一种脂肪酶检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种脂肪酶检测试剂盒。
[0002]
【背景技术】
[0003] 脂肪酶（Lipase，甘油酯水解酶，LPS)隶属于羧基酯水解酶类，是一种水解长链脂 肪酸甘油酯的酶，能够逐步的将甘油三酯水解成甘油和脂肪酸，是胰腺分泌的消化酶之一。 除血清外，在胃、小肠粘膜、肺、白细胞、脂肪细胞、乳汁等处也可测到脂肪酶活性。正常血 液中，仅有少量脂肪酶，血中脂肪酶易被肾脏清除，当胰腺分泌亢进，胰管受阻或胰腺受损 伤或坏死时，脂肪酶逆流或直接接入血液，使血中脂肪酶活力增加。正常情况下，胰腺中LPS 浓度是血清的20000倍，是肝脏、十二指肠的100倍左右。当发生急性腮腺炎时，LPS分泌增 加，使高浓度的LPS进入血液中并呈规律性增高，表现为：血LPS在急性腮腺炎发病后4~ 8h开始增高，24h达到峰值，持续8~14d后恢复正常，灵敏度：80%~100%，特异性：84%~ 96%。血清LPS表达水平与急性腮腺炎病情进展程度成显著正相关，是急性腮腺炎病情的主 要监测指标。
[0004] 目前，实验室常用的LPS测定方法有滴定法、pH-Stat法、比浊法及荧光测定法。滴 定法是经典方法，但该方法灵敏度差，需用大量血清，反应时间长，此外橄榄油乳剂质量的 优劣也直接影响脂肪酶活力测定结果的准确性，现已少用；pH-Stat法因其费力、费时，难 以自动化及需特殊的仪器而未被广泛采用；比浊测定法测定标本的结果中约有3%-5%的吸 光度因分子聚集而出现负结果；荧光测定法是一种方便，特异和灵敏的脂肪酶活性测定方 法，但是需要的设备昂贵，难以适应常规临床化学实验室应用。
[0005] 脂肪酶检测试剂盒是基于酶显色法，采用1，2-邻-二月桂宗甘油-3-戊二 酸-(6'-甲基试卤灵）-酯作为底物与脂肪酶反应产生甲基试卤灵，在570nm波长处根据产 物的甲基试卤灵生成速率测定脂肪酶活性。该方法是一种无需预处理样本，技术和设备要 求不高，而精密度和特异性更高的分析方法。由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动 化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。但是普通的脂肪酶酶显色法检测试剂中由 于存在酶，会使该试剂的稳定性受到影响，不利于试剂的长期保存，从而造成准确度差及浪 费的不良后果。
【发明内容】
[0006]针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种脂肪酶检测试剂盒。该试剂盒与 常规的试剂盒相比，稳定性好，准确度高，线性范围好，分析灵敏度高，有利于试剂在临床上 的推广应用。
[0007]本发明是通过以下措施实现的： 一种脂肪酶酶检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、试剂R2和校准品，其中试剂R1 组成为： pH7· 2Tris缓冲液 lOOmmol/L 牛磺脱氧胆酸 35mmol/L 氯化钠 40mmol/L 试剂R2组成为： pH4. 0酒石酸缓冲液 9. 5mmol/L 共脂肪酶 500U/L 1，2邻-二月桂宗甘油_3_戊二酸-(6' -甲基试齒灵）-酯0. 2mmol/L4-甲酰苯基硼酸 0.01% 葡甘露聚糖 （λ5-1mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通100 1% BSA 0.l-lg/L〇
[0008] 所述试剂R1和试剂R2在使用时的比例为R1 :R2=2 :1。
[0009] 本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行，其具体使用方法如 图1所示： 本发明所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
[0010] 加入生理盐水、样本或校准品3μ1，之后再加入R1试剂200μ1预孵育5min后再 加入100μ1的试剂R2反应5min后，读取两次吸光度值，并计算ΔΑ/min。
[0011] 本发明的有益效果： 本发明提供的脂肪酶酶显色法检测试剂盒，通过在试剂R2中加入了由4-甲酰苯基硼 酸（4-FPBA)、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA组成的复合稳定剂，各组分协同作 用使试剂稳定性能优异，解决了酶长期保存不稳定这一难题，在试验中它能增加酶的稳定 时间，而不会影响酶的活性，从而有效地增强了试剂盒的稳定性，却不会对试剂的准确度和 分析灵敏度产生影响，有利于该试剂在市场中进一步的推广。
【附图说明】
[0012] 图1本发明试剂在具有双试剂功能的自动生化分析仪上的具体操作示意图； 图2实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性； 图3实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性； 图4实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性。
【具体实施方式】
[0013] 为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步详细说明。
[0014] 实施例1 市场上获得认可的一种准确度优异的脂肪酶试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
[0015] 其中试剂R1组成为： pH7. 2Tris缓冲液 100mmol/L 氯化钠 40mmol/L 牛磺脱氧胆酸 35mmol/L 试剂R2组成为： 酒石酸缓冲液pH4. 0 9. 5mmol/L 共脂肪酶 500U/L 1，2邻-二月桂宗甘油_3_戊二酸-(6' -甲基试齒灵）-酯 0. 2mmol/L本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的东芝120自 动分析仪，操作如下： 加入生理盐水、样本或校准品3μ1，之后再加入R1试剂200μ1预孵育5min后再加入 100μ1的试剂R2反应5min后，读取两次吸光度值，并计算ΔA/min。
[0016] 本实施例所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
[0017] 实施例2 一种脂肪酶检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
[0018] 其中试剂R1组成为： pH7. 2Tris缓冲液 100mmol/L 氯化钠 40mmol/L 牛磺脱氧胆酸 35mmol/L 试剂R2组成为： 酒石酸缓冲液pH 4. 0 9. 5mmol/L 共脂肪酶 500U/L 1，2邻-二月桂宗甘油-3-戊二 酸-(6' -甲基试齒灵）-酯 0· 2mmol/L 4-FPBA 0.01% 葡甘露聚糖 0. 5mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通100 1% BSA 0.lg/L 具体测定方法同实施例1。
[0019] 实施例3 一种脂肪酶检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
[0020] 其中试剂R1组成为： pH7. 2Tris缓冲液 100mmol/L 氯化钠 40mmol/L 牛磺脱氧胆酸 35mmol/L 试剂R2组成为： 酒石酸缓冲液pH 4. 0 9. 5mmol/L 共脂肪酶 500U/L 1，2邻-二月桂宗甘油-3-戊二 酸-(6' -甲基试齒灵）-酯 0· 2mmol/L 4-FPBA 0.01% 葡甘露聚糖 0. 8mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通100 1% BSA 0.5g/L 具体测定方法同实施例1。
[0021] 实施例4 一种脂肪酶检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
[0022] 其中试剂R1组成为： pH7. 2Tris缓冲液 100mmol/L 氯化钠 40mmol/L 牛磺脱氧胆酸 35mmol/L 试剂R2组成为： 酒石酸缓冲液pH4. 0 9. 5mmol/L 共脂肪酶 500U/L 1，2邻-二月桂宗甘油-3-戊二 酸-(6' -甲基试齒灵）-酯 0· 2mmol/L 4-FPBA 0.01% 葡甘露聚糖 1mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通100 1% BSAlg/L 具体测定方法同实施例1。
[0023] 对上述实施例1-4中制得的试剂盒分析性能进行实验验证。
[0024] 准确度验证实验： 将实施例2、3、4的试剂盒作为实验组，实施例1中市场上获得认可的准确度优异的脂 肪酶试剂盒作为对照组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测的结果如图1-图3。
[0025] 通过图1-图3的检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒与对照检测试剂盒的检 测结果线性相关系数r分别为0. 9971、0. 9985、0. 9981，相关性比较好，表明本发明的试剂 盒与市场上获得认可的具有优异准确度的脂肪酶检测试剂盒有高度一致性，证明本发明试 剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
[0026] 线性相关性验证实验： 找到脂肪酶高值样本为700U/L，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本， 依次为700U/L、560U/L、420U/L、280U/L、140U/L、0U/L浓度的样本，每个浓度水平各样本分 别测定三次，分别取其平均值。分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如表 1所示。
[0027] 表1实施例1-4线性相关验证实验检测结果
上述检测结果显示，实施例1-4检测结果相关性均大于0. 990,但实施例2、3、4的检测 结果大于0. 999,与实施例1相比具有更好的线性相关性，这说明本发明试剂具有更好的线 性相关性。
[0028] 稳定性验证实验： 在2°C~8°C、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测四种实施例试剂的稳定性。 四种试剂每月选取同一样本测定其吸光度三次，取平均值，与新鲜的实施例1试剂检测结 果进行对比，从而确定试剂的稳定时间。检测数据如表2。
[0029] 表2稳定性验证实验检测结果
实验结果显示，实施例1试剂在2°C~8°C、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳 定，而实施例2、3、4试剂在2°C~8°C、无腐蚀性气体的避光环境中贮存24个月稳定，说明 在试剂中通过加入复合稳定剂能够有效的提高脂肪酶检测试剂盒的稳定性。
[0030] 综合以上分析，本发明提供的脂肪酶检测试剂盒，在试剂R2中通过加入复合稳定 剂能够有效的提高试剂盒的稳定性，线性范围较好，试剂的准确度也较好。因此，本发明提 供的脂肪酶检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。
【主权项】
1. 一种脂肪酶检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂RU试剂R2和校准品，其中试剂Rl 组成为： pH 7. 2 Tris 缓冲液 100mmol/L 牛磺脱氧胆酸 35mmol/L 氯化钠 40mmol/L 试剂R2组成为： pH 4. 0酒石酸缓冲液 9. 5mmol/L 共脂肪酶 500U/L 1，2邻-二月桂宗甘油_3_戊二酸-(6' -甲基试齒灵）-酯 0. 2mmol/L 4-甲酰苯基硼酸 0.01% 葡甘露聚糖 0? 5-1 mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通100 1% BSA 0.l-lg/L〇2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂Rl和试剂R2在使用时的比例 为 Rl :R2=2 :1。
【专利摘要】本发明公开了一种脂肪酶检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1、试剂R2、校准品。通过在试剂R2中加入由4-FPBA、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA组成的复合稳定剂，有效的提高了试剂盒的稳定性，其线性范围也较好，试剂的准确度高，有利于在市场中进一步的推广使用。
【IPC分类】G01N21/78
【公开号】CN105241873
【申请号】CN201510582658
【发明人】郁东, 董雯, 甘宜梧, 谢清华, 谭柏清
【申请人】郁东
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年9月14日