一种鉴别牦牛肉产品真伪的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种鉴别牦牛肉产品真伪的方法。
【背景技术】
[0002] 牦牛主要生长在3000m以上高海拔、低气压、冷季长、牧草生长期短、枯草期长、寒 冷、暖季短的高寒地区。世界92%的牦牛在中国，中国95%的牦牛生长在青藏高原。由于青 藏高原高山环绕，地形封闭，地处边陲，草场的生长环境无任何抗生素及其他化学品污染， 是难得的天然牧场，牦牛除觅食野青草外，还吃冬虫夏草、雪莲等天然药用植物。牦牛肉蛋 白质含量高、脂肪含量低、矿物质丰富、氨基酸结构比例合理，且胡萝卜素含量丰富。因此， 牦牛肉营养价值高、安全，是广受消费者青睐的天然绿色食品。受经济利益驱动，一些不法 商贩常用普通牛肉代替牦牛肉，欺骗消费者，造成社会诚信体系缺失。目前仅是通过感官区 分牦牛肉和普通牛肉产品，无客观的检测分析方法。因此，急需建立科学的技术对其进行监 督和监管，促进牦牛肉产业的健康发展，保障消费者的权益，提高消费者的消费信心，促进 社会诚信体系建设。
【发明内容】
[0003] 本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优 点。
[0004] 本发明的另一个目的是提供一种鉴别牦牛肉产品真伪的方法，本发明的方法利用 稳定碳、氮、氢同位素指纹分析区分牦牛肉产品和普通牛肉产品，利用客观检测分析方法， 可快速判别牛肉样品的来源，解决了目前仅是通过感官区分牦牛肉和普通牛肉产品、普通 牛肉产品和牦牛肉产品鉴别困难的问题。
[0005] 本发明还有一个目的是提供一种利用δ 13C%。、δ 15N%。和δ 2H%。三项指标相结合的 鉴别模型，本发明以普通牛肉和牦牛肉中的δ 13C%。、δ 15N%。和δ 2H%。为数据来源，建立了该 鉴别模型，来区分牦牛肉和普通牛肉产品，以解决牛肉产品溯源地不明确的问题，防止不法 商贩利用普通牛肉代替牦牛肉。
[0006] 本发明提供的技术方案为：
[0007] -种鉴别牦牛肉产品真伪的方法，包括如下步骤：
[0008] 测定待鉴别牛肉样品中稳定碳同位素比率δ 13C%。、稳定氮同位素比率δ 15N%。和 稳定氢同位素比率S 2H%。；
[0009] 将待鉴别牛肉的δ 13c%。、δ 15N%。、和δ 2H%。的数值代入到鉴别模型Y普通牛肉和Y耗牛 肉中进行计算得到Y普通牛肉和Y牦牛肉数值，其中，
[0010] = -3. 312 δ 13C+5. 980 δ 15N-O. 631 δ 2Η-79. 099
[0011] Y耗牛肉=-5· 249 δ 13C+3. 791 δ 15N-O. 640 δ 2H-IlO. 627 ;
[0012] 比较YjP Y 2的数值，若Y > Yft?，则判定所述待鉴别牛肉样品为普通牛肉 广品，右Y普通牛肉< Y牦牛肉， 则判定所述待鉴别牛肉样品为牦牛肉产品。
[0013] 优选的是，所述的鉴别牦牛肉产品真伪的方法中，建立所述鉴别模型Yft 的具体方法包括如下步骤：
[0014] 步骤一、分别提取多个普通牛肉样品和多个牦牛肉样品的蛋白样品，之后脱脂并 过100目筛收集筛下物作为待检测样品；
[0015] 步骤二、将步骤一中得到的待检测样品转化为气体，之后利用同位素比率质谱仪 检测每个待检测样品，以得到各样品的稳定碳同位素丰度比、稳定氮同位素丰度比、和稳定 氢同位素丰度比；
[0016] 步骤三、将各样品的稳定碳同位素丰度比、稳定氮同位素丰度比、和稳定氢同位 素丰度比的数值代入到公式S%。= (R#s/Rtt^-DXlOOO中，得到待检测样品的δ13(：%。、 δ 15Ν%。、和 δ2Η%。；以及，
[0017] 步骤四、将步骤三中得到的δ 13c%。、δ 15Ν%。、和δ 2Η%。均输入到SPSS软件中，利用 费歇线性判别分析方法，推导得到所述鉴别模型Yiffl+^和 w。
[0018] 优选的是，所述的鉴别牦牛肉产品真伪的方法中，所述步骤一中，所述普通牛肉样 品具有60个，采集自中国西北、西南、中原和东北的肉牛主产区；
[0019] 所述牦牛肉样品具有113个，采集自中国牦牛主产区青海和西藏。
[0020] 优选的是，所述的鉴别牦牛肉产品真伪的方法中，所述步骤二中，将待检测样品转 化为气体，之后利用同位素比率质谱仪检测每个待检测样品，以得到各样品的稳定碳同位 素丰度比、稳定氮同位素丰度比、和稳定氢同位素丰度比的具体步骤包括：
[0021] (2. 1)取2-3mg待检测样品，首先将该2-3mg待检测样品经过元素分析仪转化为 CO2气体和N2，然后利用Conflo III型稀释仪稀释后，再利用同位素比率质谱仪检测每个待 检测样品，以得到各样品的稳定碳同位素丰度比和稳定氮同位素丰度比；以及，
[0022] (2. 2)取各个0. 2mg待检测样品装入银杯中，折成小球，并按顺序放入酶联免疫板 中，于室温平衡48h，之后经过元素分析仪转化为CO和H 2，然后利用ConfIo III型稀释仪 稀释后，再利用同位素比率质谱仪检测每个待检测样品，以得到各样品的稳定氢同位素丰 度比。
[0023] 优选的是，所述的鉴别牦牛肉产品真伪的方法中，所述步骤（2. 1)中，元素分析仪 的工作参数为：氧化炉温度为l〇20°C，还原炉温度为600°C，载气氦气流量为230ml/min ;
[0024] 所述Conflo III型稀释仪的工作参数为：He稀释压力为4bar，CO2参考气压力为 4bar，N2参考气压力为4bar ;
[0025] 同位素比率质谱仪条件：用δ 13CPDB = -16. 00%。标定(302钢瓶，用δ 15Nair = 0. 4%。标定N2钢瓶，用标定的钢瓶气作为标准。
[0026] 优选的是，所述的鉴别牦牛肉产品真伪的方法中，所述步骤（2. 2)中，同位素比率 质谱仪的工作参数为：样品裂解温度为1450°C，He载气流速为120mL · min \ He稀释压力 为 4bar。
[0027] 优选的是，所述的鉴别牦牛肉产品真伪的方法中，所述步骤一中，分别提取多个普 通牛肉样品和多个牦牛肉样品的蛋白样品的具体过程包括：
[0028] 将牛肉样品切成小块，置于冷冻干燥机中干燥至恒重，之后研磨为100目以下的 粉末，然后向研磨后的样品中按照质量体积比3 : 70加入沸程为60_90°C的石油醚，之后于 165°C度浸泡30分钟，再用自动索式抽提器脱脂处理2h，收集脱脂后的粗蛋白样品，过100 目筛收集筛下物即得到蛋白样品。
[0029] 优选的是，所述的鉴别牦牛肉产品真伪的方法中，测定待鉴别牛肉样品中稳定碳 同位素比率、稳定氮同位素比率和稳定氢同位素比率的具体方法包括：首先提取该待鉴别 牛肉样品的蛋白样品，然后将所述待鉴别牛肉样品的蛋白样品转化为气体，之后利用同位 素比率质谱仪检测该你蛋白样品，以得到待鉴别牛肉样品的稳定碳同位素丰度比率、稳定 氮同位素丰度比率和稳定氮同位素丰度比率。
[0030] 本发明至少包括以下有益效果：
[0031] 由于牦牛生长环境的特殊性，其体内各种元素的含量肯定也与其他地区普通养殖 或自然生长的牛肉不同。本发明以此为依据，以采自全国各地的普通牛肉和采自牦牛主产 区青海和西藏的牦牛肉中的S 13C%。、δ 15N%。和δ 2H%。为数据来源，通过化学计量法建立了 普通牛肉和牦牛肉的鉴别模型，来区分牦牛肉和普通牛肉产品，以解决牛肉产品溯源地不 明确的问题，防止不法商贩利用普通牛肉代替牦牛肉。本发明的技术简单、方便、可操作性 强，判别率能达到97%以上，具有快速、经济、实用的特点。
[0032] 本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本 发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【具体实施方式】
[0033] 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书 文字能够据以实施。
[0034] 应当理解，本文所使用的诸如"具有"、"包含"以及"包括"术语并不配出一个或多 个其它元件或其组合的存在或添加。
[0035] 本发明提供一种鉴别牦牛肉产品真伪的方法，包括如下步骤：
[0036] 测定待鉴别牛肉样品中稳定碳同位素比率δ 13C%。、稳定氮同位素比率δ 15N%。和 稳定氢同位素比率S 2H%。；
[0037] 将待鉴别牛肉的δ 13C%。、δ 15N%。、和δ 2H%。的数值代