用于蛋白质纯化的亲和试剂的制作方法
【专利说明】用于蛋白质纯化的亲和试剂
[0001] 香叉引用
[0002] 本申请要求2012年03月16日提交的美国临时申请第61/611，999号的权益，所 述申请W引用的方式并入本文中。
【背景技术】
[0003] 具有潜在商业价值的蛋白质和其它分子W商业上适用的量存在于天然来源中，用 作食品成分（例如核酬糖二磯酸駿化酶加氧酶、种子贬藏蛋白、豆血红蛋白）、工业酶（例如 木瓜蛋白酶、渡萝蛋白酶等）、结构材料或药物。蛋白质或其它分子的纯度对于最优效用来 说可能是重要的。
[0004] 纯植物、动物或微生物蛋白质的商业来源的稀有性突显了本领域中对于从粗溶液 高效并且经济地纯化蛋白质或其它分子的通用可缩放方法的现有需要。
【发明内容】
[0005] 本文公开了用于分离一或多种祀蛋白的方法，其包含；（a)在结合抑下将包含所 述一或多种祀蛋白的组合物施用到包含一或多种可转换亲和试剂的底物，W使得所述祀蛋 白与所述可转换亲和试剂结合；和化）在释放抑下将溶液施用到包含所述一或多种可转换 亲和试剂的所述底物，W使得所述一或多种祀蛋白从所述一或多种可转换亲和试剂释放， 因此分离所述一或多种祀蛋白。一些实施例进一步包含（C)在步骤（a)与步骤化）之间，在 所述结合抑下施用洗漆溶液，其中所述洗漆溶液移除一或多种污染物。在一个实施例中， 所述一或多种可转换亲和试剂不包含抗体。在一个实施例中，所述一或多种祀蛋白是抗体。 在一个实施例中，所述一或多种祀蛋白可W用W治疗疾病或病症。在一个实施例中，所述疾 病或病症是癌症。
[0006] 在一些实施例中，所述一或多种祀蛋白包含植物蛋白。在一个实施例中，所述一或 多种祀蛋白选自由W下组成的群组：豆血红蛋白、非共生血红蛋白、血红蛋白、肌红蛋白、血 绿蛋白、无脊椎动物血红蛋白、神经球蛋白、细胞球蛋白、原球蛋白、截短2/2球蛋白、化N、 藍藻球蛋白、化〇、G化3和细胞色素、地狱之口球蛋白UHeir S gate globin I)、细菌血 红蛋白、纤毛肌红蛋白、黄素血红蛋白、核糖体蛋白、肌动蛋白、己糖激酶、乳酸脱氨酶、果糖 二磯酸醒缩酶、磯酸果糖激酶、丙糖磯酸异构酶、磯酸甘油酸激酶、磯酸甘油酸变位酶、締醇 酶、丙酬酸激酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、糖蛋白、凝集素、粘蛋白、甘油醒-3-磯酸脱氨酶、 丙酬酸脱駿酶、肌动蛋白、翻译延长因子、组蛋白、核酬糖-1，5-二磯酸駿化酶加氧酶（核酬 糖二磯酸駿化酶加氧酶）、核酬糖-1，5-二磯酸駿化酶加氧酶活化酶（核酬糖二磯酸駿化酶 加氧酶活化酶）、白蛋白、大豆球蛋白、伴大豆球蛋白、球蛋白、魏豆球蛋白、伴白蛋白、麦胶 蛋白、谷蛋白、款质、麦谷蛋白、大麦醇溶蛋白、醇溶谷蛋白、菜豆蛋白（蛋白质）、蛋白质体、 黑麦醇溶蛋白、伸展蛋白、小麦款质、胶原蛋白、玉米蛋白、高梁醇溶蛋白、燕麦蛋白、脱水蛋 白、亲水素、胚胎发生晚期丰富蛋白、天然未折叠蛋白、任何种子贬藏蛋白、油质蛋白、油体 巧蛋白、油体固醇蛋白或其它油体蛋白、营养贬藏蛋白A、营养贬藏蛋白B、蒙恩（moong)种 子贬藏8S球蛋白、魏豆球蛋白、魏豆白蛋白或其组合。
[0007] 在一些实施例中，所述一或多种可转换亲和试剂包含小分子化合物。在一些实施 例中，所述小分子化合物包含肤、类肤、3-肤或D-肤亚单位。在一些实施例中，所述结合抑 在约7与约11之间。在一些实施例中，所述结合抑是约9。在一些实施例中，所述释放抑 在约3与约7之间。在一些实施例中，所述释放抑是约6。在一些实施例中，所述一或多种 祀蛋白用W生产消费品。在一些实施例中，所述消费品是肉类替代品。在一些实施例中，所 述消费品是乳酪替代品。在一些实施例中，所述消费品是牛奶替代品。在一些实施例中，所 述消费品是蛋类替代品。
[000引在一些实施例中，本发明提供一种包含非多肤抑可转换试剂的组合物，其在第一 pH下结合标祀并且在第二抑下不结合所述标祀。
[0009] 在一些实施例中，所述抑可转换试剂是类肤。在一些实施例中，所述类肤包含N 个亚单位。在一些实施例中，所述N个亚单位是1、2、3、4或5个亚单位。在一些实施例中， N个亚单位是2个亚单位。在一些实施例中，所述类肤在多个多样性点被修饰。在一些实施 例中，所述多个多样性点是至少1、2、3、4、5、6个多样性点。在一些实施例中，所述多个多样 性点是4个多样性点。
[0010] 在一些实施例中，所述类肤包含=嗦。在一些实施例中，所述=嗦是被=取代的。 [001U 在一些实施例中，其中所述抑可转换试剂具有主链结构，其包含；
[0012]
【主权项】
1. 一种包含非多肽pH可转换试剂的组合物，其在第一 pH下结合标靶并且在第二pH下 不结合所述标靶。
2. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述pH可转换试剂是类肽。
3. 根据权利要求2所述的组合物，其中所述类肽包含N个亚单位。
4. 根据权利要求3所述的组合物，其中N个亚单位是1、2、3、4、5个亚单位。
5. 根据权利要求3所述的组合物，其中N个亚单位是2个亚单位。
6. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述类肽在多个多样性点被修饰。
7. 根据权利要求6所述的组合物，其中所述多个多样性点是至少1、2、3、4、5、6个多样 性点。
8. 根据权利要求6所述的组合物，其中所述多个多样性点是4个多样性点。
9. 根据权利要求2所述的组合物，其中所述类肽包含三嗪。
10. 根据权利要求9所述的组合物，其中所述三嗪被三取代。
11. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述pH可转换试剂具有包含式IV的主链结 构。
12. 根据权利要求11所述的组合物，其中所述可转换试剂选自由以下组成的群组：式 IV中所述的化合物，其中R基团的身份如表5中所述，其中表5中的R1-R4基团对应于式IV 中的R1-R4基团，其中所述表中的化合物的N-H键中的一或多者在式IV中转化为C-N键。
13. 根据权利要求11所述的组合物，其中所述可转换试剂选自由以下组成的群组：式 IV中所述的化合物，其中R基团的身份如表1中所述，其中表1中的R1-R4基团对应于式IV 中的R1-R4基团，其中所述表中的化合物的N-H键中的一或多者在式IV中转化为C-N键。
14. 根据权利要求13所述的组合物，其中所述可转换试剂可以在碱中结合核酮糖二磷 酸羧化酶加氧酶并且在酸中释放核酮糖二磷酸羧化酶加氧酶。
15. 根据权利要求11所述的组合物，其中所述可转换试剂选自由以下组成的群组：式 IV中所述的化合物，其中R基团的身份如表2中所述，其中表2中的R1-R4基团对应于式IV 中的R1-R4基团，其中所述表中的化合物的N-H键中的一或多者在式IV中转化为C-N键。
16. 根据权利要求15所述的组合物，其中所述可转换试剂可以在酸中结合核酮糖二磷 酸羧化酶加氧酶并且在碱中释放核酮糖二磷酸羧化酶加氧酶。
17. 根据权利要求11所述的组合物，其中所述可转换试剂选自由以下组成的群组：式 IV中所述的化合物，其中R基团的身份如表3中所述，其中表3中的R1-R4基团对应于式IV 中的R1-R4基团，其中所述表中的化合物的N-H键中的一或多者在式IV中转化为C-N键。
18. 根据权利要求17所述的组合物，其中所述可转换试剂可以在碱中结合豆血红蛋白 并且在酸中释放豆血红蛋白。
19. 根据权利要求11所述的组合物，其中所述可转换试剂选自由以下组成的群组：式 IV中所述的化合物，其中R基团的身份如表4中所述，其中表4中的R1-R4基团对应于式IV 中的R1-R4基团，其中所述表中的化合物的N-H键中的一或多者在式IV中转化为C-N键。
20. 根据权利要求19所述的组合物，其中所述可转换试剂可以在酸中结合豆血红蛋白 并且在碱中释放豆血红蛋白。
21. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含非对映异构体的混合物。
22. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含对映异构体的混合物。
23. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含基本上纯的非对映异构体，其 中所述基本上纯的非对映异构体是指从其它非对映异构体纯化的多于70%的非对映异构 体。
24. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含基本上纯的对映异构体，其中 所述基本上纯的对映异构体是指从其它对映异构体纯化的多于70%的对映异构体。
25. 根据权利要求2所述的组合物，其中所述类肽是不可由蛋白酶降解的。
26. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述第一 pH大于7。
27. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述第一 pH小于7。
28. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述第二pH大于7。
29. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述第二pH小于7。
30. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述pH可转换试剂结合到底物。
31. 根据权利要求30所述的组合物，其中所述底物是选自包含以下的群组的珠子：琼 脂糖、琼脂糖凝胶、聚苯乙烯、苯乙烯、氧化铁、磁性的或顺磁性的。
32. 根据权利要求30所述的组合物，其中所述底物涂布有选自包含以下的群组的涂 层：二氧化硅、羧基官能团、醛官能团或N-羟基丁二酰亚胺官能团。
33. 根据权利要求30所述的组合物，其中所述底物涂布有能够结合伯胺和硫醇的官能 团。
34. 根据权利要求30所述的组合物，其中所述底物是用于色谱法的树脂的组分。
35. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述树脂用于蛋