗IgG抗体的抗IgG抗体涂布部
【具体实施方式】
[0045] 下面，进一步详细说明本发明。
[0046]本发明所用的检体可以列举：（例如）诸如血液、血衆、血清之类的血液样本、尿、 唾液、脊髓液（髄液）、汗、泪、羊水、乳头分泌液、鼻涕、痰、鼻腔或咽拭子液、皮肤渗出液、组 织或细胞以及粪便的提取物等。
[0047]根据待判定阴性或阳性的被检测物质的种类，有时存在其绝对量方面存在个体差 异的情况、以及通过与上述被检测物质有关的其它被检测物质的相对量来判定阴性或阳性 的情况，并且存在仅仅使该被检测物质发色从而确认其强度时难以判定的情况。因此，对于 这样的被检测物质，不是由绝对量来判定阴性或阳性，而必须由该被检测物质（第1被检测 物质）与在同一检体中所含的其它被检测物质（第2被检测物质）的相对量来判定阴性或 阳性。例如，可以列举：即使第1被检测物质和第2被检测物质各自的绝对量均在判定为阴 性的健康人的绝对量的范围内，但是由于第1被检测物质和第2被检测物质的比率在健康 人的范围外因而应该判定为阳性（非健康人）的情况等。本发明中，使第1被检测物质和 第2被检测物质同时发色，并掌控第1被检测物质和第2被检测物质的比率。
[0048] 以下，以HbAlc(作为本发明的待判定阴性或阳性的第1被检测物质）、和HbAO(掌 控与第1被检测物质的比率从而作为阴性或阳性判定基准的第2被检测物质）为例进行 说明，但本发明并不限于下述例子，例如，除上述被检测物质以外，还可以将PSA(Free-PSA/ Total-PSA比）、动脉硬化指数即胆固醇（LDL胆固醇/HDL胆固醇比）、或者肝功能障碍或肾 病综合症的标志（白蛋白/球蛋白比）等作为被检测物质进行分析。即，只要是相对于第 2被检测物质的第1被检测物质的浓度或者相对于第1被检测物质和第2被检测物质的总 量的浓度以特定的浓度作为界限来判定阴性或阳性，即可适用于本发明。
[0049] 将第2被检测物质作为掌控与第1被检测物质的比率从而作为阴性或阳性的判定 基准是指：例如，将第1被检测物质相对于第1被检测物质和第2被检测物质的总量超过 6. 0%的情况判定为阳性时，调整信号强度使得占94. 0%的第2被检测物质的发色信号的 信号强度与第1被检测物质为6. 0%时的发色信号为同一强度。
[0050] 首先，在本发明中，通过免疫反应使待判定阴性或阳性的HbAlc、和成为阴性或阳 性的判定基准的HbAO分别发色。用于该发色的方法是公知的，例如，该方法在专利文献1 中被公开。具体而言，可通过以下各步骤进行。首先，从患者采血。作为采血位置，可列举 手指、牙龈、手臂静脉以及耳等。
[0051] 使所采血液中HbAlc的抗原决定基在血红蛋白蛋白质的表面露出。作为其方法， 可列举（例如）使用让血红蛋白0链N末端在蛋白质表面露出的成分（N末端露出剂（露 出剤））处理血红蛋白的方法、使血红蛋白吸附至乳胶颗粒上来处理血红蛋白的方法等。
[0052] 作为使用N末端露出剂的露出方法，有（例如）将胍、硫氰酸或者硫氰酸盐与血液 混合的方法、将各种表面活性剂与血液混合的方法、以及将这些N末端露出剂组合使用并 与血液混合的方法等。作为表面活性剂，可列举（例如）：作为非离子型表面活性剂可列举 蔗糖单月桂酸酯；作为阴离子型表面活性剂，可列举（例如）月桂基硫酸钠等烷基硫酸盐， 聚氧乙烯月桂基醚硫酸钠等聚氧乙烯烷基醚硫酸盐，十二烷基苯磺酸钠等烷基苯磺酸盐， 月桂酰基甲基丙氨酸、N-月桂酰基肌氨酸的钠盐等酰基氨基酸盐，二烷基磺基琥珀酸钠，0 萘磺酸甲醛缩合物钠盐，特殊聚羧酸型高分子表面活性剂等；作为阳离子型表面活性剂，可 列举（例如）高级烷基胺类以及季铵盐，作为季铵盐，可列举（例如）单长链烷基三甲基铵 盐、双长链烷基二甲基铵盐、氯化苯甲烃铵、氯化苄甲乙氧铵、氯化十六烷基吡啶、地喹氯铵 等；作为两性表面活性剂，可列举（例如）磺基三甲铵乙内酯12?16、月桂基三甲铵乙内 酯、2-烷基-2-羧甲基-N-羟乙基咪唑鑰三甲铵乙内酯、月桂基二甲基氧化胺、月桂酰胺丙 基二甲基氨基乙酸甜菜碱等。这些表面活性剂也可以两种以上组合使用。
[0053]N末端露出剂优选作为水溶液使用，N末端露出剂的浓度为（例如）0. 01?10质 量％。另外，该水溶液中还可含有诸如叠氮化钠的防腐剂、诸如EDTA的螯合剂、诸如NaCl 或MgCl2的金属离子，以抑制免疫层析分析时的非特异反应为目的，也可含有BSA或酪蛋白 等蛋白质。
[0054] 另外，所述水溶液的pH优选为4. 0?9. 0、更优选为5. 0?9. 0、还更优选为6. 0? 8. 0。使用该水溶液处理血液时，向血液样本中添加该水溶液并搅拌即可。温度优选为1°C? 50°C、更优选为10°C?40°C、还更优选为15°C?25°C。处理时间优选为10秒?30分钟、 进一步优选为30秒至5分钟。
[0055] 由此，可以获得前处理样本，其中血液样本中的HbAlc的糖化部位高效地在血红 蛋白蛋白质表面露出。
[0056] 接着，使之与经标记物标记的抗血红蛋白抗体发生反应，该抗体能够特异性结合 上述工序所制备的前处理样本中的血红蛋白。作为这种抗体，可列举多克隆抗体、或单克隆 抗体等。单克隆抗体以及多克隆抗体或者其片段是公知的且可以获得，并且可以通过公知 的方法制备。
[0057] 作为产生抗体的动物种类，可列举（例如）人、小鼠、大鼠、兔子、山羊等。作为免 疫球蛋白，可以是IgG、IgM、IgA、IgE或者IgD的任意一者。单克隆抗体可以这样获得：通 过常规方法，将经抗原免疫的小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞杂交，选择产生目标抗体的杂 交瘤，获得从该杂交瘤中产生的血红蛋白抗体（参照（例如）科勒（^一7-）和米尔斯 坦（Sy)的技术[Nature256(1975)495-497])。多克隆抗体可以这样获得：通 过常规方法，利用抗原将产生动物（例如，人、小鼠、大鼠、兔子、山羊以及马等）进行免疫获 得抗血清，从该抗血清中分离目标抗体而获得。
[0058] 作为标记物，优选为可以通过视觉确认着色的有色物质，并且可以适当采用业界 周知的标记物。可列举（例如）金属胶粒、非金属胶粒、着色乳胶以及酶标记等，从标记的 稳定性的观点出发，优选为即使时间流逝也难以褪色的金属胶粒。
[0059] 作为金属胶粒，可列举（例如）金、铂、铜、银、钯胶体及其混合后的颗粒。特别 是，由于在适当的粒径下金胶粒呈现红色，所以优选。金属胶粒的平均粒径为（例如）1? 500nm，从获得强烈色彩的方面考虑，优选为10nm?150nm、更优选为20?100nm的范围。
[0060] 作为非金属胶粒，可列举（例如）硒胶体等。可以通过常规方法制备金属胶粒以 及非金属胶粒，此时，调节粒径以呈现所需色彩。另外，也可使用市售品。
[0061] 作为着色乳胶，可列举（例如）利用使聚苯乙烯等高分子聚合物的颗粒呈现红色 或蓝色的着色剂着色后的乳胶，并且可通过常规方法制备。作为酶标记，可列举（例如）过 氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶和半乳糖苷酶等。使用酶标记的情况下，使相对于该 酶的基质以及根据需要的发色试剂反应，检测通过该反应产生的