44] 在另一优选例中，所述试剂盒中还包括酶解试剂，所述酶解试剂选自：脱氧核糖核 酸酶、核酸酶P1、碱性磷酸酶、磷酸二酯酶、或其组合。
[0045] 本发明的第三方面，提供了一种检测独活提取物的遗传毒性的方法，所述方法包 括步骤:检测独活提取物中蛇床子素的含量。
[0046] 在另一优选例中，所述方法包括步骤：
[0047] (a)测定所述独活提取物中蛇床子素的含量C2,并与预定值C0进行比较；
[0048] (b)当所述含量C2高于C0时，则判定所述产品的质量不合格;当所述含量C2低于或 等于C0时，则判定所述产品的质量合格。
[0049] 在另一优选例中，所述C2为蛇床子素在所述独活提取物中的重量百分比。
[0050] 在另一优选例中，所述C0 < 10% (w/w)，优选地，所述CO< 5% (w/w)，更优选地，所 述C0S1%，所述C0可以为0.01%、0.05%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%、5%、10%。
[0051] 本发明的第四方面，提供了一种检测丹参提取物的遗传毒性的方法，所述方法包 括步骤:检测丹参提取物中丹参酮IIA的含量。
[0052]在另一优选例中，所述方法包括步骤：
[0053] (a)测定所述丹参提取物中丹参酮IIA的含量D2,并与预定值D0进行比较；
[0054] (b)当所述含量D2高于D0时，则判定所述产品的质量不合格；当所述含量D2低于或 等于D0时，则判定所述产品的质量合格。
[0055]在另一优选例中，所述D2为丹参酮IIA在所述丹参提取物中的重量百分比。
[0056] 在另一优选例中，所述D0 < 10% (w/w)，优选地，所述DO< 5% (w/w)，更优选地，所 述DOS1%，所述D0可以为0.01%、0.05%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%、5%、10%。应理解， 在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例）中具体描述的各技术特 征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
【附图说明】
[0057]图1显示了蛇床子素DNA加合物HPLC-MS检测的结果。a.蛇床子素+脱氧核苷中性丢 失扫描质谱图；b.蛇床子素疑似加合物[M+H]+产物离子图；c.蛇床子素疑似加合物[M+Na] + 产物离子图；d.蛇床子素疑似加合物[M+Na] +同位素峰产物离子图；e.蛇床子素与小牛胸腺 DNA反应体系中DNA加合物多反应监测(MRM)图。
[0058]图2显示了丹参酮ΠA-DNA加合物HPLC-MS检测的结果。a.丹参酮ΠA+脱氧核苷中 性丢失扫描质谱图；b.丹参酮ΠA疑似加合物[M+H]+产物离子图；c.丹参酮ΠA疑似加合物 [M+H] +同位素峰产物离子图；d.丹参酮ΠΑ与小牛胸腺DNA反应体系中DNA加合物多反应监 测(MRM)图；e.DNA加合物多反应监测阴性对照。
[0059]图3显示了彗星试验研究丹参酮ΠA对HepG2细胞遗传毒性结果。a为丹参酮ΠA实 验组;b.阴性对照组。
【具体实施方式】
[0060] 本发明人通过广泛而深入的研究，获得一种筛选天然产物中具有遗传毒性的成分 的方法，该方法基于脱氧核苷和同位素标记的脱氧核苷在分子量上的差值，利用高效液相 色谱-质谱联用法进行检测，能够高效的筛选天然产物中具有遗传毒性的成分，在此基础上 完成了本发明。
[0061] 本发明的目的是为了解决现有技术中存在的问题，提供一种利用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)检测DNA加合物，从而筛选天然产物中具有遗传毒性的成分。
[0062] 本发明提供了一种通过检测DNA加合物的形成来筛选天然产物中具有遗传毒性的 成分的方法。利用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)进行DNA加合物检测，高效液相色 谱-质谱联用法包括高效液相色谱-三重四级杆质谱及高效液相色谱-高分辨质谱，优选地 所述高效液相色谱-三重四级杆质谱采用中性丢失扫描检测DNA加合物，利用高效液相色 谱-高分辨质谱的质量亏损过滤技术，或精确中性丢失检测DNA加合物。对形成DNA加合物的 成分进行分离，得到具有遗传毒性的成分。
[0063]如本文所用，术语"高效液相色谱-质谱联用法"包括高效液相色谱-三重四级杆质 谱及高效液相色谱-高分辨质谱，其中所述高效液相色谱-三重四级杆质谱采用中性丢失扫 描检测DNA加合物，利用高效液相色谱-高分辨质谱的质量亏损过滤技术，或精确中性丢失 检测DNA加合物。并且根据检测到的DNA加合物的准分子离子和产物离子信息分析该DNA加 合物的结构，及形成DNA加合物的成分结构信息，并对该成分进行分离。
[0064]本发明的筛选天然产物中具有遗传毒性的成分的方法，包括以下步骤:①疑似DNA加合物的发现:孵育体系中加入肝微粒体，欲检测的天然产物，脱氧核苷，同位素标记的脱 氧核苷，还原型辅酶Π，37°C孵育，加入等体积冰乙腈终止反应，离心，过滤，HPLC-MS检测， 疑似加合物应同时具有相应的同位素峰，对疑似加合物的离子进行产物离子扫描;②验证： 孵育方法同上，以小牛胸腺DNA代替脱氧核苷及同位素标记的脱氧核苷，37°C孵育后，高速 离心，取上清液，提取DNA，酶解，固相萃取，HPLC-MS检测，与步骤①制备的样品进行比较，分 析目标成分或提取物是否能在体外与小牛胸腺DNA形成DNA加合物，如果在天然产物提取物 中检测到DNA加合物，就对提取物进行分离，将分离后的各成分按步骤①操作(不加同位素 标记的脱氧核苷），直至分离得到能形成疑似加合物的成分。并对该成分进行遗传毒性研 究。
[0065]本发明的主要优点在于：
[0066] (1)使用本发明的方法能够高效的检测出天然产物中具有遗传毒性的成分；
[0067] (2)针对天然产物成分复杂、活性成分含量低的特点，本发明的检测方法，样品需 求量少，操作简单，检测结果准确。
[0068] (3)本发明的方法可用于高效的发现DNA加合物。
[0069]下面结合具体实施例，进一步详陈本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。以下实施例中 所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。
[0070]实施例1独活中遗传毒性成分的筛选
[0071]独活为伞形科植物重齿毛当归AngelicapubescensMaxim,f.biserrataShan etYuan的干燥根，具有祛风除湿，通痹止痛的功效，临床用于风寒湿痹，腰膝疼痛，少阴伏 风头痛，风寒挟湿头痛等。本发明人对北豆根提取物及其所含蛇床子素、花椒毒素，补骨脂 素，伞形花内酯，二氢欧山芹素当归酸酯进行了研究。蛇床子素、花椒毒素，补骨脂素，伞形 花内酯，二氢欧山芹素当归酸酯结构如下：
[0072]
[0073]a.蛇床子素;b.花椒毒素;c.补骨脂素;d.伞形花内酯;e.二氢欧山芹素当归酸酯。 [0074] 1.1独活提取物及对照品疑似DNA加合物检测
[0075]独活药材100g，粉碎，过筛，10倍量的80 %乙醇提取2次，过滤，合并滤液，减压浓缩 至无醇味，加双蒸水稀释，过滤，滤液加至已活化的D101大孔树脂柱，双蒸水洗脱，洗脱液弃 去，再分别用20 %、40 %、60 %、80 %、95 %乙醇洗脱，减压浓缩洗脱液。
[0076]将各部分洗脱浓缩液及蛇床子素、花椒毒素、补骨脂素、伞形花内酯、二氢欧山芹 素当归酸酯，作为待测样本，分别进行检测：
[0077] 分析条件色谱条件AgilentProshellC18色谱柱（4.6mm*50mm，2.7ym);流动相 为乙腈-0.2 %乙酸(25:75);体积流量0.4mL/min;柱温30°C;进样量2yL。
[0078] 质谱条件电喷雾离子源(ESI)，正离子扫描;检测方式：中性丢失扫描（116u，ce值 为10，20，30ev)及产物离子扫描;干燥气温度350°C;干燥气体积流量10L/min;雾化器压力 45psi(lpsi= 6.895kPa);鞘气温度400°C;鞘气体积流量llL/min。
[0079] 孵育体系0.5ml，加入大鼠肝微