一种二十五味珊瑚丸的一测多评快速定性与定量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种二十五味珊瑚丸的一测多评快速定性与定量检测方法。快速定性 方法是指采用薄层鉴别方法，对红花、西红花、打箭菊、甘草、獐牙菜、诃子、木香、丁香和藏 菖蒲9味中药的快速薄层鉴别；快速定量方法是指用高效液相色谱方法，双通道不同检测 波长，对丁香酚、木香烃内酯和去氢木香烃内酯的一测三评定量测定。
【背景技术】
[0002] 在中药复方制剂中，特别是二十五味以上组方的复方制剂，由于药味多，各药味的 剂量低，众多的微量有效成分相互干扰，薄层鉴别率低，定量测定指标少，以2010年版中国 药典一部为例，收载的二十五味以上的复方制剂，粗略的计算了一下约有14个品种，其薄 层鉴别收载率平均为12%左右，定量测定指标，按测定的成分计算，平均不到1种成分。也 就是说在一个二十五味以上组方的制剂中，只有3-4味药材能够识别其有无投料，一种成 分能控制其含量，而众多的药材与有效成分是无法控制其投料情况与含量的，质量标准识 别水平太低，无法给质量监督提供有力支撑。
[0003] 即便在质量检测指标相对较多的品种中，薄层鉴别也多是一个品种，如有N项鉴 另IJ，就要制备N种供试品溶液，N块薄层板，展开N次，鉴别N味药材的传统鉴别模式。为排 除干扰，样品的前处理程序多复杂、烦琐，需用大量的有机试剂反复纯化处理，费力、费时、 费试剂、污染环境，危害健康，检测周期长。这样，一个含6~7项薄层鉴别和二项含量测定 的质量标准检测完成，一般要花费一周的时间，如遇复试，时间翻倍，检测速度严重制约着 中药现代化生产速度。所以寻找简便、快捷的检测方法、提高检测效率、降低检测成本，也是 中药质量控制必须突破的难关。以中国药典2010年版一部收载的金蒲胶囊质量标准为例 剖析如下。该品种由24味中药组成，其标准项下收载了 7项薄层鉴别和两项含量测定。具 体方法如下：
[0004] 【鉴别】(1)取本品内容物4g，加甲醇20ml，浸渍10分钟，滤过，取滤液10ml，蒸干， 残渣加水IOml使溶解，再加盐酸lml，置水浴中加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚振摇提 取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液。另取 大黄对照药材0. lg，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以体积比为15 : 5 : 1的30~60°C的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶 液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色 谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变成红色。
[0005] (2)取本品内容物4g，加浓氨试液Iml与三氯甲烷20ml，浸渍1小时，时时振摇，滤 过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加乙醇 制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液20 μ 1、对照品溶液1 μ 1，分别 点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10 : 6 : 1的正己烷-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展 开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，挥尽薄层板上吸附的碘，置紫外光灯365nm 下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0006] (3)取本品内容物3g，加三氯甲烷25ml，加热回流5小时，滤过，滤液中加活性炭 0. 3g，振摇，放置30分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶 液。另取华蟾酥毒基对照品，加三氯甲烷制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取 供试品溶液10 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4 : 3 : 3 的环己烷-三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105°C加热 至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0007] (4)取本品内容物6g，加80 %丙酮溶液20ml，超声处理30分钟，静置，取上清液， 作为供试品溶液。另取红花对照药材〇.5g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各 1〇μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为7 : 0.4 : 2 : 3的乙酸乙酯-甲醇-甲 酸-水为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相 同颜色的斑点。
[0008] (5)取本品内容物6g，加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加 水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加1 %氢氧化 钠溶液洗涤2次，每次20ml，取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗至中性，取正丁醇液，蒸干， 残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含Img 的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液10 μ 1、对照品溶液5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以体积比为13 : 7 : 2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，l〇5°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色斑点；置紫外光灯365nm下检视，显相同颜色的荧光斑点。
[0009] (6)取本品内容物5g，加三氯甲烷20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加 甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含Img的溶液，作为 对照品溶液。吸取供试品溶液10 μ 1、对照品溶液4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 体积比为15 : 7 : 5的异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。
[0010] ⑵取本品内容物10g，加三氯甲烷30ml，加热回流4小时，放冷，滤过，滤液蒸干， 残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液。另取穿山甲对照药材2g，同法制成对照药 材溶液。吸取上述两种溶液各1〇μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为20 : 1 的甲苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干。喷以体积比为9 : 1的醋酐-硫酸的混合溶液， 80°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的 斑点。
[0011] 苦参含量测定
[0012] 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为 18 : 18 : 70 : 0.1的乙腈-甲醇-pH6. 8的磷酸盐缓冲液-三乙胺为流动相，检测波长为 220nm，理论板数，按苦参碱峰计算不低于8000。
[0013] 对照品溶液制备取苦参碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60 μ g的 溶液，即得。
[0014] 供试品溶液制备取装量差异项下的本品内容物，研细，取约0. 5g，精密称定，置具 塞锥形瓶中，加浓氨溶液2ml使湿润，再加三氯甲烷25ml，以功率250w，频率33kHz，超声处 理20分钟，滤过，取滤液，再用三氯甲烷洗涤残渣、容器及滤器4次，每次5ml，滤过，合并滤 液，置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续 滤液，即得。
[0015] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。
[0016] 本品每粒含苦参以苦参碱C16H24N2O计，不得少于0. 16mg。
[0017] 蟾酥含量测定
[0018] 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为 43.5 : 56. 5的乙腈-水为流动相，检测波长为292nm，理论板数，按华蟾酥毒基峰计算应不 低于4000。
[0019] 对照品溶液制备取华蟾酥毒基对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 〇· 16mg的溶液，即得。
[0020] 供试品溶液制备取本品40粒的内容物，精密称定，混匀，研细，取约5g，精密称 定，置索氏提取器中，加三氯甲烷适量，加热回流5小时，滤过，滤液加活性炭0. 3g，振摇，放 置5分钟，滤过，用三氯甲烷10ml，分次洗涤滤器及滤渣，合并滤液，蒸干，残渣加甲醇适量 使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0021] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供