一种elisa检测中的血清稀释液的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分子检测技术领域，具体涉及一种ELISA检测中的血清稀释液。
【背景技术】
[0002] 在常规的ELISA试验中，大多使用PBST、含1% BSA的PBS等作为血清稀释液。对 于载体表达的蛋白做为包被用抗原的ELISA试验中，虽然抗原经纯化，纯度较高，但是还是 经常会出现本底颜色较深，OD值较高的情况，直接影响ELISA试验的结果判定。因此，有必 要提供一种效果更好的血清稀释液。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一种ELISA检测中的血清稀释液，即ELISA抗体检测试验中 的一抗（猪血清或是鸡血清）稀释液，主要应用于ELISA试验中一抗（猪血清或是鸡血清） 的稀释，能阻止ELISA试验中非特异性反应，降低阴性本底的OD值，提高ELISA试验的灵敏 性。
[0004] 本发明的血清稀释液，是通过大肠埃希氏杆菌的发酵菌液制备的。
[0005] 作为实施例的优选，本发明的血清稀释液的制备方法如下：收集大肠杆菌发酵液 菌体，将菌体溶于PBS缓冲液中，置于一 20°C冻存；将冻存菌液解冻后进行超声波裂解，裂 解液离心收集上清；然后将上清用〇. OlM的pH7. 2的PBS稀释至总蛋白含量为I. 2mg/ml完 成制备。
[0006] 上述的血清稀释液作为ELISA抗体检测试验中的一抗稀释液来使用；
[0007] 其中的一抗为猪血清或是鸡血清。
[0008] 本发明是制备了一种可以降低在ELISA试验中阴性本底的一抗稀释液，解决了在 ELISA试验过程中阴性本底高，灵敏性低的问题。本发明的工艺操作简单，对设备要求低，并 且能大量生产。
【具体实施方式】
[0009] 申请人发现用包被抗原包被于包被板后很容易与加入的一抗（猪或是鸡的血清） 结合形行抗原抗体结物，这种特异性反应在洗涤的过程中很难被洗掉，这是造成了本底颜 色较深的主要原因。在上述研宄的基础上从而促成了本发明。
[0010] 下面结合具体实施例来对本发明进行详细的描述。
[0011] 实施例1 :
[0012] 1、稀释液的制备
[0013] I. 1大肠埃希氏杆菌BL21 (E. coli BL21)菌液的制备：
[0014] 从LB培养平板上挑取大肠埃希氏杆菌BL21 (E. coli BL21)单菌落，转接于含LB 培养液的试管中，37°C培养过夜，制备饱和菌液。将饱和菌液转接到250ml的LB培养基中， 接种量约5%，培养8小时。6000转/分离心15分钟。将菌体溶于15mlPBS中置于一 20°C 冻存。
[0015] 1.2大肠埃希氏杆菌此21伍.(3〇1181^21)可溶蛋白的提取将冻存菌液解冻，超声 波裂解。置6000转/分，离心15分钟，收集上清。用BCA蛋白含量检测试剂盒测定蛋白含 量。然后将破菌液用〇. OlM pH7. 2PBS稀释至总蛋白含量为I. 2mg/ml。
[0016] 其中BCA法检测蛋白含量的具体步骤如下：
[0017] -、稀释BSA标准品用PBS稀释BSA标准品。
[0018] 表1:标准品的配制 [00191
【主权项】
1. 一种血清稀释液，其特征在于，所述的血清稀释液是通过大肠埃希氏杆菌的发酵菌 液制备的。
2. 权利要求1所述的血清稀释液，其特征在于，所述的血清稀释液的制备方法如下：收 集大肠杆菌发酵液菌体，将菌体溶于PBS缓冲液中，置于一 20°C冻存；将冻存菌液解冻后进 行超声波裂解，裂解液离心收集上清；然后将上清用PBS缓冲液稀释完成制备。
3. 权利要求1所述的血清稀释液，其特征在于，所述的PBS缓冲液浓度为0. 01M，其pH 值为7. 2。
4. 权利要求1所述的血清稀释液，其特征在于，所述的血清稀释液中总蛋白含量为 L2mg/ml〇
5. 权利要求1所述的血清稀释液作为ELISA抗体检测试验中的一抗稀释液的应用。
6. 如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的一抗为猪血清或是鸡血清。
【专利摘要】本发明提供一种ELISA检测中的血清稀释液，即ELISA抗体检测试验中的一抗稀释液，主要应用于ELISA试验中一抗的稀释，能阻止ELISA试验中非特异性反应，降低阴性本底的OD值，提高ELISA试验的灵敏性。本发明的血清稀释液，是通过大肠埃希氏杆菌的发酵菌液制备的。本发明的稀释液解决了在ELISA试验过程中阴性本底高，灵敏性低的问题。本发明的工艺操作简单，对设备要求低，并且能大量生产。
【IPC分类】G01N33-531, G01N33-96
【公开号】CN104730233
【申请号】CN201510151956
【发明人】徐保娟, 荣俊, 刘蕾, 郭伟伟, 宫晓, 朱艳梅, 王丽萍, 李陆梅, 孙健, 胡潇, 王树明, 宋新宇, 于晓云
【申请人】青岛易邦生物工程有限公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年4月2日