溶液，用水定容至10mL，充分振荡混合，在530nm处测定反应后混合溶液的吸光度值，得到如图2所示的反应后混合溶液的吸光度值对H2O2用量曲线，由图2可知，随着H2O2溶液用量的增加，反应后混合溶液的吸光度增大，当用量达到0.50mL时，反应后混合溶液的吸光度值变化不大，因此确定了 H2O2溶液的最佳用量为0.50mL ；
[0030](3)以抗坏血酸作为羟基自由基的清除剂，向比色管中分别加入0.1mL,0.2mL，0.3mL，0.4mL，0.5mL，0.6mL，0.7mL，0.8mL，0.9mL，1.0mT,的 lmg/mL 的抗坏血酸溶液，加入2.0OmL 0.01mol/L的水杨酸溶液，0.50mL的FeSO4溶液，0.50mL的H 202溶液，启动反应，充分振荡混合，在530nm处测定反应后混合溶液的吸光度值，得到如图4所示的不同浓度抗坏血酸对反应后混合溶液颜色的标准对照图；计算不同量的抗坏血酸相对羟基自由基的清除率，对结果进行线性拟合，得到如图3所示的抗坏血酸用量对羟基自由基清除率的标准曲线；
[0031](4)以破壁的灵芝孢子粉作为羟基自由基的清除剂，向比色管中加入0.03,0.05、0.12g的破壁灵芝孢子粉颗粒，加入2.0OmL 0.01mol/L的水杨酸溶液，0.50mL的FeSO4S液，0.50mL的H2O2溶液，启动反应，充分振荡混合，得到反应后混合溶液颜色如图5所示，将其与图4对照后，得出抗坏血酸用量参数，将抗坏血酸用量参数带入如图1所示的抗坏血酸用量对羟基自由基清除率的标准曲线，最终得到结果:0.03,0.05,0.12g的破壁灵芝孢子粉颗粒在此情况下对羟基自由基的清除率分别为63%、76%、85%。
[0032]实施例2:
[0033]本实施例与实施例一相同，不同之处在于步骤(4):
[0034](4)以破壁的灵芝孢子粉作为羟基自由基的清除剂，向比色管中加入0.02,0.04、0.1Og的破壁灵芝孢子粉颗粒，加入2.0OmL 0.01mol/L的水杨酸溶液，0.50mL的FeSO4S液，0.50mL的H2O2溶液，启动反应，充分振荡混合，得到反应后混合溶液颜色如图6所示，将其与图4对照后，得出抗坏血酸用量参数，将抗坏血酸用量参数带入如图3所示的抗坏血酸用量对羟基自由基清除率的标准曲线，最终得到结果:0.02,0.04,0.1Og的破壁灵芝孢子粉颗粒在此情况下对羟基自由基的清除率分别为63%、76%、85%。
[0035]实施例3:
[0036]本实施例与实施例一相同，不同之处在于步骤(4):
[0037](4)准确称取灵芝破壁孢子粉3.0g,以料液比1:15加入蒸馏水45.0g，在37°C下超声提取35min，超声结束后将提取液进行离心，取上层清液进行浓缩，浓缩至10mL。以破壁的灵芝孢子粉作为羟基自由基的清除剂，向比色管中加入0.3,0.5,0.9mL的破壁灵芝孢子粉颗粒，加入2.0OmL 0.01mol/L的水杨酸溶液，0.50mL的FeSO4溶液，0.50mL的H 202溶液，启动反应，充分振荡混合，得到反应后混合溶液颜色如图7所示，将其与图4对照后，得出抗坏血酸用量参数，将抗坏血酸用量参数带入如图3所示的抗坏血酸用量对羟基自由基清除率的标准曲线，最终得到结果:0.3,0.5,0.9mL的破壁灵芝孢子粉颗粒在此情况下对羟基自由基的清除率分别为15%、28%、47%。
[0038]实施例4:
[0039]本实施例与实施例一相同，不同之处在于步骤(4):
[0040](4)准确称取灵芝破壁孢子粉3.0g,以料液比1:15加入蒸馏水45.0g，在37°C下超声提取35min，超声结束后将提取液进行离心，取上层清液进行浓缩，浓缩至10mL。以破壁的灵芝孢子粉作为羟基自由基的清除剂，向比色管中加入0.4,0.7,0.9mL的破壁灵芝孢子粉颗粒，加入2.0OmL 0.01mol/L的水杨酸溶液，0.50mL的FeSO4溶液，0.50mL的H 202溶液，启动反应，充分振荡混合，得到反应后混合溶液颜色如图8所示，将其与图4对照后，得出抗坏血酸用量参数，将抗坏血酸用量参数带入如图3所示的抗坏血酸用量对羟基自由基清除率的标准曲线，最终得到结果:0.4、0.7、0.9mL的破壁灵芝孢子粉颗粒在此情况下对羟基自由基的清除率分别为38 %、47 %、57 %。
【主权项】
1.一种灵芝孢子粉抗氧化性的可视分析方法，其包括以下步骤: (1)向各组比色管中加入定量的水杨酸溶液和H2O2溶液，再分别加入不同量的可溶性Fe2+溶液，加水定容各组比色管，振荡，在530nm处测定反应后混合溶液的吸光度值，确定Fe2+的最佳用量； (2)向各组比色管中加入与步骤(I)等量的水杨酸溶液和最佳用量的可溶性Fe2+溶液，再分别加入不同量的H2O2溶液，加水定容各组比色管，振荡，在530nm处测定反应后混合溶液的吸光度值，确定H2O2的最佳用量； (3)向各组比色管中分别加入不同量的抗坏血酸溶液，再依次加入与步骤(I)等量的水杨酸溶液以及最佳用量的可溶性Fe2+溶液和H2O2溶液，振荡，在530nm处测定反应后混合溶液的吸光度值，得到不同浓度抗坏血酸对反应后混合溶液颜色的标准对照图；计算不同量的抗坏血酸相对羟基自由基的清除率，对结果进行线性拟合，得到抗坏血酸用量对羟基自由基清除率的标准曲线； (4)向各组比色管中分别加入不同待测量的破壁灵芝孢子粉颗粒，再依次加入与步骤(I)等量的水杨酸溶液以及最佳用量的可溶性Fe2+溶液和H2O2溶液，振荡，观察反应得到的混合溶液颜色，并与步骤(3)得到的不同浓度抗坏血酸对反应后混合溶液颜色的标准对照图进行比对，由此得出抗坏血酸用量参数，将抗坏血酸用量参数带入步骤(3)得到的抗坏血酸用量对羟基自由基清除率的标准曲线，从而可以得到分别对应不同待测量的破壁灵芝孢子粉颗粒对羟基自由基的清除率。2.如权利要求1所述的灵芝孢子粉抗氧化性的可视分析方法，其特征在于:所述H2O2和Fe2+的最佳用量摩尔比为(10-60): (1-10)。3.如权利要求2所述的灵芝孢子粉抗氧化性的可视分析方法，其特征在于:所述水杨酸溶液浓度为0.01-1.0moI/LO4.如权利要求2所述的灵芝孢子粉抗氧化性的可视分析方法，其特征在于:所述Fe2+溶液浓度为0.001-0.lmol/Lo5.如权利要求2所述的灵芝孢子粉抗氧化性的可视分析方法，其特征在于:所述H202溶液的浓度为0.5-50mol/Lo6.如权利要求1所述的灵芝孢子粉抗氧化性的可视分析方法，其特征在于:所述Fe2+溶液采用FeSO4溶液或FeCl 2溶液。
【专利摘要】本发明以水杨酸作为Fenton反应产生羟基自由基的显色剂，反应生成的二羟基苯甲酸在530nm处有最大吸收的原理，分别确定反应体系所需的最佳Fe2+和H2O2的用量，分别以抗坏血酸和破壁的灵芝孢子粉作为羟基自由基的清除剂，从而得到破壁的灵芝孢子粉颗粒对羟基自由基的清除率；此外，通过不同浓度抗坏血酸对反应后混合溶液颜色的标准对照图和抗坏血酸用量对羟基自由基清除率的标准曲线，从而通过反应得到的混合溶液颜色比对实现对灵芝孢子粉抗氧化性的可视分析，具有操作简单、原料易得、价格便宜、反应条件温和、无毒等优点，对灵芝孢子粉抗氧化性能的探究为灵芝孢子粉的应用提供了理论参考。
【IPC分类】G01N21/78, G01N21/31
【公开号】CN105021541
【申请号】CN201510357789
【发明人】宋功武, 何瑜, 钟亚平, 邓淳, 刘潇
【申请人】湖北大学
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年6月25日