。所述生物素化Trastuzumab为偶联有生物素的Trastuzumab。所述AP-抗 ADA抗体为AP标记的抗ADA抗体，是将碱性磷酸酶AP与抗ADA (Anti-Trastuz umab )抗体偶联。 所述磁微粒试剂为表面有亲和素 SA基团的纳米磁微粒悬浮液。所述清洗液可以是清洗浓缩 液，在使用时进行配制。其中ADA指抗药物抗体Anti-Drug Antibody，这里特指Anti-Trastuzumab〇
[0029] 所述生物素化Trastuzumab是生物素与Trastuzumab分子表面的-NH2基团反应得 至 1J。所述抗Trastuzumab抗体校准品是由抗Trastuzumab抗体配制而成，用于得到校准曲线； 所述抗Trastuzumab抗体质控品是由抗Trastuzumab抗体配制而成。所述磁微粒试剂中磁微 粒的直径为0.1-0.5μπι，所述磁微粒试剂具有超顺磁性。所述化学发光底物中包括3-(2-螺 旋金刚烷)-4_甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1，2-二氧环乙烷二钠盐AMPPD，主要成分为金刚 烷(AMPH))，在碱性磷酸酶的催化下释放光子。
[0030] 所述检测试剂盒是基于磁微粒化学发光检测原理来实现ADA免疫含量检测的，其 检测原理如图2所示：将抗药物抗体Anti-Trastuzumab样本与磁微粒试剂Μ、生物素化 Trastuzumab R1混合，得到样本-M-R1复合物，进行洗涤，再加入酶结合物ΑΡ-抗ADA抗体R2， 得到样本-M-Rl -R2复合物，进行洗涤，再加入化学发光底物，测定发光结果。
[0031] 实施例三： 本试剂盒的性能评估： 1、本发明单抗药物曲妥珠单抗Trastuzumab试剂盒 (1)样本比对 本发明试剂盒对200例临床血清检测Trastuzumab的含量，并与国外知名公司同类产品 进行临床比对。结果表明，本发明Trastuzumab试剂盒检测浓度值与国外知名公司同类产品 检测浓度值具有良好的相关性，结果如图3。
[0032] (2)灵敏度:本发明Trastuzumab检测试剂盒L0D为5ng/mL，而酶联免疫法的灵敏度 为30ng/mL。
[0033] (3)线性:将一份高值血清按照1/4、1/16、1/64、1/256,用本发明Trastuzumab试剂 盒检测稀释样本，将理论浓度与实际检测浓度做线性回归，结果见图4。
[0034] (4)准确度:通过加样回收评估其准确度。以一份高值血清、一份中值血清、一份低 值血清一共三份血清(样本A)，按照1:9体积比分别添加到两份基础血清中（样本B)，混匀后 形成六份新样本，分别检测并计算其浓度。血清加样回收率在85%-115%之间。
[0035] 添加回收实验:加样回收率=添加后样本值八0.1*样本A+0.9样本B)*100%。
[0036] (5)精密度:对三种不同浓度的质控品进行检测，每天两次，分上下午检测，每次进 行4个重复，共检测10天，每种浓度共测定80次，计算变异系数，结果表明变异系数在15%以 内。
[0037] (6)稳定性:将本发明Trastuzumab试剂盒37°C放置7天后，测定高、中、低3个浓度 的质控，结果表明3种质控的检测浓度均在质控的浓度范围内。表明T r a s t u z um a b试剂盒稳 定好，符合临床要求。
[0038] (7)特异性：对高、中、低不同浓度值的血清添加不同浓度的胆红素、血红蛋白、类 风湿因子、脂、RF、HAMA检测结果显示，添加物质对本发明Trastuzumab试剂盒检测结果没有 影响。
[0039] 2、抗药抗体 Anti-Trastuzumab 试剂盒 (1) 样本比对 阴、阳性符合率:本发明试剂盒对200例临床血清检测Anti-Trastuzumab的含量，并与 国外知名公司同类产品进行临床比对，结果见下表。结果表明，本发明Ant i -Tras tuzumab试 剂盒阴性符合率99%(99/100)，阳性符合率98%(98/100)说明本试剂盒临床符合率高。
[0040]
(2) 灵敏度:本发明Anti-Trastuzumab试剂盒L0D为5ng/mL，而酶联免疫法的灵敏度为 30ng/mL〇
[0041 ] (3)线性:将一份高值血清按照 1/4、1/16、1/64、1/256,用Anti-Trastuzumab试剂 盒检测稀释样本，将理论浓度与实际检测浓度做线性回归，结果见图5。
[0042 ] (4 )准确度:通过加样回收评估其准确度。以一份高值血清、一份中值血清、一份低 值血清一共三份血清(样本A)，按照1:9体积比分别添加到两份基础血清中（样本B)，混匀后 形成六份新样本，分别检测并计算其浓度。血清加样回收率在85%-115%之间。
[0043] 添加回收实验:加样回收率=添加后样本值八0.1*样本A+0.9样本B)*100%。
[0044] (5)精密度:对三种不同浓度的质控品进行检测，每天两次，分上下午检测，每次进 行4个重复，共检测10天，每种浓度共测定80次，计算变异系数，结果表明变异系数在15%以 内。
[0045] (6)稳定性:将本发明4]11:;[-1^381：112111]^13试剂盒37°〇放置7天后，测定高、中、低3个 浓度的质控，结果表明3种质控的检测浓度均在质控的浓度范围内。表明Anti-Trastuzumab 试剂盒稳定好，符合临床要求。
[0046] (7)特异性:对高、中、低不同浓度值的血清添加不同浓度的胆红素、血红蛋白、类 风湿因子、脂、RF、HAMA检测结果显示，添加物质对本发明Anti-Trastuzumab试剂盒检测结 果没有影响。
[0047] 一、采用这些试剂盒完成所有流程得到结果的时间为50min，相比ELISA法大大缩 短了反应时间； 二、 本发明采用碱性磷酸酶AP-金刚烷AMPPD系统，相比EL ISA检测系统的灵敏度高10 倍； 三、 本发明为全自动封闭操作系统，可靠性高，稳定性好，检测结果重复性好； 四、 本发明从稀释、加样、孵育、清洗以及检测步骤实现了全自动化，避免了人为操作带 来的结果偏差。
[0048]以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发 明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领 域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
【主权项】
1. 一种单抗药物曲妥珠单抗Trastuzumab试剂盒，其特征在于，包括生物素化抗 Trastuzumab抗体、Trastuzumab校准品、Trastuzumab质控品、AP-抗人IgG抗体、磁微粒试 剂、化学发光底物和清洗液，所述生物素化抗Trastuzumab抗体为偶联有生物素的抗 Trastuzumab抗体，所述AP-抗人IgG抗体为AP标记的抗人IgG抗体，所述磁微粒试剂为表面 有亲和素的纳米磁微粒悬浮液。2. 根据权利要求1所述的单抗药物曲妥珠单抗Trastuzumab试剂盒，其特征在于，所述 生物素化抗Trastuzumab抗体是生物素与抗Trastuzumab抗体分子表面的-NH2基团反应得 到。3. 根据权利要求1所述的单抗药物曲妥珠单抗Trastuzumab试剂盒，其特征在于，所述 Trastuzumab校准品是由含有Trastuzumab的人血清配制而成，用于得到校准曲线；所述 Trastuzumab质控品是由含有Trastuzumab的人血清配制而成。4. 根据权利要求1所述的单抗药物曲妥珠单抗Trastuzumab试剂盒，其特征在于，所述 磁微粒试剂中磁微粒的直径为0.1 -0.5μπι，所述磁微粒试剂具有超顺磁性。5. 根据权利要求1所述的单抗药物曲妥珠单抗Trastuzumab试剂盒，其特征在于，所述 化学发光底物中包括3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1，2-二氧环乙烷 二钠盐AMPPD。6. 一种抗药抗体Anti-Trastuzumab试剂盒，其特征在于，包括生物素化Trastuzumab、 抗Trastuzumab抗体校准品、抗Trastuzumab抗体质控品、AP-抗ADA抗体、磁微粒试剂、化学 发光底物和清洗液，所述生物素化Trastuzumab为偶联有生物素的Trastuzumab，所述AP-抗 ADA抗体为AP标记的抗ADA抗体，所述磁微粒试剂为表面有亲和素的纳米磁微粒悬浮液。7. 根据权利要求6所述的抗药抗体Anti-Trastuzumab试剂盒，其特征在于，所述生物素 化Trastuzumab是生物素与Trastuzumab分子表面的-順2基团反应得到。8. 根据权利要求6所述的抗药抗体Anti-Trastuzumab试剂盒，其特征在于，所述抗 Trastuzumab抗体校准品是由抗Trastuzumab抗体配制而成，用于得到校准曲线；所述抗 Trastuzumab抗体质控品是由抗Trastuzumab抗体配制而成。9. 根据权利要求6所述的抗药抗体Anti-Trastuzumab试剂盒，其特征在于，所述磁微粒 试剂中磁微粒的直径为0.1 -0.5μπι，所述磁微粒试剂具有超顺磁性。10. 根据权利要求6所述的抗药抗体Anti-Trastuzumab试剂盒，其特征在于，所述化学 发光底物中包括3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1，2-二氧环乙烷二钠 盐AMPPD。
【专利摘要】本发明公开了一种曲妥珠单抗试剂盒及其抗药抗体试剂盒，包括生物素化抗Trastuzumab抗体或Trastuzumab、校准品、质控品、AP-抗人IgG抗体或AP-抗ADA抗体、磁微粒试剂、化学发光底物和清洗液。通过上述方式，本发明采用全自动磁微粒化学发光检测方法，选取碱性磷酸酶AP-金刚烷AMPPD体系，具有稳定性好、灵敏度高、重复性好等优点，同时大大缩短了检测时间，完成一个测试所需的总时间在50分钟以内，而且操作简易方便，真正实现了检测全自动化。
【IPC分类】G01N33/543
【公开号】CN105467114
【申请号】CN201510788468
【发明人】秦枫, 马竹凤, 王静, 张伟, 柳乐, 徐娟, 李庆春
【申请人】苏州浩欧博生物医药有限公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年11月17日