一种电化学发光免疫分析仪用缓冲液及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医疗诊断仪器用试剂，尤其涉及一种电化学发光免疫分析仪用缓冲液 及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 目前，针对人体中疾病相关痕量物质的定量检测常用的方法有化学发光免疫法和 电化学发光免疫法，化学发光免疫发和电化学发光免疫法不但对检测者身体无害，检测敏 感度和精密度较高，而且试剂稳定，并可进行全自动分析，是理想的标记免疫测定方法。
[0003] 然而电化学发光免疫法以其高灵敏度(可达KTn~l(r17mol/L)和良好的重复性得 到了广泛的应用。电化学发光免疫法分为有机化合物的发光体系和无机物的发光体系。有 机发光物有酰肼类化合物、吖啶酯和光泽精等，无机化合物电化学发光体系中，最典型的发 光试剂是钌联吡啶化合物，该试剂在水溶液和有机溶液中的溶解度好，发光效率高，可进行 可逆的单电子反应，在电化学发光理论和应用研究中占有重要的地位。
[0004] 电化学发光反应的原理为：电化学发光（electro - chemiluminescence, ECL)是 一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光两 个过程。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3] 2+和电子供体三丙胺（TPA)在阳电极表面同 时各失去一个电子发生氧化反应。二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，后者是一种强氧 化剂。TPA被氧化成阳离子自由基TPA+%后者很不稳定，自发地失去一个质子（H+ )，形成 自由基TPA%这是一种非常强的还原剂。这两个高反应基团在电极表面迅速反应，三价的 [Ru(bpy)3] 3+被还原形成激发态的二价[Ru(bpy)3] 2+%能量来源于[Ru(bpy)3]3+和TPA*之 间存在的高电化学电位差。TPA #自身被氧化成二丙胺和丙醛。接着激发态的[Ru(bpy)3] 2+* 衰减成基态的[Ru (bpy) 3]2+，同时发射一个波长620nm的光子。这一过程在电极表面周而复 始地进行，产生许多光子，使光信号得以增强；以三联吡啶钌作为标记物，标记抗原或抗体， 通过免疫反应及ECL反应，即可进行电化学发光免疫测定。
[0005] 罗氏电化学发光免疫三丙胺清洗缓冲液（简称罗氏缓冲液）是适用于罗氏电化学 发光分析仪的缓冲液，该缓冲液不需要专门灌注或定标，可以长期使用延长测量池寿命。罗 氏的电化学发光分析仪用缓冲液通过以三联吡啶钌作为标记物，标记抗原或抗体，检测激 素、甲状腺功能、肿瘤标记物、传染病、心肌标记物和其他的骨标志，糖尿病和贫血等等疾病 的指标，在临床上有十分重要的意义。目前美国罗氏公司（ROCHE)实现了三丙胺（TPA)缓冲 液的工业化，该三丙胺缓冲液配方为磷酸盐缓冲液300mmol/L、三丙胺180mmol/L、去垢剂 =0. 1%、防腐剂，pH6. 8。该配方三丙胺的浓度为25g/L，使用的三丙胺浓度较高，三丙胺的 蒸气或雾对眼、粘膜和上呼吸道有和皮肤都有很强的刺激性，而且三丙胺的挥发性很强，对 操作人员和环境存在均较大的危害，不利于该试剂的推广和应用。
【发明内容】
[0006] 为了解决现有技术电化学发光免疫分析仪用缓冲液长期依赖进口的现状，试剂成 本高，三丙胺用量多的缺陷，本发明目的在于提供一种成本低廉、三丙胺量少，试剂性能优 越的电化学发光免疫分析仪用缓冲液及其制备方法。
[0007] 本发明提供的电化学发光免疫分析仪用缓冲液，其组分和含量包括：磷酸二 氢钾40. 0-50.0 g/L、吐温20 0.5-3. Og/L、十二烷基聚乙二醇醚0.1-1. 0 g/L、聚多卡 醇1.0-5.(^/1、三丙胺12.0-16.(^/1、柠檬酸0.1-1.0§/1，所述的缓冲液的口11值为 6. 5-7. 0。
[0008] 本发明的电化学发光免疫分析仪用缓冲液，优选的组分和含量为：磷酸二氢 钾45. 0-48.0 g/L、吐温20 0.5-1. 5g/L、十二烷基聚乙二醇醚0.4-0. 6g/L、聚多卡醇 1. 0-2. Og/L、三丙胺14. 0-16. 0 g/L、柠檬酸0? 5-0. 8g/L，所述的缓冲液的pH值为6. 5-7. 0。
[0009] 本发明的电化学发光免疫分析仪用缓冲液，进一步优选的组分和含量为：磷酸二 氢钾46.8 g/L、吐温20 l.Og/L、十二烷基聚乙二醇醚0.5g/L、聚多卡醇1.009g/L、三丙胺 15g/L、柠檬酸0. 6085g/L，所述的缓冲液的pH值为6. 8。
[0010] 另外，本发明还提供了一种电化学发光免疫分析仪用缓冲液的制备方法，包括如 下步骤： 按配方称取所需磷酸二氢钾、柠檬酸、聚多卡醇、吐温20和十二烷基聚乙二醇醚放入 烧杯中，加入适量的去离子水，加热搅拌至完全溶解，冷却后加入三丙胺，搅拌20min，搅拌 均匀后用去离子水定容至1L，用NaOH溶液调节pH值为6. 5-7.0,过滤，即为缓冲液。
[0011] 本发明的缓冲液经研究新加入聚多卡醇和吐温20,同时减少三丙胺的用量，三丙 胺的浓度为为12. 0-16. Og/L，而罗氏的三丙胺的浓度达25g/L，检测人员长期接触该缓冲 液，对其身体造成极大的影响，所以，降低毒性较大，挥发性强的三丙胺的浓度是保证检测 人员身体健康的重要保障。
[0012] 本发明的磷酸二氢钾主要起缓冲液的作用，维持反应体系的pH值，而且本发明聚 多卡醇、吐温20和十二烷基聚乙二醇醚主要是起增强发光的作用，提高发光效率，可以减 少三丙胺的用量。
[0013] 甲胎蛋白（AFP)是一种糖蛋白，正常情况下，这种蛋白主要来自胚胎的肝细胞， 胎儿出生后约两周甲胎蛋白从血液中消失，因此正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20 微克/升，AFP主要是检测诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标，本发明实施例2的电 化学发光免疫分析仪用缓冲液与罗氏缓冲液的AFP项目的测试结果对比相关线性R达到 0.9984。
[0014] 癌胚抗原（CEA)是大肠癌组织产生的一种糖蛋白，作为抗原可引起患者的免疫反 应。可广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌，也存在于正常胚胎的消化管组织中，在正常人 血清中也可有微量存在。癌胚抗原是一个广谱性肿瘤标志物，它能向人们反映出多种肿瘤 的存在，对大肠癌、乳腺癌和肺癌的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一个较好的肿 瘤标志物，本发明实施例2的电化学发光免疫分析仪用缓冲液与罗氏缓冲液的CEA项目的 测试结果对比相关线性R达到0. 9987。
[0015] 血清游离三碘甲腺原氨酸（FT3)，是诊断甲亢最灵敏的一项指标，血清游离甲状 腺素（FT4)，是反应甲状腺功能状态的标志物，促甲状腺激素（TSH)等项目，本发明实施例2 的电化学发光免疫分析仪用缓冲液与罗氏缓冲液的FT3项目和FT4项目的测试结果对比相 关线性R均达到0. 99以上，表现为良好的相关性。
[0016] 孕酮（PROG)是内分泌失调检查中重要的一项检查，如果过低则表明垂体和卵巢功 能低下，可能为无排卵或月经不调，或者先兆流产。本发明实施例2的电化学发光免疫分析 仪用缓冲液与罗氏缓冲液的PR0G项目的测试结果对比相关线性R达到0. 9999。
[0017] 本发明实施例1制备的电化学发光免疫分析仪用缓冲液与罗氏缓冲液的AFP、 CEA、FT3、FT4、TSH和PR0G项目的测试结果对比相关线性R可以达到0. 98以上，本发明实 施例3制备的电化学发光免疫分析仪用缓冲液与罗氏缓冲液的AFP