早期肾障碍的评价指标和其测定方法
【专利说明】早期肾障碍的评价指标和其测定方法 【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于确切评价糖尿病所致的肾功能疾病（特别是糖尿病性肾病）的初 期症状的评价指标和其测定方法。 【【背景技术】】
[0002] 糖尿病导致由持续的高血糖所致的血管并发症，合并细小血管症（网膜症、肾症、 神经障碍）和大血管症（脑心血管系统疾病）。在其中也是区分为细小血管症的糖尿病性 肾病在1998年数慢性肾小球肾炎是日本的透析疗法导入疾病的第1位，在2009年，在全透 析疗法导入者数中占44.5% (1万6549人），在医学一医疗经济上成为大的问题。再者，透 析疗法导入后的5年生存率是约50 %，现在仍然生命预后不良。因此，有早期发现糖尿病性 肾病的发症，早期治疗的必要性，但糖尿病性肾病至成为末期缺乏临床症状，不积极进行检 查时易漏过。从而，从糖尿病发症的早期积极进行检查，持续发症的诊断或病期的评价是不 可或缺的。
[0003] 在糖尿病性肾病的诊断中，由肾活体检查的组织学诊断是必要的。但是，对全部的 糖尿病患者施行肾活体检查是困难的，一般而言，除了临床经过或网膜症等的并发症的有 无之外，综合判断尿检查一肾功能检查所见等而诊断的情况多。因此现在，糖尿病性肾病的 早期诊断由微量白蛋白尿的出现进行。
[0004] 在日本，2005年的日本糖尿病学会和日本肾脏学会的糖尿病性肾病合同委员会 中，"糖尿病肾症的早期诊断基准"被改订。根据此基准，尿中白蛋白测定对象者在通常的试 验纸法是示尿蛋白阴性或1+程度的阳性的糖尿病患者。尿尽可能测定上午的随时尿，用免 疫测定法定量尿中白蛋白值（同时也测定尿中肌酸酐值（Cr))、3次测定中2次以上的尿中 白蛋白值是30~299mg/gCr，则作为微量白蛋白尿，诊断为糖尿病性早期肾症。在仅微量白 蛋白尿中，由于也无法否定糖尿病性肾病以外的诸病态，尿中IV型胶原值的升高或提示肾 肥大等的糖尿病性肾病变的存在的所见成为诊断的参考。
[0005] 另一方面，初期的慢性肾脏病（CKD :chronic kidney disease)-般而言缺乏自觉 症状，自尿异常开始，缓慢地肾功能降低而向末期肾功能衰竭进展。从而，由采尿的尿异常 的发现成为CKD早期检测的唯一的手段。在其中也是蛋白尿（包括微量白蛋白尿）与CKD 的进展密切相关，称为最重要的所见。
[0006] 最近、在糖尿病患者中报告了被称为"GFRdecliner"（肾小球过滤量：GFR: Glomerular Filtration Rate)或"早期肾功能降低（early renal function decline)" 的进行性的早期肾功能降低。无对其的明确的定义，但在不持续合并蛋白尿的糖尿病患者 中，尽管肾功能在正常范围内（60mL/min/1.73m 2以上），但进行性肾功能降低，与白蛋白尿 的增减无关系，确认至肾功能衰竭期的病例。在确认不到白蛋白尿的增加的GFRdecliner 的病例中，考虑了治疗的开始被延迟，无法充分地阻止向肾功能衰竭期的进行的可能性。 因此，由定期的肾功能的评价，可早期鉴定GFRdecliner，则与白蛋白尿的程度无关系，肾 功能尚在正常时期开始用于肾保护的治疗成为可能，期待是否可使其后的肾功能的降低 抑制或改善。由这些，仅用微量白蛋白尿进行糖尿病性肾病的早期诊断有局限，要求作为 GFRdecliner的预测因子的更敏锐的糖尿病性肾病的早期临床的指标的开发。
[0007] 但是，对于与白蛋白尿的程度无关系，肾功能尚在正常时期时开始用于肾保护的 治疗成为可能的指标或测定方法，尚处于未进行充分的探讨的情况。再有，关注到血中的特 定的蛋白质，进行着检查糖尿病性疾病的进行度。例如，报告有通过测定血中的脂联素，早 期判断糖尿病的进展度的方法（非专利文献1)。
[0008] 【现有技术文献】
[0009] 【非专利文献】
[0010] 非专利文献1 :桥田诚一等，"高灵敏度脂联素测定法的开发和向其运动一营养指 导的应用"德岛文理大学研宄纪要第78号7~20页（2009年） 【
【发明内容】
】
[0011]【发明要解决的技术课题】
[0012] 本发明的目的是提供用于早期检测肾障碍、进行适宜的生活指导、使肾障碍缓 解一退缩的肾障碍风险的指标和其测定评价方法。
[0013] 【解决课题的技术方案】
[0014] 本发明人应用利用非专利文献1的免疫复合物转移测定方法（ICT-EIA法）的高 分子脂联素测定方法，作为新的肾变异的指标对尿中高分子脂联素的可能性进行了探讨 (PCT/JP2012/055736)。其中，本发明人进行再探讨，评价探讨具体的患者的数据。结果，由 患者的肾小球过滤能力的差异，在血中和尿中的脂联素浓度见到差异。即，肾小球过滤能力 变差，则尿中脂联素浓度变高，所以相对于血中的脂联素浓度求出尿中滤出的脂联素比时， 得知在肾小球过滤能力差的患者中，与健康人比较示数十倍高的值。因此，本发明人发现尿 中/血中脂联素比可成为与白蛋白尿的倾向不同的新的肾障碍的早期指标。
[0015] 再者，本发明人发现，在健康者的尿中脂联素值中单分子脂联素所占的比例高，所 以由不测定单分子脂联素的脂联素测定方法更加明白尿中/血中脂联素比的差。即发现， 通过更特异性地测定HMW脂联素，测定评价尿中/血中脂联素比，以此尿中/血中脂联素比 作为指标，可作为肾障碍的早期指标使用。本发明人基于以上的见解完成本发明。
[0016] SP，本发明的要点如下。
[0017] (1)肾功能的评价指标，其特征在于是用免疫复合物转移测定方法（ICT-EDUi) 测定的尿中的脂联素浓度的测定值除以血中的脂联素浓度的数值。
[0018] (2)上述（1)所述的肾功能的评价指标，其中上述脂联素浓度是高分子量（HMW)脂 联素浓度。
[0019] (3)上述（1)或（2)的肾功能的评价指标，其特征在于是上述（1)或（2)的数值乘 以IO 4的数值。
[0020] (4)肾功能疾病的进行度评价方法，其特征在于，使用上述⑴~⑶所述的评价 指标。
[0021] (5)上述（4)所述的肾功能疾病的进行度评价方法，其特征在于，肾功能疾病是糖 尿病性肾病。
[0022] (6)肾功能疾病的预防或治疗方法，其特征在于，使用上述⑴~⑶的评价指标， 对于肾功能疾病患者及/或其罹患危险者进行介入疗法。
[0023] (7)上述（6)所述的肾功能疾病的预防或治疗方法，其特征在于，肾功能疾病是糖 尿病性肾病。
[0024] (8)上述（6)或（7)所述的糖尿病性疾病的预防或治疗方法，其中介入疗法是就餐 疗法、运动疗法或药物疗法。
[0025] 【发明效果】
[0026] 由本发明的ICT-EIA法取所得到的尿中和血中的脂联素浓度的比，通过将其作为 肾功能的评价指标，从而与白蛋白尿的程度无关系，肾功能尚在正常时期时开始用于肾保 护的治疗变得可能。结果，通过使用本发明的肾功能的评价指标的评价方法，作为糖尿病性 疾病的诊断，对于特别是问题多的糖尿病性肾病的早期发现或糖尿病罹患危险者的肾功能 障碍的判断或介入疗法后的效果判断也有用。 【【附图说明】】
[0027] 图1是表示本发明中使用的免疫复合物转移酶联免疫测定法（ICT-EIA法）的概 略的图。
[0028] 图2是关于受试者A~D的肾功能进行CKD阶段分类的图。受试者A和B是健康 人，受试者C和D中预计肾功能的降低。
[0029] 图3是使用受试者A~D的血清样品和尿样品，由Superdex柱依分子量进行分级 分离，探讨血中及尿中脂联素分子存在样式的图。鲁：表示血中的脂联素浓度（左轴）、?: 表示透析尿中的脂联素浓度（右轴）。级分No. 46前后的峰是HMW脂联素，级分No. 51前后 的峰是MMW脂联素，级分No. 58前后的峰是LMW脂联素。另外，低分子区域的级分No. 78前 后的峰对应于单分子脂联素。
[0030] 图4是测定受试者50名的尿中脂联素浓度（ng/mgCr)和肾功能指标的eGFROnL/ min/1. 73m2)，评价其相关关系的有无的图。显示尿中的脂联素浓度与eGFR成负的相关关 系。
[0031] 图5是表示，集约图4中得到的评价数据，整理为eGFR的各阶段（Gl、G2、G3a)，在 各阶段之中的尿中脂联素浓度的平均值和偏差的图。尿中脂联素浓度在阶段G2相比阶段 Gl更显著地变高。
[0032] 图6是表示，与图5同样地集约图4中得到的评价数据，整理为eGFR的各阶段（Gl、 G2、G3a)，在各阶段之中的尿中白蛋白浓度的平均和偏差的图。尿中白蛋白浓度在阶段G3a 相比阶段G2更显著地变高。
[0033] 图7是以上述的eGFR的阶段Gl中的尿中脂联素浓度和尿中白蛋白浓度的各平均 作为1，算定阶段G2和G3a的各受试者的尿中脂联素浓度和尿中白蛋白浓度的相对值，将该 数值在eGFR的每各阶段表示的图。
[0034] 【实施方式】
[0035]【本发明的第一的实施方式】
[0036] 本发明的第一的实施方式是涉及肾功能的评价指标的发明，其特征在于，使用用 免疫复合物转移测定方法（ICT-EIA法）评价的血中和尿中的脂联素浓度的数值，取其比 (尿中的脂联素浓度/血中的脂联素浓度）。
[0037] 本发明的"免疫复合物转移酶联免疫测定方法（ICT-EIA法）"是关于非竞争 结合法（夹心）酶免疫测定法（EIA)的高灵敏度化的改良方法的方法（参照非专利文 献1)。如图1所示，用ICT-EIA法可降低使用的抗体的非特异吸附（背景），所以多种高 分子生理活性物质的amol水平以下（zmol)的测定变得可能（参照Hashida S，et al.， Biotechnology Annual Review Vol. I, (1995)pp 403-451, Elsevier Science Publishers B. V. , Amsterdam) 〇
[0038] 本发明的"脂联素"是指自脂肪细胞分泌的脂肪细胞因子之一，是由244个的氨基 酸组成的蛋白质，被报告在血中以3聚体（LMW :低分子量）作为基本结构，存在6聚体（MMW : 中分子量）、18聚体（HMW:高分子量）等数种的多聚体。其血中浓度以高达5~10 μ g/mL 的浓度存在，被报告有抗动脉硬化作用或胰岛素抵抗性改善作用等的生理活性。再者近年、 这些的生理作用和多聚体结构的作用被关注，高分子多聚体水平或高分子多聚体/总量比 是，在