检测复方大蒜油胶囊中大蒜油含量的方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及中药领域，特别是一种检测复方大蒜油胶囊中大蒜油含量的方法。
【背景技术】
[0002] 大蒜油为百合科植物大蒜Allium sativum L.的鳞茎的提取物，具有多种药理功 能。复方大蒜油胶囊的主要有效成分为大蒜油，具有降低血脂，降低血液粘稠度，抑制血小 板聚集，治疗动脉粥样硬化等心脑血管疾病的作用；能够提高人体免疫力，具有显著的防 癌、抗癌功效，还可用于痢疾，急慢性肠炎等疾病的治疗。药物挥发油含量是《药典》及各级 中药材、饮片标准中要求的对含有挥发油类药材和饮片的一项检查项目，是较为普通的定 量检查，应用广泛但针对性不强，在运用传统方法测定样品中挥发油含量时，常因装置气密 性不好以及读数误差较大造成检测结果不准确，减慢了检验工作的进度，降低了检验工作 的效率，不利于生产成本的控制。
[0003] 使用挥发油测定法检测挥发油含量，需要用到挥发油测定装置，该装置是由三个 玻璃组件构成：圆底烧瓶、挥发油测定器和球形冷凝管，此检测装置存在三个磨砂接合部 位。利用该装置测定挥发油含量时，存在较大误差，具体如下：①由于不同玻璃仪器之间的 配套性较差，此检测装置中三个磨砂接合部位都存在因接合不够严密而漏气的问题，使得 装置中收集到的挥发油量少于实际含量；②此检测装置通过挥发油测定器的刻度管上的刻 度读取收集到的挥发油量，刻度管的刻度误差较大，校准后发现，刻度值之间的校正因子无 规律；③收集到的挥发油会有少量分散的粘附在装置的内壁上，读数前需要手动操作使之 聚集，在该过程中，挥发油有损失；④在很多情况下水相和有机相的分界面并非规则的凹液 面，致使读数困难；⑤二甲苯易燃烧，毒性大，使用二甲苯作为大蒜油的承载物质，危险性 高；⑥操作过程中存在较大的误差，需要检测员多次测定才可取得准确数据，重现性较差； 大蒜油也属于挥发油的一种，但至今尚没有如何准确检测复方大蒜油胶囊中的大蒜油含量 的有关报道。
【发明内容】
[0004] 针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种检测复方大蒜 油胶囊中大蒜油含量的方法，可有效解决复方大蒜油胶囊中的大蒜油含量的检测的问题。
[0005] 本发明解决的技术方案是，具体步骤如下：
[0006] (1)、对照品溶液的制备：取标不纯度为94. 2 %的大蒜素对照品（由国家食品 药品监督管理局提供的对照品物质）〇.〇l〇54g，用无水乙醇稀释至50ml，得到浓度为 198. 57 μ g/ml的对照品溶液；
[0007] (2)、供试品1溶液的制备：取复方大蒜油胶囊内容物（即复方大蒜油胶囊里的内 容物）I. 8g作为供试品1，加入80ml无水乙醇，在功率250W，频率50kHz下，超声处理20min， 加无水乙醇至l〇〇ml，摇匀，过滤，得初滤液，过滤，得续滤液，续滤液即为供试品1溶液；
[0008] (3)、供试品2溶液的制备：利用挥发油测定器（为现有产品，如常州普天仪器制造 有限公司的JB挥发油测定器）提取复方大蒜油胶囊内容物中的大蒜油，方法是，取20g复 方大蒜油胶囊内容物置于挥发油测定器中，加入300ml水与玻璃珠3~5粒，加热至沸腾， 再继续蒸馏30分钟，停止加热，放置15分钟，收集0.1 OOlg大蒜油作为供试品2,加入无水 乙醇80ml，在功率250W，频率50kHz下，超声处理20min，加无水乙醇至100mL，摇匀，即得供 试品2溶液；
[0009] (4)、色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0. 1 %甲酸溶液为 流动相，检测波长为210nm，柱温为40°C，理论板数按大蒜素峰计算不低于3000,其中，甲 醇-0. 1%甲酸溶液是由甲醇和0. 1%甲酸溶液以体积比75:25混合制成；所述的0. 1%甲 酸溶液的制备方法是，取〇. 5g甲酸，加水稀释至500ml ;
[0010] (5)、测定：
[0011] A、吸取对照品溶液注入高效液相色谱仪，反复进行5次进样，每次进样量为 10 μ 1，分别记录5次进样后所得的对照品溶液的5幅色谱图中大蒜素的峰面积，得出5幅 色谱图中大蒜素的峰面积的平均值，代入公式1计算出对照品标准偏差，将计算出的对照 品标准偏差代入公式2中计算5幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差（即RSD)，当 相对标准偏差小于等于3. 0%时，即可认定此高效液相色谱仪性能稳定，能够完成后续的检 测，记录5幅色谱图中大蒜素峰保留时间的区间；
[0012]公式 1:
[0014] 公式1中，
[0015] X1一一第1次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；
[0016] X2一一第2次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；
[0017] X3一一第3次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；
[0018] X4一一第4次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；
[0019] X5一一第5次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；
[0020] X----5次进样所得的5幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值；
[0021] 5--为进样5次；
[0022] α-------标准偏差；
[0023] 公式 2 :
[0024] RSD = α +XX 100%
[0025] 其中，RSD-------η次进样所得的η幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差；
[0026] X-------η次进样所得的η幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值；
[0027] 上述η为进样的次数；
[0028] Β、吸取供试品1溶液注入高效液相色谱仪，反复进行2次进样，每次进样量为 10 μ 1，分别在2次进样后所得的供试品1溶液的2幅色谱图中找出供试品1的大蒜素的色 谱峰，供试品1的大蒜素的色谱峰处于A步骤的5幅色谱图中大蒜素峰保留时间的区间内， 根据找出的供试品1的大蒜素的色谱峰，分别记录供试品1溶液的2幅色谱图中大蒜素的 峰面积，得出2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值，代入公式3计算出供试品1标准偏 差，将计算出的供试品1标准偏差代入公式2中，计算供试品1溶液的2幅色谱图中大蒜素 的峰面积的相对标准偏差（即RSD)，当相对标准偏差小于等于3. 0%时，即可确定供试品1 溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值为标准的供试品1溶液的大蒜素的峰面积；
[0029]公式 3 :
[0031] 公式3中，
[0032] X1一一第1次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；
[0033] X2 第2次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；
[0034] X----2次进样所得的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值；
[0035] α-------标准偏差；
[0036] C、吸取供试品2溶液注入高效液相色谱仪，反复进行2次进样，每次进样量为 10 μ 1，分别在2次进样后所得的供试品2溶液的2幅色谱图中找出供试品2的大蒜素的色 谱峰，供试品2的大蒜素的色谱峰处于A步骤的5幅色谱图中大蒜素峰保留时间的区间内， 根据找出的供试品2的大蒜素的色谱峰，分别记录供试品2溶液的2幅色谱图中大蒜素的 峰面积，得出2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值，代入公式3计算出供试品2标准偏 差，将计算出的供试品2标准偏差代入公式2中，计算供试品2溶液的2幅色谱图中大蒜素 的峰面积的相对标准偏差（即RSD)，当相对标准偏差小于等于3. 0%时，即可确定供试品2 溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值为标准的供试品2溶液的大蒜素的峰面积；
[0037] D、将上述B步骤所得的标准的供试品1溶液的大蒜素的峰面积和上述C步骤所得 的标准的供试品2溶液的大蒜素的峰面积代入公式4中计算，即得供试品1中大蒜油的含 量；
[0038] 公式4如下：
[0040] 其中：
[0041] Vl-------标准的供试品1溶液的大蒜素的峰面积；
[0042] V2-------标准的供试品2溶液的大蒜素的峰面积；
[0043] ml-------供试品1的取样量；
[0044] m2-------供试品2的取样量；
[0045] y------供试品1中大蒜油的含量。
[0046] 本发明在于利用HPLC的专属性和精确性，准确的测得样品（即供试品1)中大蒜 油的含量，避免了传统方法中挥发油的检测结果不准确，误差较大，重复性差的缺陷，且保 证了产品质量的稳定性，大大提高了工作效率，实现了生产过程中对产品质量和生产成本 的精确控制。
【具体实施方式】
[0047] 以下结合实施例对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0048] 实施例1
[0049] (I)、对照品溶液的制备：取标示纯度为94. 2%的大蒜素对照品0. 01054g，用无水 乙醇稀释至50ml，得到浓度为198. 57 μ g/ml的对照品溶液；
[0050] (2)、供试品1溶液的制备：取复方大蒜油胶囊内容物I. 8000g作为供试品1，加入 80ml无水乙醇，在功率250W，频率50kHz下，超声处理20min，加无水乙醇至100ml，摇匀，过 滤，得初滤液，过滤，得续滤液，续滤液即为供试品1溶液；
[0051] (3)、供试品2溶液的制备：利用挥发油测定器（为现有产品，如常州普天仪器制造 有限公司的JB挥发油测定器）提取复方大蒜油胶囊内容物中的大蒜油，方法是，取20g复 方大蒜油胶囊内容物置于挥发油测定器中，加入300ml水与玻璃珠4粒，加热至沸腾，再继 续蒸馏30分钟，停止加热，放置15分钟，收集0.1 OOlg大蒜油作为供试品2,加入无水乙醇 80ml，在功率250W，频率50kHz下，超声处理20min，加无水乙醇至100ml，摇匀，即得供试品 2溶液；
[0052] (4)、色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0. 1%甲酸溶液为流 动相，检测波长为210nm，柱温为40°C，理论板数按大蒜素峰计算不低于3000,其中，甲醇和 0. 1 %甲酸溶液的体积比为75:25 ;所述的0. 1 %甲酸溶液的制备方法是，取0. 5g甲酸，加水 稀释至500ml ;
[0053] (5)、测定：
[0054]